馬鈴薯種薯的莖尖脫毒培養(yǎng)技術(shù)

作物生產(chǎn)技術(shù)專業(yè)/教學(xué)資源庫任務(wù)二馬鈴薯種薯的莖尖脫毒培養(yǎng)技術(shù)1．材料的選擇選擇具有該品種典型特性、生長健壯的單株（或無性系），結(jié)合產(chǎn)量情況，選擇高產(chǎn)、大薯率高、無病斑的單株作為莖尖脫毒的基礎(chǔ)材料，以提高脫毒效果。作物生產(chǎn)技術(shù)專業(yè)/教學(xué)資源庫馬鈴薯種薯2．熱處理

材料的熱處理，以鈍化病毒的活性，消除馬鈴薯卷葉病毒，提高脫毒效果。把入選的馬鈴薯塊莖進行打破休眠和催芽處理，當(dāng)薯塊頂芽生長至1厘米后，轉(zhuǎn)入光照培養(yǎng)箱內(nèi)，以每天12小時光照，照度3000LX，37℃的高溫處理6-8周。熱處理脫毒主要是利用病毒受熱的不穩(wěn)定性而失去其活性達到脫病毒目的。一般采用35—55℃的熱水或高溫蒸汽、高溫空氣處理，溫度越高處理的時間越短。通常是將熱處理中伸長生長出的新梢頂端部分嫩枝嫁接到無病毒砧木上，或進行進一步的莖尖培養(yǎng)，或莖尖微芽嫁接以增大脫去病毒的機率。

莖尖脫毒是利用植物莖尖組織培養(yǎng)，結(jié)合血清病毒檢測技術(shù)，在防蚜傳毒條件下，將影響植物正常生長的植物病毒脫除的高新農(nóng)業(yè)生物技術(shù)。

作物生產(chǎn)技術(shù)專業(yè)/教學(xué)資源庫3．取材和消毒

剪取經(jīng)過熱處理后發(fā)芽塊莖上2－3厘米長的芽若干個，用軟毛刷輕輕逐個刷洗后放于燒杯中，用紗布封口，放于自來水下沖洗半小時，然后在超凈工作臺進行嚴(yán)格消毒：先用75%的酒精浸15秒，無菌水沖洗2次；再用0.1%的升汞浸泡8-10分鐘（或用5%次氯酸鈉浸泡15－20分鐘），無菌水沖洗5-8次，每次3-5分鐘（用無菌水沖洗過程中要不斷的晃動放置材料的容器，以保證漂洗更徹底），沖洗完后放在滅過菌的培養(yǎng)瓶內(nèi)待用。作物生產(chǎn)技術(shù)專業(yè)/教學(xué)資源庫4．剝離莖尖和接種

在超凈工作臺上，將消毒過的芽置于40X的解剖鏡下，一手用一把眼科鑷子將芽按住，一手用滅過菌的解剖針將葉片一層一層仔細剝掉，直至露出圓亮的生長點，用鋒利的無菌解剖針小心切取0.3毫米以下的帶1-2個葉原基的莖尖，隨即將莖尖接種于已準(zhǔn)備好的馬鈴薯莖尖培養(yǎng)基上，以切面接觸瓊脂。

作物生產(chǎn)技術(shù)專業(yè)/教學(xué)資源庫5．莖尖培養(yǎng)與病毒檢測

5．1

培養(yǎng)基

選擇合適的培養(yǎng)基是莖尖培養(yǎng)成功與否的關(guān)鍵，根據(jù)我們的經(jīng)驗，以MS+GA30.2毫克/升+6-BA0.5毫克/升+NAA0.05+肌醇100毫克/升+D－泛酸鈣0.2毫克/升+食用白糖3%+瓊脂0.6%，PH5.8，為比較好的培養(yǎng)基組合。

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5．2

培養(yǎng)5.2.1外植體培養(yǎng)

從已催出芽（芽長一般2—4cm）的干凈健康馬鈴薯塊莖上掰下芽，用自來水沖洗干凈，放入0.1—0.15%的升汞溶液中浸泡8—10分鐘，在超凈工作臺上消毒完后，放入無菌水中浸泡6次，每次5分鐘，然后接種到MS＋6－BA1.5mg/L（毫克/升）＋GA3

0.5mg/L＋IBA0.5mg/L＋瓊脂8g/L＋蔗糖30g/L（PH值為5.8）的培養(yǎng)基上，每個培養(yǎng)瓶接種1—5個外植體。作物生產(chǎn)技術(shù)專業(yè)/教學(xué)資源庫5．莖尖培養(yǎng)與病毒檢測

5．2

培養(yǎng)5.2.2莖尖剝離及初代培養(yǎng)

外植體培養(yǎng)20天后，在超凈工作臺上解剖鏡下用解剖針將生長點0.1——0.5mm部分剝離出來，轉(zhuǎn)接到MS＋肌醇100mg/L+6－BA1.5mg/L＋GA30.5mg/L＋泛酸鈣1.5mg/L＋蔗糖30g/L＋瓊脂8g/L＋活性炭0.17g/L（PH值為5.8）的培養(yǎng)基上，每個培養(yǎng)瓶接種4—5個生長點。光照保持3000—6000Lux（勒克斯）左右，每天照光13—16小時，溫度控制在23℃，經(jīng)2—6個月左右培養(yǎng)誘導(dǎo)，其間轉(zhuǎn)接2——3次，生長點即可長成新的小植株。作物生產(chǎn)技術(shù)專業(yè)/教學(xué)資源庫5．莖尖培養(yǎng)與病毒檢測

5．3病毒檢測

病毒檢測的目的，是鑒定所獲得的試管苗