免疫組化在腫瘤病理診斷中的應(yīng)用

關(guān)于免疫組化在腫瘤病理診斷中的應(yīng)用第1頁，課件共39頁，創(chuàng)作于2023年2月免疫組織（或細胞）化學(xué)技術(shù)是免疫學(xué)與組織化學(xué)兩種技術(shù)的結(jié)合，它的基本原理是應(yīng)用抗原與抗體的特異性結(jié)合，再用顯色劑顯色達到標記細胞的某種抗原物質(zhì)的定性與定位檢測技術(shù)，是一種方法簡單，且有效的腫瘤標記技術(shù)。當(dāng)前在免疫組化技術(shù)圍繞著提高敏感性與特異性不斷改進和發(fā)展，但它仍有其局限性——應(yīng)用于蛋白水平，敏感性與特異性不足，故應(yīng)與其他組織化學(xué)、電鏡及分子生物學(xué)技術(shù)相結(jié)合。

第2頁，課件共39頁，創(chuàng)作于2023年2月一、免疫組化在診斷中的應(yīng)用原則1．防止假陽性與假陰性，防止操作中的污染，規(guī)范操作，設(shè)陽性與陰性對照。2．選用2種以上同類抗體：目前腫瘤均為相關(guān)抗原，特異性不足，多種同類抗體可提高陽性率。3．正確評價免疫組化的結(jié)果：其結(jié)果受抗體、特異性與質(zhì)量、操作、標本固定等多種因素影響。第3頁，課件共39頁，創(chuàng)作于2023年2月4．合理的選擇抗體：既要符合設(shè)計的要求，價廉物美，分1、2、3線抗體。5．待檢標本抗原保存要好：要求快速、新鮮、充份的固定，合適固定劑，福爾馬林液固定標本要修復(fù)抗原。第4頁，課件共39頁，創(chuàng)作于2023年2月二、免疫組化在腫瘤診斷中的應(yīng)用（一）上皮性腫瘤標記1．角蛋白（Keratin）：一種中間絲蛋白，分（1）表皮角蛋白（Epidermalkeratin，EK）——鱗狀上皮或高分化鱗癌標記；（2）細胞角蛋白（cytokeratin，CK）——低分子角蛋白，對腺癌、移行細胞部及低分化鱗癌標記。一般用廣譜型角蛋白抗體為好，常用。第5頁，課件共39頁，創(chuàng)作于2023年2月2．上皮膜抗原（Epithelialmembraneantigen，EMA）：這亦是常用的上皮細胞標記抗體，細胞膜陽性，用Zanker’s、Bouin或B5固定液中固定為好。其在低分化和未分化上皮中表達好，但亦可在間變性大細胞淋巴瘤、惡性橫紋肌樣瘤中表達。

3．橋粒蛋白（Desmoplakin）：主要標記上皮橋粒，DesmoⅡ僅表達于復(fù)層上皮。第6頁，課件共39頁，創(chuàng)作于2023年2月4．癌胚抗原（Carcinoembrgonicantigen，CEA）：是從結(jié)腸癌中分離而得一種球蛋白，定位于細胞膜上，對腸、胃、肺、胰、肝、乳腺等腺癌標記陽性，但個別非上皮腫瘤也可陽性。

5．甲胎蛋白（AlphaFetoprotein，AFP）：由胎肝細胞提取的一種酸性糖蛋白，細胞漿和膜上表達，它對肝細胞癌、卵黃囊癌的特異性標記。第7頁，課件共39頁，創(chuàng)作于2023年2月（二）間葉源性腫瘤免疫組化標記間葉組織包括纖維結(jié)締組織、脂肪、肌肉、血管、骨、軟骨及外周神經(jīng)等，間葉組織腫瘤往往由多向分化的原始間葉細胞產(chǎn)生，存在共性，標記抗體特異性不足，有交叉反應(yīng)。

1．波紋蛋白（Vimentin，Vim）：是一種細胞中間絲蛋白抗體，在多數(shù)軟組織腫瘤均可表達，但纖維細胞較明顯，在一些上皮性腫瘤也有陽性反應(yīng)。常用作間葉源與上皮源腫瘤的第一線鑒別抗體第8頁，課件共39頁，創(chuàng)作于2023年2月2．結(jié)蛋白（Desmin，Des）：平滑肌、橫紋肌均可陽性。3．肌動蛋白（Actin）：平滑肌、血管內(nèi)皮、肌上皮細胞標記，HHF35特異。4．肌球蛋白（Myotlobin），肌紅蛋白（myosin）：對橫紋肌標記較好。

5．第8因子Ⅷ，CD34：對血管內(nèi)皮細胞腫瘤標記較特異。第9頁，課件共39頁，創(chuàng)作于2023年2月6．S-100蛋白：是一種周圍神經(jīng)雪旺氏細胞特異標記抗體，后發(fā)現(xiàn)對脂細胞、朗格罕氏細胞、肌上皮細胞、黑色素細胞及其腫瘤均可陽性。

7．酸性或堿性磷酸酶：對骨與軟骨腫瘤標記好。第10頁，課件共39頁，創(chuàng)作于2023年2月（三）雙向分化腫瘤標記即有上皮與間葉兩種細胞分化的腫瘤的標記，如滑膜肉瘤、間皮肉瘤、腦膜瘤、癌肉瘤、上皮樣肉瘤等，一般采用CK、EMA標記上皮，Vim等標記間葉細胞。另外有一種惡性纖維組織細胞瘤，由纖維細胞、肌纖維母細胞和組織細胞混合組成的惡性腫瘤，故應(yīng)用Vim和組織細胞標記來診斷。第11頁，課件共39頁，創(chuàng)作于2023年2月（四）神經(jīng)細胞、膠質(zhì)細胞及神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤標記1．神經(jīng)原特異性烯醇化酶（NeuronSpecificEnolase，NSE）：神經(jīng)原腫瘤標記。2．膠質(zhì)纖維酸性蛋白（GlialFibrillalyAcidicprotein，GFAP）：腦膠質(zhì)細胞特異性標記抗體。第12頁，課件共39頁，創(chuàng)作于2023年2月3．神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤標記：包括類癌、胰島、垂體瘤、甲狀腺髓樣癌、皮膚Merkel細胞癌、原始神經(jīng)外胚層瘤（PNET）等，目前應(yīng)用NSE、嗜鉻蛋白顆粒A（CgA）及觸突素（Syn）三種抗體同時或兩種一起用，因NSE不夠特異。第13頁，課件共39頁，創(chuàng)作于2023年2月（五）淋巴網(wǎng)狀組織腫瘤（淋巴瘤）標記1．B細胞標記抗體：CD20（L26），Ig重鏈（IgG、M、A、E）、輕鏈（λ、κ）、CD79a。2．T細胞標記抗體：CD45RO（UCHL-1），CD3較好。

3．組織細胞標記抗體：Mac387、CD14、抗溶菌酶（lysozyme）、抗糜蛋白酶（α-1Antichymotrypsin）等。第14頁，課件共39頁，創(chuàng)作于2023年2月4．霍奇金淋巴瘤（Hodgkin’slymphoma，HL）R-S細胞（Reed-Sternbergcell）標記抗體：CD15、CD305．白細胞共同抗原（leucocytecommonAntigen，LCA）：它對淋巴網(wǎng)狀細胞均為膜陽性，作第一線抗體為好。注：（1）國際上將百余種標記抗體統(tǒng)稱為CD（ClusterDesignation）系列。（2）淋巴細胞標記與R-S細胞多數(shù)為膜陽性，而Ig與組織細胞標記為胞漿陽性。第15頁，課件共39頁，創(chuàng)作于2023年2月（六）腫瘤細胞增殖活性與細胞凋亡標記抗體瘤細胞增殖指數(shù)反應(yīng)細胞增殖活性，是瘤細胞新生（惡性）狀況的客觀指標，與凋亡指數(shù)呈反比關(guān)系。常用抗體有：1．增殖細胞核抗原（proliferativeneuclearAntigen，PCNA），核陽性。

2．Ki-67，Brdu抗體：原要求新鮮組織，新近有Ki-67石蠟切片標記抗體問世。第16頁，課件共39頁，創(chuàng)作于2023年2月3．細胞凋亡（Apoptosis）標記抗體：開始發(fā)現(xiàn)細胞凋亡發(fā)生于正常細胞受基因調(diào)控性自然性死亡。后發(fā)現(xiàn)腫瘤細胞亦可發(fā)生，而且某些藥物放、化療亦可誘發(fā)細胞凋亡，故成了研究腫瘤發(fā)生、發(fā)展、治療的熱點。其標記抗體有：（1）凋亡抑制基因蛋白抗體：Bcl-2、Bcl-XL、mtp53。（2）促凋亡基因蛋白抗體：Fas/FasL系統(tǒng)，wtp53、Bax、Bcl-xs、Fas等。Tunel標記。第17頁，課件共39頁，創(chuàng)作于2023年2月（七）癌基因與抗癌基因，促轉(zhuǎn)移與轉(zhuǎn)移抑制基因蛋白抗體標記。目前應(yīng)用很多，因方法比分子生物學(xué)技術(shù)簡單，但是這種結(jié)果不能直接反應(yīng)腫瘤基因的活性，只能間接反應(yīng)腫瘤基因代謝活性，要注意正確評價它的價值。第18頁，課件共39頁，創(chuàng)作于2023年2月第19頁，課件共39頁，創(chuàng)作于2023年2月第20頁，課件共39頁，創(chuàng)作于2023年2月第21頁，課件共39頁，創(chuàng)作于2023年2月第22頁，課件共39頁，創(chuàng)作于2023年2月第23頁，課件共39頁，創(chuàng)作于2023年2月第24頁，課件共39頁，創(chuàng)作于2023年2月第25頁，課件共39頁，創(chuàng)作于2023年2月第26頁，課件共39頁，創(chuàng)作于2023年2月第27頁，課件共39頁，創(chuàng)作于2023年2月第28頁，課件共39頁，創(chuàng)作于2023年2月第29頁，課件共39頁，創(chuàng)作于2023年2月第30頁，課件共39頁，創(chuàng)作于2023年2月第31頁，課件共39頁，創(chuàng)作于2023年2月第32頁，課件共39頁，創(chuàng)作于2023年2