臨床實(shí)驗(yàn)室LC-MSMS檢驗(yàn)的質(zhì)量管理 廣東省中醫(yī)院檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)部

臨床實(shí)驗(yàn)室LC-MS/MS檢驗(yàn)的質(zhì)量管理廣東省中醫(yī)院檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)部黃憲章報(bào)告提綱1.

色譜質(zhì)譜技術(shù)原理2.

LC-MS臨床應(yīng)用3.

LC-MS質(zhì)量控制質(zhì)譜技術(shù)原理質(zhì)譜儀（MS）

由離子源、真空接口、質(zhì)量分析器和檢測器組成。

根據(jù)檢測器類型可分為磁質(zhì)譜、四級桿質(zhì)譜、離子阱質(zhì)譜、傅里葉回旋共振質(zhì)譜、飛行時(shí)間質(zhì)譜。TurboVLINAC?三級四極桿線性離子阱離子傳輸一級四極桿檢測器離子源線性加速碰撞室質(zhì)譜技術(shù)的缺陷及修正

質(zhì)譜技術(shù)的缺陷——樣品必須單一、純凈。

缺陷的修正——色譜串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)。色譜技術(shù)原理

色譜技術(shù)：是一種分離技術(shù)，利用組分在兩相間分配系數(shù)不同而進(jìn)行分離的技術(shù)，色譜的主要目的是對混合物中的目標(biāo)物分離和定量。

色譜技術(shù)包括：氣相色譜、液相色譜等。

液相色譜（高效液相色譜-

High

Performance

Liquid

Chromatography

）：

以液體作為流動相的色譜分離方法，適用于高沸點(diǎn)、

大分子、強(qiáng)極性和熱穩(wěn)定性差的化合物的分析；

流動相具有運(yùn)載樣品分子和選擇性分離的雙重作用。色譜技術(shù)原理

流動相：攜帶樣品流過整個(gè)系統(tǒng)的流體；

固定相：靜止不動的一相；

色譜柱：裝填有固定相用以分離混合組分的柱管；

檢測器：常見的有紫外檢測器、示差折光檢測器和熒光檢測器；

色譜圖：色譜柱流出物通過檢測器系統(tǒng)產(chǎn)生的響應(yīng)信號對時(shí)間或載體流出體積的曲線圖。色譜技術(shù)原理氣相色譜儀（GC）?

進(jìn)樣系統(tǒng)?

載氣系統(tǒng)

常用氮?dú)狻⒑獾?

分離系統(tǒng)

色譜柱?

檢測系統(tǒng)

熱導(dǎo)檢測器（TCD）

氫火焰離子化檢測器（FID）

火焰光度檢測器（FPD）

質(zhì)譜檢測器（MS）……?

數(shù)據(jù)獲取與處理系統(tǒng)色譜技術(shù)原理高效液相色譜儀（HPLC）?

進(jìn)樣系統(tǒng)?

輸液系統(tǒng)

高壓輸液泵?

脫氣機(jī)?

分離系統(tǒng)

色譜柱?

檢測系統(tǒng)

紫外檢測器（UV）

二極管陣列檢測器（DAD)

熒光檢測器

（FLD）

質(zhì)譜檢測器（MS）……?

數(shù)據(jù)獲取與處理系統(tǒng)串聯(lián)質(zhì)譜（MS/MS）

串聯(lián)質(zhì)譜的優(yōu)點(diǎn)：

可以獲得更多有關(guān)待測離子的結(jié)構(gòu)信息，適合未知化合物的結(jié)構(gòu)分析；

對相同分子量的化合物共流出物可進(jìn)行區(qū)分，提高了檢測特異性；

對于復(fù)雜樣本的分析可提高子離子的選擇性、提高信噪比、降低檢測限，提高定量結(jié)果的準(zhǔn)確性。

基于串聯(lián)質(zhì)譜的優(yōu)越性能，為了深入的認(rèn)識待測離子的性質(zhì)及提高檢測能力，目前用于生命科學(xué)的質(zhì)譜儀器幾乎都是兩級或多級串聯(lián)質(zhì)譜。液相色譜質(zhì)譜技術(shù)原理色譜質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)?

液相色譜-質(zhì)譜技術(shù)（LC-MS）LCMS高分離能力高靈敏度、高特異性液相色譜質(zhì)譜技術(shù)原理電離源質(zhì)譜儀分析時(shí)，樣本必須先進(jìn)行離子化電離模式

主要特點(diǎn)優(yōu)點(diǎn)主要應(yīng)用電子轟擊（EI）硬電離，給樣本較大的能量而電離1.得到豐富的碎片離子，有助于有機(jī)化合物的結(jié)構(gòu)鑒定2.

常用于揮發(fā)性樣本的電離GC-MS化學(xué)電離（CI）軟電離1.碎片離子稍，圖譜簡易，易于解析2.一些穩(wěn)定性差的化合物適合GC-MS電噴霧電離（ESI）軟電離，生成帶電液滴1.適合范圍廣:分析離子型/極性化合物、難揮發(fā)或

LC-MS熱不穩(wěn)定性化合物2.

多電荷離子的形成，可以分析高分子量化合物、靈敏度高大氣壓化學(xué)軟電離，電離（APCI）

液體分子轉(zhuǎn)變1.有一定揮發(fā)性的中等極性或低極性的小分子化合物L(fēng)C-MS為氣體分子2.對溶劑選擇、流速和添加物的依賴性較小20世紀(jì)80年代，軟電離技術(shù)的發(fā)明，推動了LC-MS聯(lián)用技術(shù)的迅速發(fā)展！高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜儀特點(diǎn)

以液相色譜作為分離系統(tǒng)，質(zhì)譜為檢測系統(tǒng);

液質(zhì)聯(lián)用體現(xiàn)了色譜和質(zhì)譜優(yōu)勢的互補(bǔ)，將色譜對復(fù)雜樣品的高分離能力，與MS具有高選擇性、高靈敏度及能夠提供相對分子質(zhì)量與結(jié)構(gòu)信息的優(yōu)點(diǎn)結(jié)合起來。LC-MS的優(yōu)勢

分析范圍廣：MS幾乎可以檢測所有的化合物，比較容易地解決了分析熱不穩(wěn)定化合物的難題；

分離能力強(qiáng)：即使被分析混合物在色譜上沒有完全分離開，但通過MS的特征離子質(zhì)量色譜圖也能分別給出它們各自的色譜圖來進(jìn)行定性定量；

檢測限低，MS具備高靈敏度：通過選擇離子檢測（

selectiveionmonitoring,SIM）方式，其檢測能力還可以提高一個(gè)數(shù)量級以上；

定性分析結(jié)果可靠：可以同時(shí)給出每一個(gè)組分的分子量和豐富的結(jié)構(gòu)信息；與其他方法的比較?

免疫法?

GC-MS法放射免疫分析法：放射性核素污染標(biāo)記物容易衰變要求分析物易揮發(fā)，樣品需要進(jìn)行衍生化；增加樣品預(yù)處理時(shí)間，樣品遇熱易降解；酶免疫法：自動化程度不高特異性不夠?

LC-MS/MS法?

化學(xué)發(fā)光法靈敏度可能不足。特異性強(qiáng)，可從眾多化合物中選擇想要檢測的對象；非特異性反應(yīng)靈敏度較好，具有多通道檢測能力。LC-MS/MS綜合優(yōu)勢?

高準(zhǔn)確性和特異性，直接測定質(zhì)量,

專一、靈敏、通用（免疫分析對小分子化合物存在檢測缺陷）；?

LC-MS/MS技術(shù)已成為目前生物樣品中小分子化合物定性定量測定的金標(biāo)準(zhǔn)方法?

比HPLC和GC-MS容易使用，通量更大，是免疫分析法的主要互補(bǔ)方法；?

與其他技術(shù)相比，長期運(yùn)行成本低：使用通用試劑、消耗品成本低廉，大批量測定有優(yōu)勢；?

一針進(jìn)樣可同時(shí)檢測多個(gè)化合物。LC-MS的劣勢?

儀器成本高?

商品試劑盒少?

需要專職人員操作和維修保養(yǎng)儀器?

需要高技術(shù)人員進(jìn)行方法學(xué)研究?

標(biāo)本前處理自動化設(shè)備比手工處理差?

成批檢測，不利于急診檢驗(yàn)?

單位時(shí)間檢測的標(biāo)本量比常規(guī)化學(xué)低?

質(zhì)量管理法規(guī)等不健全?

很多項(xiàng)目沒有收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)?

有的項(xiàng)目沒有標(biāo)準(zhǔn)品與內(nèi)標(biāo)?

使用有機(jī)溶劑不利于環(huán)境保護(hù)、不利于工作人員的健康報(bào)告提綱1.

色譜質(zhì)譜技術(shù)原理2.

LC-MS臨床應(yīng)用3.

LC-MS質(zhì)量控制質(zhì)譜技術(shù)在檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用?

可以在質(zhì)譜平臺開展的項(xiàng)目

臨床上有需求的項(xiàng)目

現(xiàn)在物理、化學(xué)、免疫等方法無法準(zhǔn)確定性定量的項(xiàng)目

現(xiàn)在物理、化學(xué)、免疫等方法報(bào)告時(shí)間長的項(xiàng)目

現(xiàn)在物理、化學(xué)、免疫等方法成本高的項(xiàng)目

沒有商品化試劑盒的項(xiàng)目質(zhì)譜技術(shù)在檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用1.

新生兒疾病篩查（ID-MS）2.微量元素檢測（ICP-MS）3.微生物鑒定（MALDI-TOF-MS

）4.

違禁藥品的檢測（運(yùn)動員賽后檢測，GC-MS，LC-MS）5.

治療藥物監(jiān)測（抗免疫排斥反應(yīng)藥物、治療神經(jīng)精神病類藥物、抗心律失常藥、腫瘤靶向治療藥物等，

LC-MS

）6.

毒品檢測（吸毒者的診斷與監(jiān)測，LC-MS）7.小分子激素水平測定（

GC-MS，LC-MS）8.

維生素測定：A、D、E、K及B族維生素等（LC-MS）9.

遺傳代謝病檢測：膽汁酸檢測等（LC-MS）10.蛋白鑒定和定量：糖化血紅蛋白、胰島素、C肽、PTH、血管緊張素等（LC-MS）11.

……串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)（MS/MS）在新生兒遺傳代謝病篩查上應(yīng)用氨基酸代謝?。?5種）

有機(jī)酸血癥（13種）

脂肪酸氧化障礙疾?。?2種）高苯丙氨酸血癥；楓糖尿?。∕SUD）；氨甲酰磷酸合成酶缺乏癥；高胱氨酸尿癥；高蛋氨酸血癥；酪氨酸血癥；3-羥-3-甲基戊二酰輔酶A裂解酶缺

肉堿轉(zhuǎn)運(yùn)障礙；乏癥；肉堿／?；鈮A轉(zhuǎn)移酶缺乏癥；戊二酸血癥；肉堿棕櫚酰轉(zhuǎn)移酶缺乏I型；丙酸血癥；肉堿棕櫚酰轉(zhuǎn)移酶缺乏II型；極長鏈酰基輔酶A脫氫酶缺乏癥；3-羥基長鏈酰基輔酶A脫氫酶缺乏癥；線粒體三官能蛋白缺乏癥；2-甲基丁酰輔酶A脫氧酶缺乏癥；甲基丙二酸血癥；異戊酸血癥；精氨酸血癥；精氨琥珀酸尿癥；瓜氨酸血癥；精氨酸血癥；3-甲基巴豆酰輔酶A羧化酶缺乏癥；

中鏈?；o酶A脫氫酶缺乏癥；多種輔酶A羧化酶缺乏癥；線粒體乙酰輔酶A硫解酶缺乏癥；丙二酸尿癥；羥基短鏈?；o酶A脫氫酶缺乏癥；多種酰基輔酶A脫氫酶缺乏癥；短鏈?；o酶A脫氫酶缺乏癥；2,4-二烯酰輔酶A還原酶缺乏癥；高脯氨酸血癥；高血氨癥、同型瓜氨酸尿癥、高鳥

異丁?；o酶A脫氫酶缺乏癥；氨酸血癥綜合癥；高鳥氨酸血癥；3-甲基戊烯二酰輔酶A水解酶缺乏癥；生物素酶缺乏癥；苯丙酮尿癥（PKU）；5-羥脯氨酸尿癥；電感耦合等離子體質(zhì)譜技術(shù)（ICP-MS）

無機(jī)元素測定，快速、準(zhǔn)確的檢測人體內(nèi)必需元素和有毒有害元素；

穩(wěn)定同位素示蹤研究；

元素形態(tài)分析。血清鈣、鎘、鎂、錳、鉛、鐵、銅、硒；全血鉛、錳、鋅、鐵、銅、鎂、鈣、硒；尿鎘、鉻、汞、鎂、錳、鎳、鉛、砷、鐵、銅、硒、鋅；基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時(shí)間質(zhì)譜

（MALDI-TOF

MS）

微生物鑒定

蛋白質(zhì)組學(xué)檢測

基于蛋白質(zhì)組學(xué)的

MALDI-TOF

MS技術(shù)首先用大量的菌株建立數(shù)據(jù)庫，常規(guī)檢測時(shí)通過軟件分析比較，篩選并確定待檢病原體的指紋圖，與數(shù)據(jù)庫中各種已知的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜進(jìn)行比對，完成對微生物的鑒定。報(bào)告提綱1.

色譜質(zhì)譜技術(shù)原理2.

LC-MS臨床應(yīng)用3.

LC-MS質(zhì)量控制LC-MS質(zhì)量管理的相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)?CLSI：Standard:

C50;Mass

Spectrometry

inthe

ClinicalLaboratory:

General

Principles

and

Guidance,

1st

EditionStandard:

C62;Liquid

Chromatography-Mass

Spectrometry

Methods,

1st

EditionStandard:

C57;Mass

Spectrometry

for

Androgen

and

Estrogen

Measurements

inSerum,

1st

EditionStandard:

C43;Gas

Chromatography/Mass

Spectrometry

Confirmation

of

Drugs,

2nd

EditionStandard:

NBS04;

Newborn

Screeningby

Tandem

Mass

Spectrometry,

2nd

EditionStandard:

M58;

Methods

for

the

Identification

of

CulturedMicroorganisms

Using

Matrix-Assisted

LaserDesorption/Ionization

Time-of-Flight

Mass

Spectrometry,

1st

EditionStandard:

CLSI/CAP2018

AST

Webinar;

CLSI/CAPWebinar:

Resources

for

Implementation

of

Matrix-Assisted

LaserDesorption/Ionization

Time-Of-Flight

Mass

Spectrometry

(MALDI-TOF

MS)

inthe

ClinicalMicrobiology

Laboratory?Standard:

C40;Measurement

Proceduresfor

the

Determination

of

Lead

Concentrations

inBlood

andUrine,

2nd

EditionCLSI：EP等文件?CAP：?Chemistry

and

Toxicology

Checklist（TLC，GC，HPLC，MS，ICP/MS）Microbiology

Checklist（MALDI-TOF，GC，HPLC）FDA：Guidance

for

industry

bioanalytical

method

validationEMA(European

Medicines

Agency):

Guideline

on

bioanalytical

Method

ValidationSWGTOX(Scientific

working

group

forensic

toxicology

):

Standardpractices

for

method

validation???中華醫(yī)學(xué)會檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)分會，衛(wèi)生計(jì)生委臨床檢驗(yàn)中心，《中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志》編輯部：液相色譜-質(zhì)譜臨床應(yīng)用建議.

中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2017，40（10）：770-779.?SFDA：人

員?實(shí)驗(yàn)室主任：LC/MS作為實(shí)驗(yàn)室自建項(xiàng)目，實(shí)驗(yàn)室主任需要確保LC/MS在開展前完成：

檢測性能確立與臨床應(yīng)用評估

建立完善的質(zhì)量控制體系

編寫從標(biāo)本采集到結(jié)果解釋全過程的規(guī)范化操作規(guī)程，并且簽字許可新的LC/MS方法認(rèn)證報(bào)告以及執(zhí)行。?操作人員要求

研發(fā)人員應(yīng)具備分析化學(xué)、藥學(xué)、生物化學(xué)、生命科學(xué)或醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)等相關(guān)的教育背景和工作經(jīng)歷。藥學(xué)、分析化學(xué)專業(yè)有優(yōu)勢。

操作人員應(yīng)經(jīng)培訓(xùn)、考核后才能上崗操作。

實(shí)驗(yàn)室須制定人員培訓(xùn)計(jì)劃，包括實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部及外部培訓(xùn)。所有培訓(xùn)應(yīng)有記錄證明相應(yīng)實(shí)驗(yàn)操作人員通過培訓(xùn)考核。實(shí)驗(yàn)室應(yīng)建立每一位內(nèi)部人員的檔案記錄，包括員工的簡歷、教育背景、工作經(jīng)驗(yàn)、培訓(xùn)考評記錄等。

選擇有經(jīng)驗(yàn)的人員、注重工作細(xì)節(jié)的人員、有創(chuàng)新能力的人員。設(shè)施和環(huán)境條件

確保實(shí)驗(yàn)室環(huán)境條件不會使結(jié)果無效，或?qū)λ蟮臏y量質(zhì)量產(chǎn)生不良影響！

實(shí)驗(yàn)室應(yīng)建立設(shè)施和環(huán)境管理程序????實(shí)驗(yàn)室應(yīng)監(jiān)測、控制和記錄環(huán)境條件；灰塵、電磁干擾、溫度、濕度等對液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜儀有影響。一般要求溫度控制在15℃

-30

℃或

20℃-30℃，濕度范圍為20-80%

或20％-70％。儀器要求配備穩(wěn)壓電源、所需輔助氣體純度符合要求、供氣充足、氣路通暢。

應(yīng)有效避免：–

儀器真空泵噪音干擾；–

氣體瓶對儀器干擾；–

揮發(fā)性氣體污染儀器

儀器放置：儀器室、操作電腦室、標(biāo)本處理室、氣體室分開?標(biāo)本處理室應(yīng)安裝通風(fēng)櫥、儀器室應(yīng)安裝排氣裝置設(shè)施和環(huán)境條件?

最小房間面積滿足操作要求?

環(huán)境溫度為15-30度（注意儀器產(chǎn)生的熱量）；隨著時(shí)間的推移，溫度必須保持在4度的范圍內(nèi)，溫度變化率不超過2度/小時(shí)，超過極限波動的溫度可導(dǎo)致質(zhì)譜中的質(zhì)量漂移。?

相對濕度20-80%，不凝結(jié)。?

質(zhì)譜儀和粗抽泵的冷卻和排氣：8700BTU/HR?

無振動環(huán)境?

無化學(xué)干擾?

無電磁干擾?

有機(jī)溶劑和分析物對環(huán)境無影響設(shè)施和環(huán)境條件?

防止靜電

在一個(gè)相對濕度為20%的房間里走動可以產(chǎn)生高達(dá)35000V的靜電電位在你的身體表面，在相對濕度為80%的房間里走動可以產(chǎn)生高達(dá)1500V的靜電電位。

在一個(gè)相對濕度為20%的房間里坐在聚氨酯泡沫填充的椅子上工作，在你的皮膚表面可產(chǎn)生高達(dá)18000V的靜電電位，在相對濕度為80%的房間里可以產(chǎn)生高達(dá)1500V的靜電電位。

在實(shí)驗(yàn)室穿合成纖維制成的工作服會導(dǎo)致靜電堆積在皮膚上累積。

使用聚苯乙烯泡沫塑料杯和包裝材料會產(chǎn)生相當(dāng)大的靜電實(shí)驗(yàn)室設(shè)備、試劑和耗材?

液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用系統(tǒng)?

購買儀器需考慮的因素：目的明確（檢測什么物質(zhì)）、設(shè)備性能滿足要求（可測的質(zhì)量范圍，儀器靈敏度、分辨率、準(zhǔn)確性、穩(wěn)定性，好的軟件），提供好的服務(wù)。

實(shí)驗(yàn)室應(yīng)制備完善的儀器設(shè)備管理使用程序文件、儀器操作使用程序文件等用于規(guī)范儀器的使用，維護(hù)和應(yīng)急處理。?

設(shè)備校準(zhǔn)和計(jì)量學(xué)溯源

a)

液相色譜儀和色譜柱符合：JJG705

液相色譜儀檢定要求；色譜柱的穩(wěn)定性，色譜柱更換的指標(biāo)。

b)

三重四極桿串聯(lián)質(zhì)譜儀，配有電噴霧離子源（ESI）大氣壓化學(xué)電離離子源（APCI），儀器校準(zhǔn)合格，各項(xiàng)參數(shù)指標(biāo)符合JJF1317

液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀校準(zhǔn)規(guī)范的要求。定期儀器調(diào)諧—質(zhì)譜以ABSCIEX5500三重四極桿校準(zhǔn)為例：1基本信息儀器編號校準(zhǔn)日期校準(zhǔn)地點(diǎn)儀器型號生產(chǎn)廠家環(huán)境溫度相對濕度2校準(zhǔn)周期：3個(gè)月3校準(zhǔn)品來源：ABSCIEX公司4校準(zhǔn)品批號：44061275校準(zhǔn)結(jié)果：5.1外觀：正常5.2用PPGPOS標(biāo)準(zhǔn)試劑（2.0×10-7mol/L）對儀器的Q1、Q3正離子模式進(jìn)行測試，驗(yàn)證儀器的質(zhì)量數(shù)偏移、半峰高寬符合要求。5.3用PPGNEG標(biāo)準(zhǔn)試劑（3.0×10-5

mol/L）對儀器的Q1、Q3負(fù)離子模式進(jìn)行測試，驗(yàn)證儀器的質(zhì)量數(shù)偏移、半峰高寬符合要求。5.4

實(shí)驗(yàn)條件：針泵流速為：5μL/mim；掃描速度：10

Da/s循環(huán)數(shù)：10MCA：On5.5要求：質(zhì)量偏差（mass

shift）：-0.1—0.1

Da；半峰高寬（Peak

Width）：0.6—0.8

amu(0.7±0.1

amu)。靈敏度要求：正離子模式下Q1和Q3均應(yīng)滿足：質(zhì)量（Da）175.133響應(yīng)（cps）≥1.2×106≥1.4×107906.673負(fù)離子模式下Q1負(fù)離子模式下Q3質(zhì)量（Da）響應(yīng)（cps）≥1.0×107933.636質(zhì)量（Da）響應(yīng)（cps）≥8.0×106933.6365.5校準(zhǔn)結(jié)果：（示例）Q1、Q3正離子模式，針泵流速為：5

μL/mim；掃描速度：10

Da/s。離子模式：Q1正離子校

準(zhǔn)

質(zhì)

量

檢

測

質(zhì)

量

質(zhì)

量

偏

差

半

峰

高

寬

半

峰

高

寬

偏

是否符合響應(yīng)(Expected

Mass)

(Found

Mass)

(massshift)(Peak

Width)差（

PW（Intensity,

cps）Shift）59.05059.0270.0230.0250.0280.0430.0290.6550.7600.7090.7380.7450.045符合符合符合符合符合/175.133500.380616.464906.673175.108500.352616.421906.644-0.060-0.009-0.038-0.0451.6×106//1.9×107離子模式：Q3正離子校準(zhǔn)質(zhì)量

檢

測

質(zhì)

量

質(zhì)

量

偏

差

半

峰

高

寬

半

峰

高

寬

是否符合

響應(yīng)(Expected

Mass)(Found

Mass

(massshift)

(PeakWidth)

偏差（PW（

Intensit)Shift）y,

cps）59.05059.0350.0150.0130.0470.0280.0240.6700.7230.7330.7400.7320.030符合符合符合符合符合/175.133500.380616.464906.673175.120500.333616.436906.649-0.023-0.033-0.040-0.0321.8×106//2.1×107液相系統(tǒng)的校準(zhǔn)輸液系統(tǒng)性能要求：

輸液管路接口緊密牢固，在規(guī)定的壓力范圍內(nèi)無泄漏。

流量設(shè)定值誤差S

、和流量穩(wěn)定性誤差S

、應(yīng)符合下表的要求。SR

梯度誤差Ge：不超過士3%。流量流量設(shè)定值誤差S

、和流量穩(wěn)定性誤差S

的要求SR流量設(shè)定值

（mL/min）測量次數(shù)0.531.032.03流動相收集時(shí)間/min105%3%55允許誤差SSSR3%2%2%2%注：

1.

最大流量的設(shè)定值可根據(jù)用戶使用情況而定。2.對特殊的、流量小的儀器，流量的設(shè)定可根據(jù)用戶使用情況選大、中、小三個(gè)流量，流動相的收集時(shí)間則根據(jù)情況適當(dāng)縮短或延長。柱溫箱：

柱溫箱溫度設(shè)定值最大允許誤差：±2℃。

柱溫箱溫度溫度性：不大于1℃/h。色譜柱：色譜柱參數(shù)要求名稱類型性能要求柱效理論塔板數(shù)在3×104~4×104色譜柱，C18對稱性被測峰（蒽）的不對稱因子在0.8~1.6試劑和耗材準(zhǔn)備（1）關(guān)注檢測過程中試劑和耗材對檢測的影響LC-MS技術(shù)靈敏度高，可達(dá)到匹克級，故容易受到試劑純度或耗材雜質(zhì)的干擾。（2）試劑建議挑選MS級別的試劑，使用前需做好驗(yàn)證工作，使用期間按照說明書恰當(dāng)保存，操作過程必須避免污染，防止高溫和揮發(fā)對其穩(wěn)定性、濃度和純度的影響。評估試劑的質(zhì)量。（3）容量瓶和移液器在標(biāo)準(zhǔn)品和IS制備時(shí)，實(shí)驗(yàn)室需配備A級的容量瓶和移液器。使用前需評估和記錄容量瓶、移液器的準(zhǔn)確性和精密度。建議：關(guān)注檢測過程中試劑和耗材對檢測結(jié)果的影響，記錄每個(gè)試劑、色譜柱、耗材的批號以便追溯干擾源。檢驗(yàn)前過程?

分析前的質(zhì)量控制

樣本類型：全血、血清、血漿、尿液、唾液、腦脊液等；

體位：需考慮某些血液成分的檢測結(jié)果易受到體位的影響，例如檢測某些血壓相關(guān)激素及其代謝產(chǎn)物（醛固酮、兒茶酚胺等）；

采集：采集時(shí)間、生理周期、采集的設(shè)備和容器對檢測的影響；

運(yùn)輸：樣本在運(yùn)輸過程中的全程監(jiān)控也很重要，避免運(yùn)輸不當(dāng)造成對檢測的影響；

處理：物理因素包括光照和溫度，化學(xué)因素與分析物的化學(xué)結(jié)構(gòu)有關(guān)。正確的樣本處理方式有利于保證生物樣本穩(wěn)定性；

儲存：儲存條件。檢驗(yàn)過程?

SOP的制定及執(zhí)行一旦方法建立并確認(rèn)后，應(yīng)制定詳細(xì)的SOP，對所有試劑原料的來源、試劑配制、標(biāo)本類型、標(biāo)本采集、運(yùn)送、保存、處理、檢測、質(zhì)控、結(jié)果判斷、臨床意義等內(nèi)容均需要詳細(xì)規(guī)定，如涉及影響檢測結(jié)果的分析軟件均需在SOP中注明SOP一旦制定，應(yīng)嚴(yán)格按照SOP執(zhí)行，否則，實(shí)驗(yàn)室將缺乏統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)。當(dāng)發(fā)現(xiàn)SOP存在缺陷時(shí)，實(shí)驗(yàn)室可經(jīng)過討論、實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證后及時(shí)修改相關(guān)內(nèi)容并簽字確認(rèn)。?

樣品的處理

稀釋進(jìn)樣、蛋白質(zhì)破粹、固相萃取、液液萃取

手工處理

自動化處理

衍生化處理?

試劑質(zhì)量

在分析批次前檢測純?nèi)軇┦欠窈写郎y物（分析物與內(nèi)標(biāo)）?

標(biāo)準(zhǔn)品

每家生產(chǎn)的標(biāo)準(zhǔn)品純度不同，鹽分含量不一樣

最好買不同來源的標(biāo)準(zhǔn)品，定期與權(quán)威標(biāo)準(zhǔn)品（如NIST、NIM等）比對并保留記錄

每次更換標(biāo)準(zhǔn)品批次必須與前一批次比對并保留記錄?

內(nèi)標(biāo)的選擇

穩(wěn)定同位素內(nèi)標(biāo)（2H，13C，15N等）：由于可能的交叉干擾或者源內(nèi)裂解，通常對分子量小于400的分析物與內(nèi)標(biāo)差異至少為3，對分子量大于500的分析物與內(nèi)標(biāo)差異至少為4-5或更多。

結(jié)構(gòu)類似物：通常用作分析多肽和蛋白質(zhì)的內(nèi)標(biāo)。缺點(diǎn)：保留時(shí)間和離子化都可能與待測物不同，限制了對待測物因基質(zhì)效應(yīng)而產(chǎn)生的信號增強(qiáng)或抑制的校正能力。?

IS純度?

最好3個(gè)以上同位素標(biāo)記的內(nèi)標(biāo)建立新方法1.

移植別人已經(jīng)建立的方法2.

開發(fā)新方法3.

培訓(xùn)其他人員影響質(zhì)譜方法學(xué)的因素

離子化模式的選擇

離子源的參數(shù)設(shè)置

離子對的選擇

離子對參數(shù)的設(shè)置

其他新方法的選擇?

確認(rèn)儀器基本性能正常?

正確的峰?

信噪比（S/N,背景強(qiáng)度與分析信號）?

峰的分辨率?

峰的對稱性?

保留時(shí)間標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立1.

具有臨床意義的系列濃度，涵蓋參考范圍2.

最好與醫(yī)學(xué)決定水平相關(guān)3.

征求臨床醫(yī)生的建議

配制能夠覆蓋參考范圍的多個(gè)濃度（5-7個(gè)）校準(zhǔn)品；

配制適當(dāng)濃度的內(nèi)標(biāo)校準(zhǔn)品；

建立峰面積積分的方法；

建立標(biāo)準(zhǔn)曲線；

多個(gè)項(xiàng)目同時(shí)檢測時(shí)應(yīng)權(quán)衡好各個(gè)項(xiàng)目的校準(zhǔn)品的濃度水平。方法學(xué)性能評價(jià)

精密度

靈敏度

（LOD,

LOQ）

特異性實(shí)驗(yàn)

干擾試驗(yàn)

準(zhǔn)確度

定量范圍以外的濃度稀釋評價(jià)

小體積樣本的稀釋評價(jià)

不確定度評價(jià)

萃取回收率

線性范圍

基質(zhì)效應(yīng)

攜帶污染

方法比對

離子抑制或增強(qiáng)：在方法學(xué)建立早期，對離子抑制進(jìn)行評價(jià)確立方法開發(fā)與驗(yàn)證計(jì)劃，在方法開發(fā)與驗(yàn)證間反復(fù)確認(rèn)，持續(xù)監(jiān)控方法學(xué)性能。

基質(zhì)效應(yīng)的研究

QC樣本與患者樣本：LC-MS性能參數(shù)相似

提取率

回收率

LC特征：保留時(shí)間，峰型

離子抑制檢驗(yàn)結(jié)果質(zhì)量的保證?

LC-MS檢測過程的質(zhì)量控制

LC-MS的實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理體系包括質(zhì)量保證和質(zhì)量控制，確保實(shí)驗(yàn)室檢測性能良好、設(shè)備環(huán)境完善、生物安全合規(guī)以及人員培訓(xùn)、操作規(guī)范。必須涉及整個(gè)檢測流程，即從樣本預(yù)處理、分析過程到結(jié)果解釋。?

樣本預(yù)處理：標(biāo)本的分離及保留，通過適當(dāng)?shù)那疤幚磉^程，使得標(biāo)本滿足質(zhì)譜儀的檢測要求。?

分析過程：人、機(jī)、料、法、環(huán)。?

質(zhì)控品、校準(zhǔn)品、檢測試劑和耗材準(zhǔn)備?

質(zhì)譜技術(shù)在臨床上的應(yīng)用目前屬于實(shí)驗(yàn)室自建項(xiàng)目（LDT）無商品化的試劑，需要使用自配試劑！?

校準(zhǔn)品、內(nèi)標(biāo)品和質(zhì)控品?

校準(zhǔn)品：盡量一級標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)進(jìn)行校準(zhǔn)品的配置，校準(zhǔn)品配制過程中的各稱量、定容等數(shù)據(jù)要嚴(yán)格記錄。?內(nèi)標(biāo)品：?種類：IS一般有兩種，即結(jié)構(gòu)類似物和穩(wěn)定同位素標(biāo)記物。用途：主要用于LC-MS定量分析中校正基質(zhì)效應(yīng)或樣本萃取、色譜分離、離子化過程中產(chǎn)生的偏差。建議：（1）推薦使用非放射性穩(wěn)定同位素標(biāo)記物，因其具有不易轉(zhuǎn)化為非標(biāo)記物質(zhì)的特點(diǎn)，并能滿足作為IS的穩(wěn)定性及安全性的要求，使分析結(jié)果具有更好的精密度和準(zhǔn)確性；??（2）檢測中建議IS的質(zhì)量比目標(biāo)分析物至少大3Da，標(biāo)記純度超過98%；（3）同位素標(biāo)記的IS包括2H、13C、15N、18C或混合標(biāo)記，不推薦使用放射性較強(qiáng)的標(biāo)記，如125I、3H和14C；推薦使用13C、15N標(biāo)記。?實(shí)驗(yàn)室須評估自配或商品化內(nèi)標(biāo)的穩(wěn)定性和純度，保證檢測結(jié)果的穩(wěn)定可靠。?

質(zhì)控品：自配質(zhì)控品，需注意質(zhì)控品基質(zhì)與檢測樣本相同、穩(wěn)定且均一。質(zhì)控品的具體要求見后面室內(nèi)質(zhì)控部分！室內(nèi)質(zhì)控?建議運(yùn)行至少3個(gè)濃度質(zhì)控品，濃度盡可能覆蓋定量范圍，包括三倍定量檢測下限（LLMI）、定量范圍的中間以及定量檢測上限（ULMI）的附近，也可設(shè)定在LLMI

或者醫(yī)質(zhì)控品濃度范圍質(zhì)控頻率學(xué)決定水平附近?；蛘?、低于正常、高于正常三個(gè)濃度。?建議在每批次樣本檢測前、后均運(yùn)行質(zhì)控樣本。?嚴(yán)格的要求，同一批次質(zhì)控在開始、中間和最后三個(gè)時(shí)間點(diǎn)。?質(zhì)控頻率取決于方法學(xué)性能、某一時(shí)間段內(nèi)檢測的樣本數(shù)量以及錯(cuò)誤結(jié)果對于臨床影響的嚴(yán)重程度。?無論商品化或自配質(zhì)控樣本，實(shí)驗(yàn)室必須建立質(zhì)控的可接受標(biāo)準(zhǔn)。對于商品化質(zhì)控樣本，不建議直接使用生產(chǎn)商提供的可接受范圍。建議使用質(zhì)控圖和質(zhì)控規(guī)則。每次更換質(zhì)控品，必須和前一批次比對。質(zhì)控規(guī)則?無論商品化或自配質(zhì)控樣本，

質(zhì)控的介質(zhì)必須和病人樣品基質(zhì)一致。對于無成品或商品化質(zhì)控品（自制質(zhì)控品）應(yīng)由該專業(yè)具有豐富工作經(jīng)驗(yàn)專業(yè)人員配制，并采用盲法按照性能要求進(jìn)行評價(jià)。質(zhì)控品配置實(shí)驗(yàn)室的自配質(zhì)控品樣本的儲存條件、均勻性和穩(wěn)定性需要進(jìn)行評估并記錄。質(zhì)控品基質(zhì)應(yīng)與臨床標(biāo)本相同，質(zhì)控品存儲不當(dāng)或降解會對臨床應(yīng)用產(chǎn)生影響。質(zhì)

控

品?

質(zhì)控品的基質(zhì)

應(yīng)盡可能接近患者樣品

可用商品化質(zhì)控品

必要時(shí)，可使用患者混和樣品（含內(nèi)源性分析物；添加外源性分析物）?

質(zhì)控品的穩(wěn)定性

商品質(zhì)控物參考說明書要求

自制質(zhì)控物：儲存條件、濃度、隨時(shí)間變化的幅度、凍融次數(shù)、可接受標(biāo)準(zhǔn)?

空白樣本（blank

sample）：幫助判斷內(nèi)標(biāo)降解對分析物的影響

樣品含內(nèi)標(biāo)但不含分析物

分析物信號峰面積小于定量下限（LLOQ）的20%

在批次檢測開始及結(jié)束時(shí)檢測空白樣品?

雙空白樣本（double

blank

sample）：監(jiān)控液相分離信號與質(zhì)譜儀的背景信號，評估之前檢測或高濃度樣本檢測后的攜帶污染

樣品既不含內(nèi)標(biāo)也不含分析物

在批次檢測開始及結(jié)束時(shí)，檢測高值標(biāo)準(zhǔn)品或質(zhì)控品后檢測雙空白樣品

分析物信號峰面積小于定量下限（LLOQ）的20%

內(nèi)標(biāo)峰面積小于含內(nèi)標(biāo)峰面積的5%室間質(zhì)量評價(jià)（EQA）室間質(zhì)量評價(jià)（EQA）

通過參加EQA評價(jià)實(shí)驗(yàn)室檢測能力，對能力比對結(jié)果進(jìn)行分析總結(jié)，關(guān)注比對結(jié)果是否產(chǎn)生趨勢或偏移。其它評價(jià)方式

對于無室間質(zhì)量評價(jià)計(jì)劃的檢測項(xiàng)目，建議與外部實(shí)驗(yàn)室相同或相近的方法比對，需考慮兩種方法的檢測性能，包括樣本、可接受范圍和定量檢測限等。

檢驗(yàn)結(jié)果的標(biāo)準(zhǔn)化與可比性：取決于所用的參考物質(zhì)與方法。其他質(zhì)量保證和質(zhì)量控制系統(tǒng)適用性測試

檢測系統(tǒng)適用性樣本用于測試系統(tǒng)適用性的參數(shù)有噪音、分析物信號、保留時(shí)間、色譜峰分離度和色譜峰對稱性。

推薦至少在每個(gè)分析批次之前、預(yù)防性維護(hù)之后、儀器卸真空后、或者是當(dāng)系統(tǒng)平衡出現(xiàn)問題的時(shí)候進(jìn)行系統(tǒng)適用性測試，以確保檢測系統(tǒng)處于正常狀態(tài)。周期性質(zhì)量監(jiān)控

儀器設(shè)備重大維修、維護(hù)保養(yǎng)后，例如質(zhì)譜儀四極桿、質(zhì)譜儀機(jī)械泵、檢測器更換等，需評估儀器維修、維護(hù)保養(yǎng)后的性能指標(biāo)與維修、維護(hù)前保持一致