丙二醛的測定

丙二醛的測定一、試齊IJ:(1)TBA水溶液：精確 稱取TBA0.288g溶于水中，并稀釋至100ml(如TBA不易溶解，可加熱至全溶澄清，然后稀釋至100ml),相當(dāng)于0.02M;(2)三氯乙酸混合液：精確 稱取三氯乙酸(分析純)7.5g及0.1gEDTA,用水溶解，稀釋至100ml;⑶氯仿(分析純)；(4)丙二醛標(biāo)準(zhǔn)溶液：稱取0.315gl,1,3,3-四乙氧基丙烷，溶解后稀釋至1000ml,此溶液每ml相當(dāng)于丙二醛lOOpg，置于冰箱內(nèi)保存。精確 吸取1ml稀釋至100ml,此溶液每ml相當(dāng)于丙二醛lpg,備用。操作步驟(1)標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制精確 吸取每ml相當(dāng)于丙二醛Ipg的標(biāo)準(zhǔn)溶液0.0、0.1.0.2、0.3、0.4、0.5、0.6ml置于納氏比色管中，加水至總體積為1ml,加入4mlTBA溶液，然后按樣品測定步驟進(jìn)行，測得光密度繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。(2)樣品制備與檢測精確 稱取勻稱的豆油15g,置于100ml有蓋三角瓶內(nèi)，加入25ml三氯乙酸混合液，振搖半小時(保持油脂融溶狀態(tài)，如冷結(jié)即在70(水浴上略微加熱使之溶化后連續(xù)振搖)用雙層濾紙過濾，除去油脂。濾液重復(fù)用雙層濾紙過濾一次。精確 移取上述濾液10ml置于25ml比色管內(nèi)，加入lOmITBA溶液，混勻，加塞,置于90℃水浴內(nèi)保溫40min,取出，冷卻lh,移入小試管內(nèi),離心5min,上清液傾入25ml納氏比色管中，加入5ml氯仿，搖勻，靜置，分層，吸出上清液于532nm波特長,用2cm比色皿比色(同時作空白試驗X4.計算光密度(A532/kg)=丙二醛含量(mg/Kg)=［材料、儀器、藥品］.材料：植物抗逆性鑒定試驗中的四種菠菜樣品，即綠色和黃色葉片的高溫處理和室溫對比。.儀器：(1)分光光度計；⑵離心機；(3)水浴鍋：(4)天平；⑸研缽；⑹剪刀;⑺5ml刻度離心管；(9)刻度試管(10ml);(10)銀子；(11)移液管(5ml、2ml、lml);(12)冰箱。.藥品：(1)0.05mol/LpH7.8磷酸鈉緩沖液;(2)石英砂；⑶5%三氯乙酸溶液：稱取5g三氯乙酸，先用少量蒸儲水溶解，然后定容到100ml;(4)0.5%硫代巴比妥酸溶液：稱取0.5g硫代巴比妥酸,用5%三氯乙酸溶解，定容至100ml,即為0.5%硫代巴比妥酸的5%三氯乙酸溶液。［方法］.丙二醛的提?。喝?.5g樣品，加入2ml預(yù)冷的0.05mol/LpH7.8的磷酸緩沖液,加入少量石英砂，在經(jīng)過冰浴的研缽內(nèi)研磨成勻漿，轉(zhuǎn)移到5ml刻度離心試管，將研缽用緩沖液洗凈清洗也移入離心管中最終用緩沖液定容至5ml。在4500轉(zhuǎn)/min離心lOmin。上清液即為丙二醛提取液。.丙二醛含量測定：吸取2ml的提取液于刻度試管中,加入0.5%硫代巴比妥酸的5%三氯乙酸溶液3ml,于沸水浴上加熱lOmin，快速冷卻。于4500轉(zhuǎn)/min離心10mino取上清液于532、600nm波長下，以蒸儲水為空白調(diào)透光率100%,測定吸光度。.結(jié)果計算:(A532—A600)xVlxV.55xlO-lxWxV2丙二醛含量(nmol/g)=式中：A為吸光度;VI為反應(yīng)液總量(5ml);V為提取液總量(5ml);V2為反應(yīng)液中的提取液數(shù)量(2ml)；W為植物樣品重量(0.5g)；1.55xl0-l為丙二醛的微摩爾吸光系數(shù)在1升溶液中含有丙二醛時的吸光度X4.留意事項:0.1~0.5%的三氯乙酸對MDA—TBA反應(yīng)較合適，若高于此濃度，其反應(yīng)液的非專一性汲取偏高；MDA—TBA顯色反應(yīng)的加熱時間，最好掌握沸水浴10~15min之間。時間太短或太長均會引起532nm下的光汲取值下降；(3)如用MDA作為植物年輕指標(biāo)，首先應(yīng)檢驗被測試材料提取液是否能與TBA反應(yīng)形成532nm處的汲取峰。否則只測定532、600nm兩處A值，計算結(jié)果與實際狀況不符,測得的高A值是一個假象；(4)在有糖類物質(zhì)干擾條件下(如深度年輕時)，吸光度的增大，不再是由于脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物MDA含量的上升，而是水溶性碳水化合物的增加，由此轉(zhuǎn)變了提取液成