生物化學(xué)與分子生物學(xué)第三章酶

第三章

酶(enzyme)酶的研究簡(jiǎn)史公元前兩千多年，我國(guó)已有釀酒記載。1833年，AnselmePayen提純了麥芽淀粉糖化酶（淀粉酶）。

1878年，Wilhelm

Kühne首次提出Enzyme一詞。1894年，EmilFischer證明了酶的專一性，酶與底物之間作用的鎖鑰關(guān)系。1897年，Buchner兄弟用不含細(xì)胞的酵母提取液，實(shí)現(xiàn)了發(fā)酵。

1913年，LeonorMichaelis和MaudMenten推導(dǎo)出酶反應(yīng)的動(dòng)力學(xué)方程式。1926~1930年，JamesSumner和JohnH.Northrop分別將脲酶和胃蛋白酶、胰蛋白酶制成結(jié)晶，確定了酶的蛋白質(zhì)本質(zhì)。1941年，GeorgeBeadle和EdwardTatum的“一個(gè)基因一個(gè)酶”假說(shuō)首次將蛋白質(zhì)與基因聯(lián)系在一起，推動(dòng)了生物化學(xué)與遺傳學(xué)的結(jié)合。

1982年，Cech首次發(fā)現(xiàn)RNA也具有酶的催化活性，提出核酶(ribozyme)的概念。1995年，JackW.Szostak研究室首先報(bào)道了具有DNA連接酶活性DNA片段，稱為脫氧核酶(deoxyribozyme)。2酶的概念：目前將生物催化劑分為兩類：

酶、核酶酶（enzyme）是一類由活細(xì)胞產(chǎn)生的生物催化劑,對(duì)特異的底物(substrate)在溫和條件下起著高效催化作用的蛋白質(zhì)。3第一節(jié)

酶的分子結(jié)構(gòu)與功能4單體酶（monomericenzyme）

由一條多肽鏈組成，只具有三級(jí)結(jié)構(gòu)的酶。

如核糖核酸酶、一些腸道蛋白水解酶、溶菌酶。

寡聚酶（oligomericenzyme）

由多條相同或不同的亞基以非共價(jià)鍵連接組成的酶。

一、酶的分子組成5多酶復(fù)合物（multienzymecomplex），或稱多酶體系（multienzymesystem）

由催化不同化學(xué)反應(yīng)的多種酶組成的寡聚酶。如：丙酮酸脫氫酶復(fù)合物

同工酶（isoenzyme，isozyme）

催化相同化學(xué)反應(yīng)但亞基種類不盡相同的一組酶。

多功能酶（multifunctionalenzyme）或稱串聯(lián)酶（tandemenzyme）

一些多酶體系在進(jìn)化過(guò)程中由于基因的融合，多種不同催化功能存在于一條多肽鏈中，這類酶稱為多功能酶。如：哺乳動(dòng)物脂肪酸合成酶6

Structureofthepyruvatedehydrogenasecomplex(a)CryoelectronmicrographofPDHcomplexesisolatedfrombovinekidney.Incryoelectronmicroscopy

(b)ThreedimensionalimageofPDHcomplex,showingthesubunitstructure:E1,pyruvatedehydrogenase;E2,dihydrolipoyltransacetylase;andE3,dihydrolipoyldehydrogenase.ThismodelwaspreparedbyZ.H.Zhouetal.(2001);inanothermodel,proposedbyJ.L.S.Milneetal.(2002),theE3subunitsarelocatedmoretowardtheperiphery.(c)E2consistsofthreetypesofdomainslinkedbyshortpolypeptidelinkers:acatalyticacyltransferasedomain;abindingdomain,involvedinthebindingofE2toE1andE3;andoneormore(dependingonthespecies)lipoyldomains.7軟脂酸合成酶ACPSH大腸桿菌：有7種酶蛋白(脂肪酰基轉(zhuǎn)移酶、丙二酰CoA酰基轉(zhuǎn)移酶、β酮脂肪酰合成酶、β酮脂肪酰還原酶、β羥脂?；撍?、脂烯酰還原酶和硫酯酶)，聚合在一起構(gòu)成多酶體系。哺乳動(dòng)物7種酶活性都在一條多肽鏈上，屬多功能酶，由一個(gè)基因編碼；有活性的酶為兩相同亞基首尾相連組成的二聚體。8（一）結(jié)構(gòu)組成僅含氨基酸組分的酶稱為單純酶有些酶其分子結(jié)構(gòu)僅由氨基酸組成，沒(méi)有輔助因子。這類酶稱為單純酶（simpleenzyme）。如脲酶、一些蛋白酶、淀粉酶、酯酶和核糖核酸酶等。一、酶的分子組成中常含有輔助因子9（二）結(jié)構(gòu)組成中既含氨基酸組分又含非氨基酸組分的酶稱為結(jié)合酶

結(jié)合酶（conjugatedenzyme）是除了在其組成中含有由氨基酸組成的蛋白質(zhì)部分外，還含有非蛋白質(zhì)部分

蛋白質(zhì)部分：酶蛋白(apoenzyme)輔助因子(cofactor)

金屬離子小分子有機(jī)化合物全酶(holoenzyme)決定反應(yīng)的特異性及其催化機(jī)制

決定反應(yīng)的性質(zhì)和反應(yīng)類型

10輔助因子分類（按其與酶蛋白結(jié)合的緊密程度）

輔酶

(coenzyme):與酶蛋白結(jié)合疏松，可用透析或超濾的方法除去。

輔基

(prostheticgroup):與酶蛋白結(jié)合緊密，不能用透析或超濾的方法除去。11一些化學(xué)穩(wěn)定的小分子有機(jī)化合物是重要的輔酶或輔基。

輔酶在反應(yīng)過(guò)程中可與多種酶蛋白結(jié)合，作為底物在不同的酶之間傳遞電子、質(zhì)子或化學(xué)基團(tuán)。輔基在反應(yīng)中不能離開(kāi)與其結(jié)合的酶蛋白。

12輔酶或輔基縮寫(xiě)轉(zhuǎn)移的基團(tuán)所含的維生素?zé)燉０废汆堰识塑账幔ㄝo酶I）NAD+H+，電子煙酰胺（維生素PP）煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（輔酶II）NADP+H+，電子煙酰胺（維生素PP）黃素腺嘌呤二核苷酸FAD氫原子維生素B2焦磷酸硫胺素TPP醛基維生素B1磷酸吡哆醛氨基維生素B6輔酶ACoA?；核嵘锼囟趸忌锼厮臍淙~酸FH4一碳單位葉酸輔酶B12氫原子，烷基維生素B12小分子有機(jī)化合物輔酶（輔基）的種類與作用

13金屬酶(metalloenzyme)金屬離子與酶結(jié)合緊密，提取過(guò)程中不易丟失。

金屬激活酶(metal-activatedenzyme)金屬離子為酶的活性所必需，但與酶的結(jié)合不甚緊密。金屬離子的作用穩(wěn)定酶的構(gòu)象、活性中心；參與催化反應(yīng)，傳遞電子；在酶與底物間起橋梁作用；中和陰離子，降低反應(yīng)中的靜電斥力等。14金屬酶金屬離子金屬激活酶金屬離子過(guò)氧化氫酶Fe2+丙酮酸激酶K+，Mg2+過(guò)氧化物酶Fe2+丙酮酸羧化酶Mn2+，Zn2+谷胱苷肽過(guò)氧化物酶Se蛋白激酶Mg2+,Mn2+己糖激酶Mg2+精氨酸酶Mn2+固氮酶Mo2+磷脂酶CCa2+核糖核苷酸還原酶Mn2+細(xì)胞色素氧化酶Cu2+羧基肽酶Zn2+脲酶Ni2+碳酸酐酶Zn2+檸檬酸合酶K+金屬酶和金屬激活酶

15——酶分子中能與底物特異地結(jié)合并催化底物轉(zhuǎn)化為產(chǎn)物的區(qū)域。酶的活性中心

（activecenter）溶菌酶的一級(jí)結(jié)構(gòu)和空間結(jié)構(gòu)二、酶的活性中心是酶分子中執(zhí)行其催化功能的部位16酶的活性中心是酶分子中具有三維結(jié)構(gòu)的很小區(qū)域

組成酶活性中心的必需基團(tuán)在一級(jí)結(jié)構(gòu)上可能相距很遠(yuǎn)，但在形成三級(jí)結(jié)構(gòu)時(shí)相互接近，形成具有三維結(jié)構(gòu)的區(qū)域，且多是酶分子中的裂隙或凹陷所形成的疏水口袋。

溶菌酶的活性中心

17*必需基團(tuán)（essentialgroup）：活性中心內(nèi)的必需基團(tuán)：活性中心外的必需基團(tuán)：

結(jié)合基團(tuán)（bindinggroup）與底物相結(jié)合

催化基團(tuán)（catalyticgroup）催化底物轉(zhuǎn)變成產(chǎn)物位于活性中心以外,維持酶活性中心應(yīng)有的空間構(gòu)象所必需?！c酶活性密切相關(guān)的基團(tuán)。18底物活性中心以外的必需基團(tuán)結(jié)合基團(tuán)催化基團(tuán)活性中心19溶菌酶的活性中心溶菌酶的活性中心是一裂隙，可以容納肽多糖的6個(gè)單糖基（A，B，C，D，E，F(xiàn)），并與之形成氫鍵和vanderwaals力。催化基團(tuán)是35位Glu，52位Asp；101位Asp和108位Trp是結(jié)合基團(tuán)。20胰凝乳蛋白酶的空間結(jié)構(gòu)21三、同工酶(isoenzyme)*臨床意義：*定義：催化相同的化學(xué)反應(yīng)，而酶蛋白的分子結(jié)構(gòu)理化性質(zhì)乃至免疫學(xué)性質(zhì)不同的一組酶。*舉例：乳酸脫氫酶(LDH1～

LDH5)

肌酸激酶(CK1～CK3)22根據(jù)國(guó)際生化學(xué)會(huì)的建議，同工酶是由不同基因編碼的多肽鏈，或由同一基因轉(zhuǎn)錄生成的不同mRNA所翻譯的不同多肽鏈組成的蛋白質(zhì)。同工酶存在于同一種屬或同一個(gè)體的不同組織或同一細(xì)胞的不同亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)中，它使不同的組織、器官和不同的亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)具有不同的代謝特征。這為同工酶用來(lái)診斷不同器官的疾病提供了理論依據(jù)。23HHHHHHHMHHMMHMMMMMMMLDH1

(H4)LDH2(H3M)

LDH3(H2M2)LDH4(HM3)LDH5

(M4)乳酸脫氫酶的同工酶*舉例：乳酸脫氫酶(LDH1～

LDH5)24同工酶在生物體中的分布與表達(dá)具有時(shí)空特異性

同工酶存在于同一種屬的不同個(gè)體，同一個(gè)體的不同組織、同一細(xì)胞的不同亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)，以及同一組織、細(xì)胞的不同發(fā)育階段。

LDH同工酶紅細(xì)胞白細(xì)胞血清骨骼肌心肌肺腎肝脾LDH1

（H4）431227.10731443210LDH2

（H3M）444934.70243444425LDH3（H2M2）123320.95335121110LDH4

（HM3）1611.7160512720LDH5

（M4）005.7790120565人體各組織器官LDH同工酶譜（活性%）

25檢測(cè)組織器官同工酶的變化有重要的臨床意義

在代謝調(diào)節(jié)上起著重要的作用；用于解釋發(fā)育過(guò)程中階段特有的代謝特征；同工酶譜的改變有助于對(duì)疾病的診斷；同工酶可以作為遺傳標(biāo)志，用于遺傳分析研究。心肌梗死和肝病病人血清LDH同工酶譜的變化1酶活性心肌梗死酶譜正常酶譜肝病酶譜234526第二節(jié)

酶的工作原理

TheMechanismofEnzymeAction27一、酶促反應(yīng)的特點(diǎn)（一）酶與一般催化劑的共同點(diǎn)：在反應(yīng)前后沒(méi)有質(zhì)和量的變化；只能催化熱力學(xué)允許的化學(xué)反應(yīng)；只能加速可逆反應(yīng)的進(jìn)程，而不改變反應(yīng)的平衡點(diǎn)。28（二）酶作用的特點(diǎn)：酶促反應(yīng)具有極高的效率；酶促反應(yīng)具有高度的特異性；酶促反應(yīng)的可調(diào)節(jié)性；酶促反應(yīng)要求嚴(yán)格的環(huán)境條件；酶促反應(yīng)無(wú)副反應(yīng)。291.酶的效率：活化能的降低可使反應(yīng)速率呈指數(shù)上升

化學(xué)反應(yīng)速率與自由能變化的關(guān)系

d[S]kBT

V=

=[S]e

G*/RTdth[S]代表底物（substrate）濃度kB是玻爾茨曼常數(shù)（Boltzmannconstant）（1.3811023JK-1）h是普朗克常數(shù)（Planckconstant）（6.6261034J.s）G*代表反應(yīng)的活化能

在標(biāo)準(zhǔn)狀態(tài)下反應(yīng)活化能降低1倍，反應(yīng)速率可提高約5000倍，呈現(xiàn)指數(shù)上升。

一般講，酶的催化效率比非催化反應(yīng)高1051017倍

30酶的催化效率可用酶的轉(zhuǎn)換數(shù)(turnovernumber)

來(lái)表示。酶的轉(zhuǎn)換數(shù)是指在酶被底物飽和的條件下，每個(gè)酶分子每秒鐘將底物轉(zhuǎn)化為產(chǎn)物的分子數(shù)。312.酶對(duì)底物有高度的選擇性酶的特異性或?qū)Ｒ恍裕╯pecificity）

酶對(duì)其所催化的底物和反應(yīng)類型具有嚴(yán)格的選擇性，一種酶只作用于一種化合物，或一類化學(xué)鍵，催化一定的化學(xué)反應(yīng)并產(chǎn)生一定結(jié)構(gòu)的產(chǎn)物的現(xiàn)象。

32（一）有的酶對(duì)其底物和反應(yīng)類型具有極其嚴(yán)格的選擇性

有的酶僅對(duì)一種特定結(jié)構(gòu)的底物起催化作用，產(chǎn)生具有特定結(jié)構(gòu)的產(chǎn)物。酶對(duì)底物的這種極其嚴(yán)格的選擇性稱為絕對(duì)特異性（absolutespecificity）。

脲酶僅水解尿素，對(duì)甲基尿素則無(wú)反應(yīng)。

33有些酶僅對(duì)底物分子的某種構(gòu)型起催化作用

酶對(duì)立體構(gòu)型所具有的特異性要求稱為立體異構(gòu)特異性（stereospecificity）

延胡索酸酶僅對(duì)延胡索酸(反丁烯二酸)起催化作用，將其加水生成蘋(píng)果酸，對(duì)順丁烯二酸則無(wú)作用

34（二）多數(shù)酶具有相對(duì)特異性

多數(shù)酶可對(duì)一類化合物或一種化學(xué)鍵起催化作用，這種對(duì)底物分子不太嚴(yán)格的選擇性稱為相對(duì)特異性（relativespecificity）。

脂肪酶不僅水解脂肪，也可水解簡(jiǎn)單的酯。

胰蛋白酶水解由堿性氨基酸（精氨酸和賴氨酸）的羧基所形成的肽鍵。

35人體內(nèi)有多種蛋白激酶，它們均催化底物蛋白質(zhì)絲氨酸（或蘇氨酸）殘基上羥基的磷酸化

蛋白激酶共有序列蛋白激酶A-X-R-(R/K)-X-(S/T)-X-蛋白激酶C-X-(R/K1-3,X0-2)-(S/T)-(X0-2,R/K1-3)-X蛋白激酶G-X-(R/K)2-3-X-(S/T)-X-Ca2+/鈣調(diào)素蛋白激酶H-X-R-X-X-(S/T)-X-363.酶促反應(yīng)的可調(diào)節(jié)性酶促反應(yīng)受多種因素的調(diào)控，以適應(yīng)機(jī)體對(duì)不斷變化的內(nèi)外環(huán)境和生命活動(dòng)的需要。374.酶具有不穩(wěn)定性酶的本質(zhì)是蛋白質(zhì)，會(huì)在環(huán)境因子作用下發(fā)生變性。通常酶促反應(yīng)都在常溫常壓和接近中性條件下進(jìn)行。38二、酶通過(guò)促進(jìn)底物形成過(guò)渡態(tài)而提高反應(yīng)速率——降低反應(yīng)的活化能(activationenergy)

活化能:底物分子從初態(tài)轉(zhuǎn)變到活化態(tài)所需的能量。反應(yīng)總能量改變

非催化反應(yīng)活化能

酶促反應(yīng)活化能

一般催化劑催化反應(yīng)的活化能

能量

反應(yīng)過(guò)程

底物產(chǎn)物

酶促反應(yīng)活化能的改變

結(jié)合能39酶的活性中心對(duì)底物具有高度的特異性

酶活性中心與底物結(jié)合時(shí)，發(fā)生構(gòu)象改變，相互誘導(dǎo)契合，增加與底物的互補(bǔ)性

大多數(shù)情況下底物與酶活性中心最初的結(jié)合是非共價(jià)性的

氫鍵離子鍵疏水鍵vanderWaals力

酶與底物結(jié)合的力401．酶與底物結(jié)合時(shí)相互誘導(dǎo)發(fā)生構(gòu)象改變

誘導(dǎo)契合假說(shuō)（induced-fithypothesis）

酶-底物復(fù)合物

E+SE+PES

酶與底物相互接近時(shí)，其結(jié)構(gòu)相互誘導(dǎo)、相互變形和相互適應(yīng)，進(jìn)而相互結(jié)合。這一過(guò)程稱為酶-底物結(jié)合的誘導(dǎo)契合假說(shuō)。（二）酶-底物復(fù)合物的形成有利于底物轉(zhuǎn)變成過(guò)渡態(tài)4142羧肽酶的誘導(dǎo)契合模式底物43Inducedfitinhexokinase.（果糖激酶）HexokinasehasaU-shapedstructure(PDBID2YHX).TheendspinchtowardeachotherinaconformationalchangeinducedbybindingofD-glucose(red)(derivedfromPDBID1HKGandPDBID1GLK).44形成酶-底物過(guò)渡態(tài)復(fù)合物過(guò)程中釋放結(jié)合能

底物與酶的活性中心相互誘導(dǎo)契合形成過(guò)渡態(tài)化合物，過(guò)渡態(tài)與酶的活性中心以次級(jí)鍵(氫鍵、離子鍵、疏水鍵)相結(jié)合，這一過(guò)程是釋能反應(yīng)，所釋放的能量稱為結(jié)合能(binding

energy)。結(jié)合能可以抵消一部分活化能，是酶反應(yīng)降低活化能的主要能量來(lái)源。酶不能使底物形成過(guò)渡態(tài)，則沒(méi)有結(jié)合能的釋放，也就不能催化反應(yīng)的進(jìn)行。45

2、鄰近效應(yīng)、定向排列和表面效應(yīng)有利于底物形成過(guò)渡態(tài)酶在反應(yīng)中將諸底物結(jié)合到酶的活性中心，使它們相互接近并形成有利于反應(yīng)的正確定向關(guān)系。這種鄰近效應(yīng)(proximityeffect)與定向排列(orientationarrange)實(shí)際上是將分子間的反應(yīng)變成類似于分子內(nèi)的反應(yīng)，從而提高反應(yīng)速率。46鄰近效應(yīng)（proximityeffect）和定向排列（orientationarrange）將分子間的反應(yīng)變成類似分子內(nèi)的反應(yīng)，使反應(yīng)速率顯著提高。

47在疏水環(huán)境中進(jìn)行酶反應(yīng)有很大的優(yōu)越性，此現(xiàn)象稱為表面效應(yīng)（surfaceeffect）。

酶的活性中心多位于其分子內(nèi)部的疏水“口袋”中，酶反應(yīng)在酶分子內(nèi)部的疏水環(huán)境中進(jìn)行。疏水環(huán)境可使底物分子脫溶劑化（desolvation），排除周?chē)罅克肿訉?duì)酶和底物分子中功能基團(tuán)的干擾性吸引或排斥，防止二者之間形成水化膜，利于底物和酶分子之間的直接密切接觸和相互結(jié)合。

3、表面效應(yīng)（surfaceeffect）48（三）酶的催化機(jī)制呈多元催化作用一般酸-堿催化作用(generalacid-basecatalysis)共價(jià)催化作用(covalentcatalysis)

親核催化作用(nucleophiliccatalysis)49胰凝乳蛋白酶的共價(jià)催化和酸-堿催化機(jī)制50第三節(jié)酶促反應(yīng)動(dòng)力學(xué)TheKineticsofEnzymaticReactions51概念：研究各種因素對(duì)酶促反應(yīng)速度的影響，并加以定量的闡述。影響因素包括有：酶濃度、底物濃度、pH、溫度、抑制劑、激活劑等。※研究一種因素的影響時(shí)，其余各因素均恒定。52一、底物濃度對(duì)反應(yīng)速度的影響單底物、單產(chǎn)物反應(yīng)酶促反應(yīng)速度一般在規(guī)定的反應(yīng)條件下，用單位時(shí)間內(nèi)底物的消耗量和產(chǎn)物的生成量來(lái)表示反應(yīng)速度取其初速度，即底物的消耗量在5﹪以內(nèi)的反應(yīng)速度底物濃度遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于酶濃度研究前提：在其他因素不變的情況下，底物濃度對(duì)反應(yīng)速度的影響呈矩形雙曲線關(guān)系。53當(dāng)?shù)孜餄舛容^低時(shí)：反應(yīng)速度與底物濃度成正比；反應(yīng)為一級(jí)反應(yīng)。[S]VVmax54隨著底物濃度的增高：反應(yīng)速度不再成正比例加速；反應(yīng)為混合級(jí)反應(yīng)。[S]VVmax55當(dāng)?shù)孜餄舛雀哌_(dá)一定程度：反應(yīng)速度不再增加，達(dá)最大速度；反應(yīng)為零級(jí)反應(yīng)[S]VVmax56單底物、單產(chǎn)物反應(yīng)；酶促反應(yīng)速率一般在規(guī)定的反應(yīng)條件下，用單位時(shí)間內(nèi)底物的消耗量和產(chǎn)物的生成量來(lái)表示；反應(yīng)速率取其初速率，即底物的消耗量很?。ㄒ话阍?﹪以內(nèi)）時(shí)的反應(yīng)速率底物濃度遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于酶濃度。研究前提：57※1913年Michaelis和Menten提出反應(yīng)速度與底物濃度關(guān)系的數(shù)學(xué)方程式，即米－曼氏方程式，簡(jiǎn)稱米氏方程式。[S]:底物濃度V:不同[S]時(shí)的反應(yīng)速度Vmax:最大反應(yīng)速度Ｋm:米氏常數(shù)Ｖ──Vmax[S]Km+[S]＝58中間產(chǎn)物解釋酶促反應(yīng)中底物濃度和反應(yīng)速率關(guān)系的最合理學(xué)說(shuō)是中間產(chǎn)物學(xué)說(shuō)：

E+S

k1k2k3ESE+P（一）米－曼氏方程式揭示單底物反應(yīng)的動(dòng)力學(xué)特性59（一）米－曼氏方程式的推導(dǎo)推導(dǎo)基于兩個(gè)假設(shè)：E與S形成ES復(fù)合物的反應(yīng)是快速平衡反應(yīng)而ES分解為E及P的反應(yīng)為慢反應(yīng)，反應(yīng)速度取決于慢反應(yīng)即

V＝k3[ES](1)S的總濃度遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于E的總濃度，因此在反應(yīng)的初始階段，S的濃度可認(rèn)為不變即[S]＝[St]

酶促反應(yīng)模式：E+SESE+Pk1k2k360推導(dǎo)過(guò)程：穩(wěn)態(tài)：是指ES的生成速度與分解速度相等，即[ES]恒定。

K1([Et]－[ES])[S]＝K2[ES]+K3[ES]K2+K3

＝Km(米氏常數(shù))K1令:則(2)變?yōu)?（[Et]－[ES]）[S]＝Km[ES](2)＝（[Et]－[ES]）[S]K2+K3[ES]K1整理得：61[ES]＝————[Et][S]Km+[S](3)整理得:Vmax[S]Km+[S]V＝————

將(3)代入(1)得V＝————K3[Et][S]Km+[S](4)當(dāng)?shù)孜餄舛群芨?，將酶的活性中心全部飽和時(shí)，即[Et]＝[ES],反應(yīng)達(dá)最大速度Vmax＝K3[ES]＝K3[Et](5)將(5)代入(4)得米氏方程式:62當(dāng)反應(yīng)速度為最大反應(yīng)速度一半時(shí):1.Km值的推導(dǎo)：Km＝[S]∴Km值等于酶促反應(yīng)速度為最大反應(yīng)速度一半時(shí)的底物濃度，單位是mol/L。2＝Km+[S]

VmaxVmax[S]VmaxV[S]KmVmax/2632．Km是酶的特征性常數(shù)

在酶的結(jié)構(gòu)、溶液pH、溫度等條件不變的情況下，酶促反應(yīng)底物的Km不因反應(yīng)中酶濃度的改變而不同。

同一酶對(duì)其所催化的不同底物有不同的Km；不同酶對(duì)同一底物也有其各自的Km

。Km的范圍多在10-6～10-2mol/L之間。

64

6.0103己-N-乙酰2葡萄糖胺溶菌酶

2.5102H2O2過(guò)氧化氫酶

4.0103D-乳糖-半乳糖苷酶

2.5103N-苯甲酰酪氨酰胺

1.08101甘氨酰酪氨酰甘氨酸胰凝乳蛋白酶

2.6102HCO3碳酸酐酶

1.5103D-果糖

5105D-葡萄糖

4104ATP己糖激酶（腦）

Km（mol/L）底物酶

一些酶的底物的Km

653．Km在一定條件下可表示酶對(duì)底物的親和力

k1Km

=k2

+

k3當(dāng)k3<<k2時(shí)，Km

k2/k1。即相當(dāng)于ES分解為E+S的解離常數(shù)（dissociationconstant,Ks）。此時(shí)，Km代表酶對(duì)底物的親和力。

Km越大，表示酶對(duì)底物的親和力越?。籏m越小，表示酶對(duì)底物的親和力越大。

664．Vmax是酶被底物完全飽和時(shí)的反應(yīng)速率當(dāng)所有的酶均與底物形成ES時(shí)（即[ES]=[Et]），反應(yīng)速率達(dá)到最大，即Vmax=k3[Et]。675．kcat代表酶的轉(zhuǎn)換數(shù)

kcat=Vmax/[Et]

kcat表示酶被底物完全飽和時(shí)，單位時(shí)間內(nèi)每個(gè)酶分子（或活性中心）催化底物轉(zhuǎn)變成產(chǎn)物的分子數(shù)。

kcat也稱為酶的轉(zhuǎn)換數(shù)(turnovernumber)，單位是s1

意義:多數(shù)酶的轉(zhuǎn)換數(shù)在1104s1之間

酶的轉(zhuǎn)換數(shù)可用來(lái)表示酶的催化效率。68酶底物轉(zhuǎn)換數(shù)（s1）過(guò)氧化氫酶H2O240000000碳酸酐酶HCO3400000乙酰膽堿酯酶乙酰膽堿14000-內(nèi)酰胺酶芐青霉素2000延胡索酸酶延胡索酸800RecA蛋白ATP0.4一些酶的轉(zhuǎn)換數(shù)

691.雙倒數(shù)作圖法(doublereciprocalplot)，又稱為林-貝氏(Lineweaver-Burk)作圖法Vmax[S]Km+[S]V=（林－貝氏方程）+1/V=KmVmax1/Vmax1/[S]兩邊同取倒數(shù)（三）Ｋm值與Ｖmax常通過(guò)林-貝氏作圖法求取

-1/Km1/Vmax1/[S]1/V702、Hanes作圖法[S][S]/V-KmKm/Vm在林－貝氏方程基礎(chǔ)上，兩邊同乘[S][S]V=KmVmax[S]+Vmax1直線的斜率等于1/Vmax，橫軸截距為-Km

71二、酶濃度對(duì)反應(yīng)速度的影響當(dāng)[S]＞＞[E]，酶可被底物飽和的情況下，反應(yīng)速度與酶濃度成正比。關(guān)系式為：V=K3[E]72A：底物濃度曲線，其中，[E]1>[E]2>[E]3。從圖中可知，[E]的變化不影響酶促反應(yīng)的Km。B：反應(yīng)速率對(duì)酶濃度作圖，V與[E]呈直線關(guān)系。

73三、溫度對(duì)反應(yīng)速度的影響雙重影響：溫度升高，酶促反應(yīng)速度升高；酶的本質(zhì)是蛋白質(zhì),溫度升高，可引起酶的變性，從而反應(yīng)速度降低。

最適溫度

（optimumtemperature）：酶促反應(yīng)速度最快時(shí)的環(huán)境溫度哺乳動(dòng)物組織中酶的最適溫度多在35～40℃之間

TaqDNA聚合酶最適溫度為72℃

74*低溫的應(yīng)用一般的酶在低溫下活性降低，但酶本身不被破壞，其活性可隨溫度的回升而恢復(fù)。

低溫保存酶和菌種等生物制品

低溫麻醉

75四、pH對(duì)反應(yīng)速度的影響最適pH：酶催化活性最大時(shí)的環(huán)境pH胃蛋白酶淀粉酶膽堿酯酶體內(nèi)酶的最適pH多在6.5～8之間。

胃蛋白酶的最適pH為1.8

精氨酸酶的最適pH為9.8

76最適pH不是酶的特征性常數(shù)，它受底物濃度、緩沖液種類與濃度、以及酶純度等因素的影響。77五、抑制劑對(duì)反應(yīng)速度的影響酶的抑制劑(inhibitor)：凡能使酶的催化活性下降而不引起酶蛋白變性的物質(zhì)稱為酶的抑制劑。

※區(qū)別于酶的變性：抑制劑對(duì)酶有一定選擇性引起變性的因素對(duì)酶沒(méi)有選擇性78抑制作用的類型：不可逆性抑制（irreversibleinhibition）可逆性抑制（reversibleinhibition）：競(jìng)爭(zhēng)性抑制；非競(jìng)爭(zhēng)性抑制；反競(jìng)爭(zhēng)性抑制；79(一)不可逆性抑制作用概念：抑制劑通常以共價(jià)鍵與酶活性中心的必需基團(tuán)相結(jié)合，使酶失活,不能通過(guò)透析、超濾或稀釋等方法將其除去。

。

舉例：有機(jī)磷化合物羥基酶解毒------解磷定(PAM)

重金屬離子及砷化合物巰基酶解毒------二巰基丙醇(BAL)

80

專一性抑制劑一些酶活性中心的催化基團(tuán)是絲氨酸殘基上的羥基，這些酶稱為羥基酶。

如膽堿酯酶和絲氨酸蛋白酶

有機(jī)磷化合物羥基酶失活的酶酸CH3CHN+HONROPR'OOOE+NROPR'OOOCHCH3N++EOH

解磷定失活的酶有機(jī)磷-解磷定復(fù)合物活化的酶

81半胱氨酸殘基上的巰基是許多酶的必需基團(tuán)。低濃度的重金屬離子(Hg2+、Ag2+、Pb2+等)及As3+等可與巰基酶分子中的巰基結(jié)合，使酶失活。

路易士氣巰基酶失活的酶酸失活的酶BAL巰基酶BAL與砷劑結(jié)合物非專一性抑制劑82（二）可逆性抑制作用*概念：抑制劑通常以非共價(jià)鍵與酶或酶-底物復(fù)合物可逆性結(jié)合,使酶的活性降低或喪失；抑制劑可用透析、超濾等方法除去。競(jìng)爭(zhēng)性抑制

(competitiveinhibition)非競(jìng)爭(zhēng)性抑制

(non-competitiveinhibition)反競(jìng)爭(zhēng)性抑制

(uncompetitiveinhibition)*類型：831．競(jìng)爭(zhēng)性抑制劑與底物競(jìng)爭(zhēng)酶的活性中心

定義：抑制劑與底物的結(jié)構(gòu)相似或部分相似，能與底物競(jìng)爭(zhēng)酶的活性中心，從而阻礙酶-底物復(fù)合物的形成，使酶的活性降低。這種抑制作用稱為競(jìng)爭(zhēng)性抑制作用。

+++EESIESEIEP84反應(yīng)模式+IEIE+SE+PESIS+++ESIESEIPEE85有競(jìng)爭(zhēng)性抑制劑存在的米氏方程式

V

=Vmax[S]Km+

[S](1

+[I]ki)雙倒數(shù)方程式是

VmaxKm[S]V1=1Vmax1+(1

+[I]k

i)反應(yīng)模式+E+SESE+PIEIkik1k2k386抑制劑↑

無(wú)抑制劑1/V1/[S]87競(jìng)爭(zhēng)性抑制作用V對(duì)[S]的雙倒數(shù)作圖

*特點(diǎn)抑制程度取決于抑制劑與酶的相對(duì)親和力及底物濃度；I與S結(jié)構(gòu)類似，或部分相似，競(jìng)爭(zhēng)酶的活性中心；動(dòng)力學(xué)特點(diǎn)：Vmax不變，表觀Km增大。[I]1V1[S]0Km1Km1(1+)[I]kiVmax1--無(wú)抑制劑88*舉例

丙二酸與琥珀酸競(jìng)爭(zhēng)琥珀酸脫氫酶琥珀酸琥珀酸脫氫酶FADFADH2延胡索酸89磺胺類藥物的抑菌機(jī)制與對(duì)氨基苯甲酸競(jìng)爭(zhēng)二氫葉酸合成酶二氫蝶呤啶＋對(duì)氨基苯甲酸＋谷氨酸二氫葉酸合成酶二氫葉酸90有些抑制劑與酶活性中心外的必需基團(tuán)相結(jié)合，不影響酶與底物的結(jié)合，酶和底物的結(jié)合也不影響酶與抑制劑的結(jié)合。底物和抑制劑之間無(wú)競(jìng)爭(zhēng)關(guān)系。但酶-底物-抑制劑復(fù)合物(ESI)不能進(jìn)一步釋放出產(chǎn)物。這種抑制作用稱作非競(jìng)爭(zhēng)性抑制作用。非競(jìng)爭(zhēng)性抑制劑結(jié)合活性中心之外的調(diào)節(jié)位點(diǎn)

91反應(yīng)模式+S－S+S－S+ESIEIEESEPE+SESE+P+IEI+SEIS+I92非競(jìng)爭(zhēng)性抑制的米氏方程式的雙倒數(shù)形式

VmaxKm[S]V1=1Vmax1+(1

+[I]ki)(1

+[I]ki)*特點(diǎn)抑制劑與酶活性中心外的必需基團(tuán)結(jié)合，底物與抑制劑之間無(wú)競(jìng)爭(zhēng)關(guān)系；抑制程度取決于抑制劑的濃度；動(dòng)力學(xué)特點(diǎn)：Vmax降低，表觀Km不變。[I]1V1[S]Km1(1+)[I]kiVmax1Vmax0非競(jìng)爭(zhēng)性抑制作用V對(duì)[S]的雙倒數(shù)作圖

93抑制劑僅與酶和底物形成的中間產(chǎn)物(ES)結(jié)合，使中間產(chǎn)物ES的量下降。這樣，既減少?gòu)闹虚g產(chǎn)物轉(zhuǎn)化為產(chǎn)物的量，也同時(shí)減少?gòu)闹虚g產(chǎn)物解離出游離酶和底物的量。這種抑制作用稱為反競(jìng)爭(zhēng)性抑制作用。定義反競(jìng)爭(zhēng)性抑制劑的結(jié)合位點(diǎn)由底物誘導(dǎo)產(chǎn)生

94*反應(yīng)模式：

E+SE+PES+IESI++ESESESIEP95反競(jìng)爭(zhēng)性抑制作用的米氏方程式的雙倒數(shù)形式

VmaxKm[S]V1=1Vmax1+(1

+[I]ki)[I]1V1[S]Km1(1+)[I]kiVmax1Vmax0(1+)[I]kiKm反競(jìng)爭(zhēng)性抑制作用V對(duì)[S]的雙倒數(shù)作圖

*特點(diǎn)：抑制劑只與酶-底物復(fù)合物結(jié)合；抑制程度取決于抑制劑的濃度及底物的濃度；動(dòng)力學(xué)特點(diǎn)：Vmax降低，表觀Km降低。96各種可逆性抑制作用的比較動(dòng)力學(xué)參數(shù)表觀Km

Km增大不變減小最大速度Vmax不變降低降低林-貝氏作圖斜率Km/Vmax增大增大不變縱軸截距1/Vmax不變?cè)龃笤龃髾M軸截距-1/Km增大不變減小與I結(jié)合的組分EE、ESES作用特征無(wú)抑制劑競(jìng)爭(zhēng)性抑制非競(jìng)爭(zhēng)性抑制反競(jìng)爭(zhēng)性抑制97六、激活劑可加速酶促反應(yīng)速率

酶的激活劑（activator）

使酶從無(wú)活性變?yōu)橛谢钚曰蚴姑富钚栽黾拥奈镔|(zhì)

必需激活劑（essentialactivator）為酶促反應(yīng)所必需，如缺乏則測(cè)不到酶的活性。

Mg2+為己糖激酶的必需激活劑

非必需激活劑（non-essentialactivator）可以提高酶的催化活性，但不是必需的。

Cl-對(duì)唾液淀粉酶的激活作用

98七、酶活性測(cè)定和酶活性的單位什么是酶活性測(cè)定

?在一定條件下,可通過(guò)測(cè)定酶促反應(yīng)速度的快慢來(lái)算出酶濃度.1)酶的活性是指酶催化化學(xué)反應(yīng)的能力，其衡量的標(biāo)準(zhǔn)是酶促反應(yīng)速度。992)酶活力大小的衡量尺度是酶的活性單位國(guó)際單位(IU)：

在特定的條件下，每分鐘催化1μmol底物轉(zhuǎn)化為產(chǎn)物所需的酶量為一個(gè)國(guó)際單位。催量單位(katal)：１催量是指在特定條件下，每秒鐘使１mol底物轉(zhuǎn)化為產(chǎn)物所需的酶量。kat與IU的換算：1IU=16.67×10-9kat100第四節(jié)酶的調(diào)節(jié)101酶活性的調(diào)節(jié)（快速調(diào)節(jié)）酶含量的調(diào)節(jié)（緩慢調(diào)節(jié)）調(diào)節(jié)方式：調(diào)節(jié)對(duì)象：關(guān)鍵酶102酶原(zymogen)有些酶在細(xì)胞內(nèi)合成或初分泌時(shí)只是酶的無(wú)活性前體，此前體物質(zhì)稱為酶原。酶原的激活在一定條件下，酶原向有活性酶轉(zhuǎn)化的過(guò)程。一、酶活性的調(diào)節(jié)（一）酶原與酶原的激活一些酶只有通過(guò)對(duì)其前體剪切后才有活性103酶原激活的原理酶原分子構(gòu)象發(fā)生改變形成或暴露出酶的活性中心一個(gè)或幾個(gè)特定的肽鍵斷裂，水解掉一個(gè)或幾個(gè)短肽在特定條件下104賴?yán)i天天天天甘異賴?yán)i天天天天纈組絲SSSS46183甘異纈組絲SSSS腸激酶胰蛋白酶活性中心胰蛋白酶原的激活過(guò)程105胰凝乳蛋白酶原的激活106酶原激活因子激活途徑胃蛋白酶原H+或胃蛋白酶胃蛋白酶+六肽胰蛋白酶原腸激酶、胰蛋白酶胰蛋白酶+六肽胰凝乳蛋白酶原胰蛋白酶胰凝乳蛋白酶+2個(gè)二肽彈性蛋白酶原胰蛋白酶彈性蛋白酶+幾個(gè)肽段羧基肽酶原胰蛋白酶羧基肽酶+幾個(gè)肽段消化蛋白酶原的激活

107血液的凝固途徑108酶原激活的生理意義避免細(xì)胞產(chǎn)生的酶對(duì)細(xì)胞進(jìn)行自身消化，并使酶在特定的部位和環(huán)境中發(fā)揮作用，保證體內(nèi)代謝正常進(jìn)行。有的酶原可以視為酶的儲(chǔ)存形式。在需要時(shí)，酶原適時(shí)地轉(zhuǎn)變成有活性的酶，發(fā)揮其催化作用。109（二）酶的變構(gòu)調(diào)節(jié)變構(gòu)效應(yīng)劑(allostericeffector)變構(gòu)激活劑變構(gòu)抑制劑變構(gòu)調(diào)節(jié)(allostericregulation):

變構(gòu)酶(allostericenzyme)變構(gòu)部位(allostericsit)一些代謝物可與某些酶分子活性中心外的某部分可逆地結(jié)合，使酶構(gòu)象改變，從而改變酶的催化活性，此種調(diào)節(jié)方式稱變構(gòu)調(diào)節(jié)。110變構(gòu)酶常為多個(gè)亞基構(gòu)成的寡聚體，具有協(xié)同效應(yīng)：

變構(gòu)酶的Ｓ形曲線正協(xié)同效應(yīng)的底物濃度-反應(yīng)速率曲線為S形曲線

負(fù)協(xié)同效應(yīng)的底物-速率曲線外形類似矩形雙曲線，但不是矩形雙曲線

111（三）酶的共價(jià)修飾調(diào)節(jié)共價(jià)修飾(covalentmodification)或化學(xué)修飾(chemicalmodification)

：

某些酶蛋白肽鏈上的一些基團(tuán)可與某種化學(xué)基團(tuán)發(fā)生可逆的共價(jià)結(jié)合，從而改變酶的活性，此過(guò)程稱為共價(jià)修飾或化學(xué)修飾。常見(jiàn)類型：磷酸化與脫磷酸化（最常見(jiàn)）

乙?；兔撘阴；谆兔摷谆佘栈兔撓佘栈璖H與－S－S互變

112酶的磷酸化與脫磷酸化-OHThrSerTyr酶蛋白H2OPi磷蛋白磷酸酶

ATPADP蛋白激酶ThrSerTyr-O-PO32-酶蛋白113二、酶含量的調(diào)節(jié)（一）酶合成的誘導(dǎo)和阻遏

誘導(dǎo)作用(induction)阻遏作用(repression)（二）酶降解的調(diào)控114溶酶體的功能一是與食物泡融合，將細(xì)胞吞噬進(jìn)的食物或致病菌等大顆粒物質(zhì)消化成生物大分子，殘?jiān)ㄟ^(guò)外排作用排出細(xì)胞；二是在細(xì)胞分化過(guò)程中，某些衰老細(xì)胞器和生物大分子等陷入溶酶體內(nèi)并被消化掉，這是機(jī)體自身重新組織的需要。

115有很多壽命很短的蛋白，其降解是通過(guò)“泛素－－蛋白酶體”路徑實(shí)現(xiàn)的。一個(gè)蛋白會(huì)通過(guò)共價(jià)鍵與多個(gè)分子組成的泛素多酶系統(tǒng)（UPP系統(tǒng)）結(jié)合而被標(biāo)記為“待降解蛋白”，UPP系統(tǒng)由泛素激活酶（E1），泛素交聯(lián)酶（E2）及泛素連接酶（E3）組成，UPP的主要成分為泛素，分子量為8.6kDa。酶E1可以通過(guò)給泛素的C-端半胱氨酸加一個(gè)高能硫酯鍵而將泛素激活，而被激活的泛素通過(guò)此高能硫酯鍵與酶E2結(jié)合。酶E3最后將泛素轉(zhuǎn)運(yùn)至底物蛋白的活化的賴氨酸殘基的ε-氨基上，泛素化的蛋白被運(yùn)送到26S的蛋白酶體而被最終降解，同時(shí)泛素被釋出并被重新利用。116第五節(jié)酶的命名與分類一、酶的命名：

習(xí)慣命名法，一般是按酶所催化的底物命名，在其底物英文名詞上加后綴“ase”作為酶的名稱。

如：蛋白酶（protease）、磷酸酶（phosphatase）

系統(tǒng)命名法根據(jù)酶所催化的整體反應(yīng)，按酶的分類對(duì)酶命名，每個(gè)酶都有一個(gè)名稱和一個(gè)編號(hào)。

編號(hào)中4個(gè)數(shù)字中第1個(gè)數(shù)字是酶的分類號(hào)，第2個(gè)數(shù)字代表在此類中的亞類，第3個(gè)數(shù)字表示亞-亞類，第4個(gè)數(shù)字表示該酶在亞-亞類中的序號(hào)。

117推薦名稱簡(jiǎn)便而常用

由于系統(tǒng)名稱較煩瑣，國(guó)際酶學(xué)委員會(huì)還同時(shí)為每一個(gè)酶從常用的習(xí)慣名稱中挑選出一個(gè)推薦名稱（recommendedname）

系統(tǒng)名稱：L-乳酸：NAD+氧化還原酶推薦名稱：乳酸脫氫酶

118酶的分類系統(tǒng)名稱編號(hào)催化的反應(yīng)推薦名稱1.氧化還原酶類(S)-乳酸：NAD+-氧化還原酶EC7(S)-乳酸+NAD+

丙酮酸+NADH+H+L-乳酸脫氫酶2.轉(zhuǎn)移酶類L-丙氨酸：-酮戊二酸氨基轉(zhuǎn)移酶ECL-丙氨酸+-酮戊二酸丙酮酸+L-谷氨酸丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶3.水解酶類1,4--D-葡聚糖-聚糖水解酶EC水解有3個(gè)以上1,4--D-葡萄糖基的多糖中1,4--D-葡糖苷鍵-淀粉酶4.裂合酶類D-果糖-1,6-二磷酸D-甘油醛-3-磷酸裂合酶EC3D-果糖-1,6-二磷酸磷酸二羥丙酮+D-甘油醛-3-磷酸果糖二磷酸醛縮酶5.異構(gòu)酶類D-甘油醛-3-磷酸醛-酮-異構(gòu)酶ECD-甘油醛-3-磷酸磷酸二羥丙酮丙糖磷酸異構(gòu)酶6.連接酶類L-谷氨酸：氨連接酶（生成ADP）ECATP+L-谷氨酸+NH3ADP+Pi+L-谷氨酰胺谷氨酸-氨連接酶

酶的分類與命名舉例

119二、酶的分類：1、氧化還原酶類（oxidoreductases）2、轉(zhuǎn)移酶類（transferases）3、水解酶類（hydrolases）4、裂解酶類（lyases）5、異構(gòu)酶類（isomerases）6、合成酶類（ligases）120第六節(jié)酶與醫(yī)學(xué)的關(guān)系一、酶與疾病的發(fā)生二、酶與疾病的診斷三、酶與疾病的治療121一、酶與疾病的發(fā)生、臨床診斷與治療密切相關(guān)

（一）許多疾病與酶的質(zhì)和量的異常相關(guān)1．酶的先天性缺陷是先天性疾病的重要病因之一

酪氨酸酶缺乏引起白化??；苯丙氨酸羥化酶缺乏引起苯丙酮酸尿癥。

2．酶活性改變可引起疾病

胰腺炎因胰蛋白酶在胰腺中被激活。

3．一些疾病可以引起酶活性的改變

嚴(yán)重肝病時(shí)可因肝合成的凝血因子減少而影響血液凝固。

122（二）體液中酶的活性可作為某些疾病的診斷指標(biāo)

2.惡性腫瘤可因腫瘤組織的增殖加快，其標(biāo)志酶釋放入血增多，有助于對(duì)該組織腫瘤的診斷。

前列腺癌病人血清酸性磷酸酶含量增高。

組織器官損傷可使其組織特異性的酶釋放入血，有助于對(duì)此組織器官疾病的診斷。

急性肝炎時(shí)，血清中丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶活性升高。

3.有些酶的清除和排泄障礙也可造成血清含量升高。

肝硬化時(shí)血清堿性磷酸酶活性升高。

4.酶的誘導(dǎo)合成增多也可以從血清中檢測(cè)出來(lái)，用于協(xié)助診斷和預(yù)后判斷。

膽管阻塞時(shí)膽汁返流可刺激肝合成堿性磷酸酶增多。

123偶聯(lián)測(cè)定法不直接涉及原始反應(yīng)的底物或產(chǎn)物

許多酶促反應(yīng)的底物和產(chǎn)物雖然不能直接檢測(cè)，但可以與另外的酶反應(yīng)相偶聯(lián)，偶聯(lián)的酶以第一個(gè)酶的產(chǎn)物為底物，或以此類推，以最后的酶反應(yīng)產(chǎn)物可以直接檢測(cè)為目的。這種通過(guò)偶聯(lián)其他酶并對(duì)此酶促產(chǎn)物進(jìn)行直接檢測(cè)，間接地反映待測(cè)酶反應(yīng)的底物或產(chǎn)物變化量的方法稱為酶偶聯(lián)測(cè)定法（enzymecoupledassay）

外加的酶稱為工具酶或輔助酶（auxiliaryenzyme）

產(chǎn)物可直接檢測(cè)的酶稱為指示酶（indicatorenzyme）

丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶丙氨酸+-酮戊二酸

丙酮酸+谷氨酸乳酸脫氫酶丙酮酸+NADH+H+

乳酸+NAD+

（在340nm處有吸收峰）（在340nm處無(wú)吸收峰）124酶聯(lián)免疫分析測(cè)定蛋白質(zhì)是酶分析的發(fā)展

酶聯(lián)免疫分析又稱酶聯(lián)免疫吸附