常規(guī)細(xì)胞學(xué)染色方法

病理檢驗(yàn)技術(shù)

細(xì)胞病理學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)概述常規(guī)細(xì)胞學(xué)染色方法一、染色的作用沒有經(jīng)過染色的細(xì)胞,難以通過顯微鏡觀察到細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)內(nèi)部各種細(xì)微的結(jié)構(gòu),因此,需要用不同的染料將細(xì)胞的形態(tài)結(jié)構(gòu)及不同的成分顯示出來,以便在顯微鏡下進(jìn)行觀察。二、染色機(jī)制一般認(rèn)為細(xì)胞染色主要是通過物理吸附作用和化學(xué)結(jié)合作用來使細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)染上不同的顏色,并且產(chǎn)生不同的折射率,從而能通過顯微鏡來觀察。1.物理吸附作用

染料的色素成分被吸附進(jìn)入組織和細(xì)胞間隙內(nèi)而顯色。2.化學(xué)結(jié)合作用

染料的助色團(tuán)具有與組織細(xì)胞很強(qiáng)的親和力,能夠與細(xì)胞及其細(xì)胞內(nèi)相應(yīng)物質(zhì)結(jié)合生成有色的不溶性的化合物沉淀而顯色。三、常規(guī)染色方法細(xì)胞學(xué)染色方法有多種,主要有常規(guī)染色、特殊染色(或稱細(xì)胞化學(xué)染色)和免疫細(xì)胞化學(xué)染色。可根據(jù)不同的檢驗(yàn)要求和研究目的加以選擇應(yīng)用;特殊染色和免疫組織化學(xué)染色方法。常規(guī)染色法有巴氏(Papanicolaou)法、HE法和邁格林華吉姆薩染色(MGG染色)法等。（一）巴氏染色巴氏染色起初僅用于陰道上皮雌激素水平的測(cè)定以及檢測(cè)生殖道念珠菌、滴蟲等病原體的感染。染色方法經(jīng)過不斷改良后,胞質(zhì)染色液分別有EA36、EA50和EA65。目前主要用于婦科細(xì)胞學(xué)涂片染色,多采用EA36和EA50染色液,是用來篩查宮頸癌及癌前病變的常用細(xì)胞學(xué)染色方法。巴氏染色也適合胸、腹水、痰液等非婦科標(biāo)本的染色,常采用EA65染色液。染色操作流程(1)涂片用95%的乙醇-冰醋酸固定液固定10~15分鐘。(2)95%的乙醇、80%的乙醇、70%的乙醇、蒸餾水分別浸泡1分鐘。(3)改良Lillie-Mayer蘇木精染液染色5~10分鐘。(4)自來水中沖洗多余染液。(5)1%的鹽酸乙醇液分化約4秒。(6)1%的碳酸鋰水溶液藍(lán)化1分鐘,自來水洗5分鐘。(7)依次置入70%的乙醇、80%的乙醇、95%的乙醇(1)和95%的乙醇(Ⅱ)各1分鐘。(8)橘黃G液染色1-2分鐘(此步可省略)。(9)依次在95%的乙醇(I)、95%的乙醇(Ⅱ)漂洗去掉多余橘黃G染液。(10)EA36染液染色3~5分鐘。(11)依次用95%的乙醇(1)、95%的乙醇(Ⅱ)、無(wú)水乙醇(1)和無(wú)水乙醇(Ⅱ)脫水各1分鐘。(12)二甲苯透明,中性樹脂封片。3.結(jié)果

角化細(xì)胞胞質(zhì)呈粉紅色,全角化細(xì)胞胞質(zhì)呈橘黃色,角化前細(xì)胞胞質(zhì)呈淺藍(lán)色或淺綠色,細(xì)胞核呈藍(lán)紫色,核仁呈橘紅色,白細(xì)胞核呈藍(lán)色,胞質(zhì)呈淡藍(lán)淡綠,紅細(xì)胞呈橙紅色。(二)蘇木精-伊紅(HE)染色方法染色操作(1)涂片從95%的乙醇-冰醋酸固定液內(nèi)取出,80%的乙醇浸泡1分鐘。(2)蒸餾水洗1分鐘。(3)改良Lillie.-Mayer蘇木精染液染色5~10分鐘。(4)自來水沖洗1分鐘。(5)0.5%的鹽酸乙醇液分化3-5秒。(6)自來水沖洗促藍(lán)10分鐘中,80%的乙醇浸洗1分鐘。(7)0.5%的伊紅Y乙醇液染色1分鐘。(8)80%6的乙浸洗1分鐘。(9)依次用95%的乙醇(1)、95%的乙醇(Ⅱ)、100%的乙醇(I)和100%的乙醇(Ⅱ)脫水各1分鐘。(10)二甲苯透明,中性樹膠封片。染色結(jié)果胞質(zhì)呈淡紅色,胞核呈紫藍(lán)色,核仁呈紅色。(三)邁格林華-吉姆薩染色(MGG染色)法染色操作(1)涂片固定后蒸餾水洗2ml。(2)邁格林華染液滴染15分鐘。(3)倒棄涂片上的染液,用自來水沖洗干凈。(4)吉姆薩染液滴染15