酵母的提取及組分鑒定

酵母的提取及組分鑒定第1頁(yè)，共6頁(yè)，2023年，2月20日，星期四一、目的與要求了解RNA提取的原理，掌握RNA組分鑒定的方法第2頁(yè)，共6頁(yè)，2023年，2月20日，星期四二、實(shí)驗(yàn)原理酵母細(xì)胞中所含的核酸主要是RNA,DNA含量很少，故本實(shí)驗(yàn)采用酵母提取RNA。由于酵母細(xì)胞中所含的核蛋白不溶于水和稀酸，但能溶于稀堿，所以先用稀堿加熱煮沸處理，使RNA成為可溶性的鈉鹽而與酵母中其它的成分分離。然后加乙醇沉淀溶液中的RNA，最后加酸將其完全水解，并用下列方法鑒定其中組分：(一)鉬酸銨試劑與無(wú)機(jī)磷酸結(jié)合生成的磷鉬酸易被還原生成鉬藍(lán)，以鑒定核酸中的磷。(二)3,5-二羥基甲苯與核糖在濃酸中共熱呈綠色，以鑒定核糖的存在。(三)嘌呤堿與硝酸銀共熱產(chǎn)生褐色的嘌呤銀沉淀，以鑒定嘌呤的存在。第3頁(yè)，共6頁(yè)，2023年，2月20日，星期四三、操作步驟(一)酵母中RNA的制備1.取0.5g干酵母置研缽中，加入0.04mol/LNaOH4ml，磨3～5min，使其成勻漿；2.將酵母勻漿倒入1支大試管中，在沸水中加熱30min；3.把大試管中勻漿分別放入2支小試管中，配平；4.2000r/min離心15min，將兩上清液分別倒入另兩小試管中，棄去沉淀；5.各加3mol/LHAc2滴，立即搖勻酸化，用石蕊試紙檢查。6.上述溶液猛力搖勻后，徐徐倒入兩支各盛有2.5ml酸性乙醇的試管中，即有白色沉淀析出。7.2000r/min離心15min，傾去上清液，作下一步實(shí)驗(yàn)。第4頁(yè)，共6頁(yè)，2023年，2月20日，星期四(二)RNA的水解兩管沉淀物中各加入1.5mol/LH2SO42.5ml后合并，沸水浴10min，使其充分水解。(三)RNA組分鑒定（取試管3支編號(hào)）1.磷酸試驗(yàn)：1號(hào)管，取鉬酸銨試劑10滴，加RNA水解液10滴搖勻，再加4%維生素C6滴混勻后，置沸水浴中加熱5～10min，觀察顏色變化。2.核糖試驗(yàn)：2號(hào)管，取3,5-二羥基甲苯試劑6滴，加RNA水解液10滴搖勻后，置沸水浴中加熱5～10min，觀察顏色變化。3.嘌呤試驗(yàn)：3號(hào)管，取5%AgNO310滴，加氨水2-3滴（至沉淀消散后），再加RNA水解液10滴搖勻后，置沸水浴中加熱約5～10min，觀察顏色變化。第5頁(yè)，共6頁(yè)，2023年，2月20日，星期四四、結(jié)果與計(jì)算管號(hào)1號(hào)2號(hào)3號(hào)顏色五、注意事項(xiàng)(一)酵母研磨要充分；(二)沸水中加熱時(shí)要時(shí)常搖動(dòng)試管；