磷標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

水產(chǎn)動(dòng)物

營(yíng)養(yǎng)與飼料磷標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制一、用途用于飼料中P的測(cè)定。P=X/（m×v×100）×100%X——由標(biāo)準(zhǔn)曲線查得試樣分解液總P含量（ug）m——試樣的質(zhì)量（g）v——移取的試樣分解液體積（ml）二、原理游離磷，在酸性溶液中，用釩鉬酸銨處理，生成黃色的(NH4)3PO4NH4VO3·16MoO3，在波長(zhǎng)420nm下進(jìn)行比色測(cè)定，測(cè)吸光度，含磷越高，顏色越深，吸光度值越大。●釩鉬酸銨顯色劑：稱取釩鉬酸銨1.25g，加硝酸250ml，另稱取鉬酸銨25g，加水400ml溶解之，在冷卻的條件下，將兩種溶液混合，用水定容1000ml。避光保存，若生成沉淀，則不能繼續(xù)使用！三、試劑●磷標(biāo)準(zhǔn)液將磷酸二氫鉀在105℃干燥1h，在干燥器中冷卻后稱取0.2195g溶解于水，定量轉(zhuǎn)入1000ml容量瓶中，加硝酸3ml，用稀釋至刻度，搖勻，即為50μg/ml的磷標(biāo)準(zhǔn)液。三、試劑磷標(biāo)準(zhǔn)液含磷量的計(jì)算磷酸二氫鉀中含P量為：P=P/KH2PO4=31/136=22.79%0.2195g磷酸二氫鉀中的含P量為：0.2195×22.79%＝0.05(g)0.2195g（50000ug的P）磷酸二氫鉀溶解定容在1000ml水中，1ml溶液含磷50000/1000=50（ug/ml）三、試劑四、儀器設(shè)備分光光度計(jì)：有10mm比色池，可在420nm測(cè)定吸光度容量瓶：50ml（7個(gè)）刻度移液管：1.0ml、2.0ml、5.0ml、10ml、15ml刻度吸管：10ml塑料洗瓶：500ml▲分光光度計(jì)：有10mm比色池，可在420nm測(cè)定吸光度▲容量瓶50ml（7個(gè)）0、1、2、5、10、12、15?！潭纫埔汗?.0ml、2.0ml、5.0ml、10ml、15ml四、測(cè)定步驟（一）儀器的準(zhǔn)備將容量瓶：50ml（7個(gè)）洗滌干凈刻度移液管：1.0ml、2.0ml、3.0ml、5.0ml、10ml洗滌干凈,再用磷標(biāo)準(zhǔn)液潤(rùn)洗三次?？潭任埽?0ml洗滌干凈,再用釩鉬酸銨顯色劑潤(rùn)洗。（二）磷標(biāo)準(zhǔn)比色液的制備▲用移液管準(zhǔn)確移取磷酸標(biāo)準(zhǔn)液0ml、1.0ml、2.0ml、5.0ml、10.0ml、15.0ml于50ml容量瓶（已編號(hào)0、1、2、5、10、12、15）中。（三）加入釩鉬酸銨顯色劑用10ml刻度吸管準(zhǔn)確移取釩鉬酸銨顯色劑10ml，上述0、1、2、5、10、12、15號(hào)容量瓶各加入釩鉬酸銨顯色劑10ml稀釋、定容用蒸餾水稀釋至容量瓶容積的2/3時(shí)，將容量瓶直立旋搖（不要蓋上蓋子），繼續(xù)稀釋至近標(biāo)線時(shí)，等候1-2分鐘，控制洗瓶逐滴加水至刻度處，搖均備用（15次）。（四）稀釋、定容◆稀釋◆定容（五）比色液吸光度的測(cè)定1.比色計(jì)的準(zhǔn)備儀器使用前需開(kāi)機(jī)預(yù)熱30min，用黑色遮光體校零。比色皿洗滌干凈。2.參比液、比色液置入樣品室比色皿洗滌干凈比色皿潤(rùn)洗：用被測(cè)液潤(rùn)洗3次比色皿裝入被測(cè)液：容積2/3-3/4比色皿置入樣品室的比色槽內(nèi)，依次為0、1、2、5、10、12、15注意：拿取時(shí)拿毛玻璃面。放入時(shí)光線透過(guò)光面3.調(diào)整吸光度A狀態(tài)調(diào)0：蓋上樣品室蓋。將參比液置入光路，進(jìn)行調(diào)零。4.測(cè)定吸光度將被測(cè)液置入