實(shí)驗(yàn)室樣本處理及方法

實(shí)驗(yàn)室樣本處理目前一頁\總數(shù)二十九頁\編于十三點(diǎn)定義實(shí)驗(yàn)室樣本處理標(biāo)準(zhǔn)化地收集、保存用于各種研究的正常或病理標(biāo)本，包括人體器官組織、全血、血漿、血清、生物體液或經(jīng)處理過的生物樣本（DNA、RNA、蛋白等）以及與這些生物樣本相關(guān)的臨床、病理、治療、隨訪、知情同意等資料及其質(zhì)量控制、信息管理與應(yīng)用系統(tǒng)。目前二頁\總數(shù)二十九頁\編于十三點(diǎn)生物樣本庫政策法規(guī)技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)

倫理規(guī)范ISO標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)室安全臨床實(shí)驗(yàn)室倫理運(yùn)輸標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)范（SOPs）

質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)樣本采集樣本處理樣本質(zhì)量檢驗(yàn)樣本儲(chǔ)存樣本運(yùn)輸DNA質(zhì)量鑒定、RNA質(zhì)量鑒定、蛋白質(zhì)質(zhì)量鑒定知情同意書質(zhì)量審查樣本運(yùn)輸樣本轉(zhuǎn)移協(xié)議倫理委員會(huì)倫理審查目前三頁\總數(shù)二十九頁\編于十三點(diǎn)ISO15189:2003醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量和能力的專用要求CNAS-CL02醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室-質(zhì)量和能力的認(rèn)可準(zhǔn)則ISO/IEC17025:2005檢測(cè)和校準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)室能力的通用要求CNAS-CL01檢測(cè)和校準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可準(zhǔn)則ISO9001:2008/GBT19001-2008質(zhì)量管理系統(tǒng)要求GB/T1.1-2009標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則：標(biāo)準(zhǔn)的結(jié)構(gòu)和編寫規(guī)則ISO標(biāo)準(zhǔn)目前四頁\總數(shù)二十九頁\編于十三點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室安全GB19489-2008實(shí)驗(yàn)室生物安全通用要求

CNAL/AC30-2005實(shí)驗(yàn)室生物安全認(rèn)可準(zhǔn)則WS/T233-2002微生物和生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室生物安全通用準(zhǔn)則GB50346-2004生物安全實(shí)驗(yàn)室建筑技術(shù)規(guī)范已建立實(shí)驗(yàn)室生物安全管理體系目前五頁\總數(shù)二十九頁\編于十三點(diǎn)臨床實(shí)驗(yàn)室GB/T20468-2006臨床實(shí)驗(yàn)室定量測(cè)定室內(nèi)質(zhì)量控制指南GB/T20469-2006臨床實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)總則GB/T20470-2006臨床實(shí)驗(yàn)室室間質(zhì)量評(píng)價(jià)要求WS/T102-1998臨床檢驗(yàn)項(xiàng)目分類與代碼WS/T224-2002真空采血管及其添加劑WS/T225-2002臨床化學(xué)檢驗(yàn)血液標(biāo)本的收集與處理WS/T227-2002臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程編寫要求WS/T228-2002定量臨床檢驗(yàn)方法的初步評(píng)價(jià)WS/T230-2002臨床診斷中聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）技術(shù)應(yīng)用WS/T249-2005臨床實(shí)驗(yàn)室廢物處理原則WS/T250-2005臨床實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量保證的要求WS/T251-2005臨床實(shí)驗(yàn)室安全準(zhǔn)則WS/T255-2005臨床檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)參考測(cè)量實(shí)驗(yàn)室目前六頁\總數(shù)二十九頁\編于十三點(diǎn)赫爾辛基宣言涉及人類為研究對(duì)象的生物醫(yī)學(xué)研究了國際倫理方針指南關(guān)于DNA序列申請(qǐng)專利的聲明：專利關(guān)于早期發(fā)布原始序列數(shù)據(jù)有關(guān)專利申請(qǐng)問題的聲明關(guān)于DNA取樣的聲明：控制與獲取世界人類基因組與人權(quán)宣言涉及人體的生物醫(yī)學(xué)研究倫理審查辦法（試行）人類基因治療申報(bào)臨床試驗(yàn)指導(dǎo)原則關(guān)于利益共享的聲明關(guān)于基因治療的聲明關(guān)于人類基因組數(shù)據(jù)庫的聲明國際涉及人類的生物醫(yī)學(xué)研究倫理準(zhǔn)則人類遺傳數(shù)據(jù)國際宣言綱要人體生物醫(yī)學(xué)研究國際倫理指南倫理目前七頁\總數(shù)二十九頁\編于十三點(diǎn)物流術(shù)語液氮生物容器中國民用航空危險(xiǎn)品運(yùn)輸管理規(guī)定危險(xiǎn)物品航空安全運(yùn)輸技術(shù)細(xì)則運(yùn)輸目前八頁\總數(shù)二十九頁\編于十三點(diǎn)組織機(jī)構(gòu)樣本庫管理委員會(huì)專家委員會(huì)倫理委員會(huì)樣本庫職能部門樣本庫負(fù)責(zé)人業(yè)務(wù)主管質(zhì)量主管專職技術(shù)人員所有從業(yè)人員應(yīng)取得《崗前培訓(xùn)考核合格證》目前九頁\總數(shù)二十九頁\編于十三點(diǎn)生物樣本庫工作流程標(biāo)本采集標(biāo)本處理入庫登記標(biāo)本儲(chǔ)存質(zhì)控YesNo銷毀《廢棄物處置操作程序》抽檢NoYes標(biāo)本使用使用申請(qǐng)標(biāo)本發(fā)放剩余標(biāo)本回收數(shù)據(jù)庫目前十頁\總數(shù)二十九頁\編于十三點(diǎn)標(biāo)本采集生物標(biāo)本采集和儲(chǔ)存研究成功的關(guān)鍵要求根據(jù)所采樣本的類型和所分析的物質(zhì)而定在采集和儲(chǔ)存過程中不能受到“污染”

儲(chǔ)存的生物標(biāo)本在任何時(shí)候進(jìn)行檢測(cè)都可以獲得一致的結(jié)果所有的生物標(biāo)本都應(yīng)有詳細(xì)的背景材料和鑒別標(biāo)識(shí)目前十一頁\總數(shù)二十九頁\編于十三點(diǎn)標(biāo)本采集舉例尿液標(biāo)本晨尿濃縮尿，適用于尿常規(guī)檢查隨機(jī)尿僅適用于門診、急診尿常規(guī)過篩檢驗(yàn)空腹尿糖尿病患者餐前尿糖測(cè)定餐后尿餐后兩小時(shí)采集，適用于糖尿病患者病理性蛋白尿、糖尿檢查12h尿晚上8點(diǎn)排空尿液后12小時(shí)內(nèi)采集的所有尿液。用于尿沉渣計(jì)數(shù)、尿微量白蛋白排泄率測(cè)定等12h禁水尿晚8時(shí)開始禁飲，次日早8時(shí)排空膀胱后再次留取的尿液，適用于尿滲透壓檢測(cè)24h尿上午8時(shí)排盡后，收集接下來24小時(shí)內(nèi)排出的所有尿液，記錄總尿量，用于體內(nèi)代謝產(chǎn)物的定量檢測(cè)，如尿蛋白、尿糖、尿肌酐、尿鈣、尿兒茶酚胺、檢查等培養(yǎng)用尿留尿前先清洗外陰，消毒尿道口后，以無菌容器只接留中段尿10ml，用于微生物檢查目前十二頁\總數(shù)二十九頁\編于十三點(diǎn)標(biāo)本采集尿液標(biāo)本的保存-最好不超過2h

尿液化學(xué)物質(zhì)和有形成份不穩(wěn)定，排出后即開始發(fā)生物理和化學(xué)變化，如膽紅素、尿膽原被氧化，細(xì)菌生長，尿素酵解生成氨使尿pH升高，尿液有形成份破壞，葡萄糖被細(xì)菌利用而降低。尿液保存常用方法有兩種：

1.冷藏法：4℃條件下不超過8h可抑制微生物生長，維持尿液pH恒定，使尿中有形成份的形態(tài)基本不變，但是可導(dǎo)致磷酸鹽和尿酸鹽析出形成沉淀，影響尿沉渣檢查。目前十三頁\總數(shù)二十九頁\編于十三點(diǎn)標(biāo)本采集尿液標(biāo)本的保存-最好不超過2h

尿液化學(xué)物質(zhì)和有形成份不穩(wěn)定，排出后即開始發(fā)生物理和化學(xué)變化，如膽紅素、尿膽原被氧化，細(xì)菌生長，尿素酵解生成氨使尿pH升高，尿液有形成份破壞，葡萄糖被細(xì)菌利用而降低。尿液保存常用方法有兩種：2.化學(xué)防腐法：①甲苯：（一般用量為1.0～2.0ml甲苯/100ml尿液），防止細(xì)菌污染，通常用于尿酮體、尿糖，尿蛋白質(zhì)等測(cè)定②甲醛：每100ml尿液加40%甲醛0.5ml，可抑制細(xì)菌生長并固定尿中有形成份，適用于尿液中細(xì)胞與管型的測(cè)定；③麝香草酚：用10%的麝香草酚異丙醇溶液，達(dá)到抑菌及保護(hù)代謝物的作用，適用于尿鉀、鈉、鈣等測(cè)定④濃鹽酸：每100ml尿標(biāo)本中加入濃鹽酸1ml即可，使尿液維持在pH2.0左右。主要可用于17-羥皮質(zhì)類因醇、17-酮類固醇、兒茶酚胺、VMA等定量測(cè)定等。目前十四頁\總數(shù)二十九頁\編于十三點(diǎn)標(biāo)本采集樣本采集操作規(guī)程血液糞便尿液口腔拭子唾液陰道拭子皮膚拭子目前十五頁\總數(shù)二十九頁\編于十三點(diǎn)標(biāo)本采集目前十六頁\總數(shù)二十九頁\編于十三點(diǎn)標(biāo)本運(yùn)送血液標(biāo)本采集后應(yīng)盡快從采血現(xiàn)場(chǎng)運(yùn)送至實(shí)驗(yàn)室，注意是否存在干擾血凝塊。

標(biāo)本運(yùn)送過程中要注意樣本的包裝、溫度要求及處理方法等，要確保分析成分的穩(wěn)定性，標(biāo)本管在運(yùn)送過程中要保持管口封閉，向上垂直放置，避免劇烈振動(dòng)尿液標(biāo)本從流取到檢驗(yàn)應(yīng)在2小時(shí)內(nèi)完成，如不能及時(shí)送檢分析，必須加防腐劑或冷藏不超過8小時(shí)細(xì)菌檢查標(biāo)本應(yīng)采用消毒容器，防止細(xì)菌污染，室溫條件不超過2小時(shí)或4℃冷藏保存。目前十七頁\總數(shù)二十九頁\編于十三點(diǎn)標(biāo)本運(yùn)送目前十八頁\總數(shù)二十九頁\編于十三點(diǎn)標(biāo)本處理和保存標(biāo)本采集后應(yīng)及時(shí)處理、分裝后保存血液標(biāo)本處理操作規(guī)程DNA提取和純化操作規(guī)程：血液、糞便、棉拭子、唾液RNA提取和純化操作規(guī)程：血液、棉拭子蛋白質(zhì)提取和保存操作規(guī)程目前十九頁\總數(shù)二十九頁\編于十三點(diǎn)標(biāo)本處理和保存血液標(biāo)本處理操作規(guī)程全血、血清、血漿、干血片、血凝塊、白細(xì)胞血清：指全血不經(jīng)抗凝處理，在凝固過程中，血漿中除去纖維蛋白原分離出的淡黃色透明液體或指纖維蛋白原已被除去的血漿血漿：離開血管的全血經(jīng)抗凝處理后，通過離心沉淀，所獲得的不含細(xì)胞成分的液體，其中含有纖維蛋白原。全血：由液態(tài)血漿和血細(xì)胞組成目前二十頁\總數(shù)二十九頁\編于十三點(diǎn)標(biāo)本處理和保存血液標(biāo)本處理操作規(guī)程全血標(biāo)本的保存生化檢驗(yàn)：盡可能在2小時(shí)內(nèi)檢驗(yàn)或分離血清/血漿，不能及時(shí)分離或檢驗(yàn)時(shí)，應(yīng)4℃低溫冷藏，不能超過24小時(shí)。操作時(shí)動(dòng)作應(yīng)輕柔，避免劇烈振蕩，避免溫度變化過大或凍融，易導(dǎo)致溶血。DNA檢測(cè)：4℃保存不超過7天，-20℃保存不超過一年，-80℃長期保存RNA檢測(cè)：采集后應(yīng)盡快分離血細(xì)胞、血清/血漿，或加入RNA抑制劑（如trizol），

-20℃保存不超過2個(gè)月，-80℃保存不超過半年。目前二十一頁\總數(shù)二十九頁\編于十三點(diǎn)標(biāo)本處理和保存血液標(biāo)本處理操作規(guī)程血清的分離采血時(shí)應(yīng)采用無抗凝劑的采血管；采血后，室溫（22～25℃）放置30～60min，加促凝劑時(shí)凝集加快（5～15min)，1000～1200g離心10min，吸取上層淡黃色上清液。有凝膠屏障的分離管可保存在4℃，24小時(shí)內(nèi)吸取上層血清；無凝膠屏障的必須立即吸取上層血清。保存條件常溫下不超過8小時(shí)；4

℃不超過48小時(shí)；48小時(shí)以上的應(yīng)置于-20℃保存；提取RNA的應(yīng)立即置于-80

℃保存。避免反復(fù)凍融。目前二十二頁\總數(shù)二十九頁\編于十三點(diǎn)標(biāo)本處理和保存血液標(biāo)本處理操作規(guī)程血漿的分離采血時(shí)應(yīng)采用有抗凝劑的采血管；采血后，1000～1200g離心10min，吸取上層淡黃色上清液。有凝膠屏障的分離管可保存在4℃，24小時(shí)內(nèi)吸取上層血清；無凝膠屏障的必須立即吸取上層血清。保存條件常溫下不超過8小時(shí)；4

℃不超過48小時(shí)；48小時(shí)以上的應(yīng)置于-20℃保存；提取RNA的應(yīng)立即置于-80

℃保存。避免反復(fù)凍融。目前二十三頁\總數(shù)二十九頁\編于十三點(diǎn)質(zhì)量控制標(biāo)本入庫前應(yīng)經(jīng)過質(zhì)量控制，符合質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的標(biāo)本才能入庫①符合標(biāo)本采集、處理的要求，檢查采集和處理記錄②標(biāo)本信息采集表填寫完整③標(biāo)本運(yùn)送符合要求，交接運(yùn)送記錄完整④標(biāo)本管無空管、無破損、良好密封，標(biāo)簽清晰完整、無脫落⑤檢查標(biāo)本是否受到污染，核酸質(zhì)量目前二十四頁\總數(shù)二十九頁\編于十三點(diǎn)標(biāo)本入庫編號(hào)原則總原則：唯一性、共享性輔原則：在滿足總原則基礎(chǔ)上，盡量精簡(jiǎn)，編號(hào)長度盡量保持統(tǒng)一生物樣本庫信息表目前二十五頁\總數(shù)二十九頁\編于十三點(diǎn)標(biāo)本入庫標(biāo)本編號(hào)原則總原則：唯一性、共享性輔原則：在滿足總原則基礎(chǔ)上，盡量精簡(jiǎn)，編號(hào)長度盡量保持統(tǒng)一舉例：2017年收到的第102份標(biāo)本，類型是糞便，目的用于結(jié)腸道菌群分析1700102D15W212017年收到的第256份標(biāo)本，類型是血清，目的用于心梗的研究

1700256G01BS1目前二十六頁\總數(shù)二十九頁\編于十三點(diǎn)標(biāo)本使用使用申請(qǐng)：填寫《標(biāo)本申請(qǐng)單》標(biāo)本發(fā)放：填寫《標(biāo)本使用登記表》標(biāo)本銷毀：按照感染性廢棄物，執(zhí)行《廢棄物處置操