實(shí)驗(yàn)一、酒花中蘆丁的高效液相色譜測(cè)定實(shí)驗(yàn)報(bào)告

實(shí)驗(yàn)一、啤酒花中蘆丁的高效液相色譜法測(cè)定實(shí)驗(yàn)?zāi)康牧私馀c掌握高效液相色譜法(HPLC)分析原理與基本操作方法。2．實(shí)驗(yàn)藥品與儀器酒花超臨界CO萃取后的萃余物實(shí)驗(yàn)室自制；石油醚、甲醇(色譜純)、2乙醇、乙酸、蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品均購(gòu)自北京化學(xué)試劑公司，超純水購(gòu)自娃哈哈公司；Waters1525型高效液相色譜儀Waters2487型UV檢測(cè)器美國(guó)；超聲波清洗儀寧波新芝生物科技有限公司提供真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上海申生科技有限公司提供。3.實(shí)驗(yàn)方法酒花中蘆丁的提取步驟準(zhǔn)確稱取1g酒花樣品2份，用50%的乙醇溶液以1：20的料液比，在60°C下分別用超聲波提取1h后離心4000轉(zhuǎn)/分，15分鐘，取上清液為酒花蘆丁提取液，經(jīng)0.45pm濾膜過(guò)濾后，用于HPLC分析。HPLC測(cè)定蘆丁的步驟先用蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，再將樣品溶液用微量進(jìn)樣器吸取10pl樣品液進(jìn)樣分析,記錄色譜峰，測(cè)定樣品的蘆丁峰面積,代入標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程中計(jì)算相應(yīng)的蘆丁含量。HPLC測(cè)定條件：C柱(4.6mmX250mm),流動(dòng)相：甲醇-水-冰乙酸(40:60:182,V/V)；流速：1.0ml/min；柱溫：室溫，進(jìn)樣量：10pl；檢測(cè)波長(zhǎng)：280nm；靈敏度：0.05AUFS。蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線制備方法：取蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品適量，用甲醇制成10ppm，20ppm，40ppm，60ppm，80ppm，100ppm系列標(biāo)準(zhǔn)品溶液，分別進(jìn)樣，記錄峰面積，

以蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)繪制蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線（計(jì)算回歸方程為：Y=8.20X103X-4.77X103,相關(guān)系數(shù)為r=0.997981）。蘆丁的定性與定量分析：蘆丁的定性分析根據(jù)蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品的保留時(shí)間確定定量分析由蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品的標(biāo)準(zhǔn)曲線方法計(jì)算。蘆丁含量結(jié)果表示為mg/g酒花4.實(shí)驗(yàn)結(jié)果4.1蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備圖1蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品色譜峰NamerutinTime7.067Fit圖1蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品色譜峰NamerutinTime7.067FitTypeLinear(1stOrder)R:0.997981Rf0.995965EquationY=8.20eO03X-4.77e+003表1蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線測(cè)定數(shù)據(jù)蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品濃度1020406080100(mg/ml)HPLC峰面94310.0147600.0308800.0479500.0679900.0803400.04.2酒花提取液中蘆丁的測(cè)定NameRetentionTimePeakTypeArea%AreaHeight%HeightAmount%AmountUnitsIntegrationTypeRelativeRTRTRatioPL11.42Unkno879652.8679083.63BV5wn21.69Unkno6626521.581111651.00VV9wn7631.88Unkno125914.10211119.68VV7wn542.03Unkno5367817.482371610.88VV5wn952.50Unkno5352117.43141556.49VV1wn963.49Unkno111963.6560682.78VVI1r6.00 .51.水、 9 3一~L _9l_IIIIIIIIIIIIIII7.00 8.00 9.001 2.00 3.00 4.00 5.00Minutes0.121 2.00 3.00 4.00 5.00Minutes0.120.100.080.060.040.020.003.945.045.826.597.428.299.33UnknownUnknownUnknownUnknownUnknownUnknownUnkno3 3wn5.結(jié)果與討論26784144351424119934427