2023學年完整公開課版霉菌的分離

微生物的菌種選育-霉菌的分離篩選霉菌菌落的特征：A、形態(tài)較大，質(zhì)地疏松，外觀干燥，不透明，呈現(xiàn)或松或緊的形狀。B、菌落和培養(yǎng)基間的連接緊密，不易挑取，菌落正面與反面的顏色、構(gòu)造，以及邊緣與中心的顏色、構(gòu)造常不一致。C、霉菌的菌絲有營養(yǎng)菌絲和氣生菌絲的分化，而氣生菌絲沒有毛細管水，故它們的菌落必然與細菌或酵母菌的不同，較接近放線菌。

根霉菌孢子形態(tài)：

顯微鏡下根霉孢子形態(tài)：

根霉菌落形態(tài)：分離霉菌需要的材料

酒曲、馬鈴薯、葡萄糖、瓊脂、蒸餾水、1mol/LNaOH、1mol/LHCl分離霉菌需要的設(shè)備高壓蒸汽滅菌鍋、電爐、天平、鐵架臺、滅菌培養(yǎng)皿、錐形瓶、漏斗、試管、燒杯、膠頭滴管、石蕊試紙、接種環(huán)、酒精燈、量筒、玻璃棒、紗布、濾紙、試管塞、報紙、扎繩、標簽、溫箱、冰箱、蓋玻片、載玻片、顯微鏡、杜氏管馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基（PDA）的制備

將新鮮的馬鈴薯洗凈、去皮，（注意：發(fā)霉、變綠的不要使用。）切成薄片或蠶豆大小的方塊，稱取所需的重量，倒入鍋內(nèi)，加水1000mL煮沸半小時左右，至馬鈴薯酥而不爛為止，用四層紗布過濾，然后將事先稱好的瓊脂加到上述濾液中，用小火加熱，使之慢慢融化，并用玻棒不斷攪拌，以免燒焦鍋底。再加入事先用溫水溶化的糖溶液，用二層紗布過濾。測定pH值，用1mol/L的NaOH或HCl調(diào)至pH為5.5～6.5之間，最后加水補足至1000mL。（1）水瓊脂制備：將瓊脂粉直接加入無菌水中在微波爐中加熱至融化：如果將瓊脂粉加入自來水中，則需要進行高溫蒸汽滅菌，單孢分離常用2%水瓊脂。（2）瓊脂片制備：用1ml滅菌移液槍吸取2%的無菌水瓊脂涂布在無菌載玻片上，厚度均勻。毛細管單胞打孔法獲取霉菌單孢子毛細管單胞打孔法獲取霉菌單孢子（3）孢子涂布：用滅菌挑針挑取一小塊酒曲，一般會足以沾有霉菌的孢子，將其沾復(fù)到水瓊脂片上，用滅菌波棒或毛細管沾取無菌水，稀釋涂布孢子。或者用直徑1mm的毛細管，在酒精燈下燒軟后拉絲，折斷后制作成細針（簡稱“毛細管針”）用毛細管針挑取孢子，直接涂布到水瓊脂片上。（4）孢子選?。猴@微鏡檢（常用十倍物鏡）涂有孢子的水瓊脂片，找到典型孢子后，移入視野中央（要求視野內(nèi)僅此一個孢子），然后下移載物臺。毛細管單胞打孔法獲取霉菌單孢子（5）瓊脂打孔：取內(nèi)徑為1mm的毛細管，在酒精燈上燒軟后彎成直角，短臂長約1cm。短臂端部在酒精燈上加熱滅菌后，對準顯微鏡物鏡下的光斑中央下壓，在水瓊脂上打一個直徑1cm的圓餅，提升載物臺到原來位置，觀察目標孢子是否在瓊脂并上，如果不在重新選取孢子（6）單胞轉(zhuǎn)移：用無菌針或毛細管針，挑去帶有目標孢子的瓊脂餅轉(zhuǎn)入馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基中，有孢子的一面緊貼培養(yǎng)基，每皿可放3-5個單孢。室溫下過夜培養(yǎng)12-20小時。（或放入設(shè)置好的培養(yǎng)箱中23-25℃），觀察長出菌落的形態(tài)。1、光學顯微