磷標準曲線的繪制

水產(chǎn)動物

營養(yǎng)與飼料磷標準曲線的繪制一、用途用于飼料中P的測定。P=X/（m×v×100）×100%X——由標準曲線查得試樣分解液總P含量（ug）m——試樣的質(zhì)量（g）v——移取的試樣分解液體積（ml）二、原理游離磷，在酸性溶液中，用釩鉬酸銨處理，生成黃色的(NH4)3PO4NH4VO3·16MoO3，在波長420nm下進行比色測定，測吸光度，含磷越高，顏色越深，吸光度值越大?！疋C鉬酸銨顯色劑：稱取釩鉬酸銨1.25g，加硝酸250ml，另稱取鉬酸銨25g，加水400ml溶解之，在冷卻的條件下，將兩種溶液混合，用水定容1000ml。避光保存，若生成沉淀，則不能繼續(xù)使用！三、試劑●磷標準液將磷酸二氫鉀在105℃干燥1h，在干燥器中冷卻后稱取0.2195g溶解于水，定量轉(zhuǎn)入1000ml容量瓶中，加硝酸3ml，用稀釋至刻度，搖勻，即為50μg/ml的磷標準液。三、試劑磷標準液含磷量的計算磷酸二氫鉀中含P量為：P=P/KH2PO4=31/136=22.79%0.2195g磷酸二氫鉀中的含P量為：0.2195×22.79%＝0.05(g)0.2195g（50000ug的P）磷酸二氫鉀溶解定容在1000ml水中，1ml溶液含磷50000/1000=50（ug/ml）三、試劑四、儀器設(shè)備分光光度計：有10mm比色池，可在420nm測定吸光度容量瓶：50ml（7個）刻度移液管：1.0ml、2.0ml、5.0ml、10ml、15ml刻度吸管：10ml塑料洗瓶：500ml▲分光光度計：有10mm比色池，可在420nm測定吸光度▲容量瓶50ml（7個）0、1、2、5、10、12、15?！潭纫埔汗?.0ml、2.0ml、5.0ml、10ml、15ml四、測定步驟（一）儀器的準備將容量瓶：50ml（7個）洗滌干凈刻度移液管：1.0ml、2.0ml、3.0ml、5.0ml、10ml洗滌干凈,再用磷標準液潤洗三次。刻度吸管：10ml洗滌干凈,再用釩鉬酸銨顯色劑潤洗。（二）磷標準比色液的制備▲用移液管準確移取磷酸標準液0ml、1.0ml、2.0ml、5.0ml、10.0ml、15.0ml于50ml容量瓶（已編號0、1、2、5、10、12、15）中。（三）加入釩鉬酸銨顯色劑用10ml刻度吸管準確移取釩鉬酸銨顯色劑10ml，上述0、1、2、5、10、12、15號容量瓶各加入釩鉬酸銨顯色劑10ml稀釋、定容用蒸餾水稀釋至容量瓶容積的2/3時，將容量瓶直立旋搖（不要蓋上蓋子），繼續(xù)稀釋至近標線時，等候1-2分鐘，控制洗瓶逐滴加水至刻度處，搖均備用（15次）。（四）稀釋、定容◆稀釋◆定容（五）比色液吸光度的測定1.比色計的準備儀器使用前需開機預(yù)熱30min，用黑色遮光體校零。比色皿洗滌干凈。2.參比液、比色液置入樣品室比色皿洗滌干凈比色皿潤洗：用被測液潤洗3次比色皿裝入被測液：容積2/3-3/4比色皿置入樣品室的比色槽內(nèi)，依次為0、1、2、5、10、12、15注意：拿取時拿毛玻璃面。放入時光線透過光面3.調(diào)整吸光度A狀態(tài)調(diào)0：蓋上樣品室蓋。將參比液置入光路，進行調(diào)零。4.測定吸光度將被測液置入