實驗四細胞的冷凍保存_第1頁
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關于實驗四細胞的冷凍保存第1頁，課件共11頁，創(chuàng)作于2023年2月一、實驗目的掌握細胞凍存與復蘇的基本原理、方法和要領熟練進行細胞凍存與復蘇的操作第2頁，課件共11頁，創(chuàng)作于2023年2月二、實驗原理細胞凍存的主要目的：保存種子細胞。減少細胞被污染的危險性。減少細胞因傳代培養(yǎng)而引起的遺傳變異和形態(tài)改變。避免有限細胞系出現衰老或惡性轉化。降低人力和物力。第3頁，課件共11頁，創(chuàng)作于2023年2月冰晶細胞脫水電解質濃度變化pH變化蛋白質變性水解酶釋出線粒體功能障礙細胞超微結構改變溶酶體膜透性變化核內DNA構型和生物學行為的變化細胞損傷冰晶對細胞的損傷第4頁，課件共11頁，創(chuàng)作于2023年2月冷凍保存原則

冷凍過程要緩慢。凍存細胞必須處在對數生長期細胞濃度控制在：1×107－5×107/ml使用高濃度血清或蛋白保護劑使用合適的細胞冷凍保護劑，以保護細胞在冷凍過程中免受冰晶破壞。第5頁，課件共11頁，創(chuàng)作于2023年2月細胞冷凍保護劑的選擇對細胞無毒易穿透進入細胞，使冰點降低提高細胞膜對水的通透性常用冷凍保護劑是DMSO(二甲基亞砜)GL(甘油)EG(乙二醇)第6頁，課件共11頁，創(chuàng)作于2023年2月標準冷凍程序降溫速率-1～-2℃/min；當溫度達-25℃以下時，可增至-5～-10℃/min到－100℃時，則可迅速浸入液氮中。第7頁，課件共11頁，創(chuàng)作于2023年2月簡易冷凍程序細胞凍存管放入泡沫小盒放入-70℃冰箱3h細胞凍存管放入紗布小袋中液氮表面上停留30min直接投入液氮細胞凍存管放入泡沫小盒放入-20℃冰箱3h細胞凍存管放入紗布小袋中放入液氮灌的液氮蒸汽中，逐漸下降到液氮表面（30－40min）停留30min后，直接投入液氮中細胞凍存管裝入紗布小袋液氮罐口緩慢放入，按-1℃/min，在30－40min內到達液氮表面停留30min投入液氮第8頁，課件共11頁，創(chuàng)作于2023年2月液氮從液體向氣體轉化的過程中產生的深低溫-196℃

第9頁，課件共11頁，創(chuàng)作于2023年2月本次冷凍程序細胞凍存管用厚棉花包裹，放入塑料盒中或泡沫盒中，直接投入-70℃超低溫冰

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