白血病基因篩查

關(guān)于白血病基因篩查第1頁，課件共49頁，創(chuàng)作于2023年2月WH0血液腫瘤分類方案（1999年）新分類方案的基本原則是：結(jié)合形態(tài)學(xué)、免疫表型、遺傳改變和臨床特征來鑒定疾病的“真實本質(zhì)”。提供了疾病分類與治療選擇和預(yù)后判斷的較明確關(guān)聯(lián)性，開啟了血液腫瘤靶向性治療和個性化方案的新時代。形態(tài)學(xué)免疫學(xué)細(xì)胞遺傳學(xué)第2頁，課件共49頁，創(chuàng)作于2023年2月WH0血液腫瘤分類方案（2008年）組織蛋白細(xì)胞基因第3頁，課件共49頁，創(chuàng)作于2023年2月基因檢測

——融合基因基因突變第4頁，課件共49頁，創(chuàng)作于2023年2月融合基因的形成第5頁，課件共49頁，創(chuàng)作于2023年2月Bcr/Abl融合基因第6頁，課件共49頁，創(chuàng)作于2023年2月第7頁，課件共49頁，創(chuàng)作于2023年2月fish探針第8頁，課件共49頁，創(chuàng)作于2023年2月第9頁，課件共49頁，創(chuàng)作于2023年2月白血病分子診斷的意義精確診斷準(zhǔn)確預(yù)后指導(dǎo)治療科研資料白血病初發(fā)MICM診斷系統(tǒng)診斷異常標(biāo)記殘留監(jiān)測靶向治療第10頁，課件共49頁，創(chuàng)作于2023年2月分子診斷在白血病診斷中的應(yīng)用提供早期輔助診斷及預(yù)后判斷;對治療過程進(jìn)行跟蹤;進(jìn)行白血病治療后的微小殘留檢測.第11頁，課件共49頁，創(chuàng)作于2023年2月白血病常見融合基因CBFB/MYH11AML1/ETOPML/RARaE2A/PBX1MLL/AF4BCR/ABLTEL/AML1SIL/TAL1EVI1HOX11MLL/AF10MLL-AF9MLL/ENLNPM1/ALKNPM/MLF1MLL/ELLMLL/AFXMLL/AF1qMLL/AF1pPLZF/RARaMLL/AF6MLL/MLL（dupMLL）TLS/ERGTEL/PDGFRTEL/ABLSET/CANDEK/CANMLL/AF17E2A/HLFNPM/RARaAML1/MDS1第12頁，課件共49頁，創(chuàng)作于2023年2月CBFB/MYH11是Inv(16)(p13q22)形成；是急性髓系白血病(AML)特征性染色體異常，通常見于AML-M4Eo亞型，占總AML患者的10%，其中50％發(fā)生在AML-M4Eo中。帶有Inv(16)(p13q22)的病人通常有較好的預(yù)后。該基因陽性的病人，可用于療效監(jiān)測和微小殘留的檢測。第13頁，課件共49頁，創(chuàng)作于2023年2月AML1/ETOt(8,21)(q22;q22)形成，在1973年首次報道。AML1/ETO融合基因出現(xiàn)在所有的t(8,21)陽性的AML中，同時也出現(xiàn)在具有復(fù)雜移位的t(8,21)陰性的AML病例中。t(8,21)出現(xiàn)在大約7%的AML病例中，在年輕的患者中更為常見。其主要出現(xiàn)在AML-M2這一亞型中，大約有20-40%病例具有t(8,21)。在非常少見的AML-M1，AML-M4和t-AML中也有報道。t(8,21)異位是一個較好的標(biāo)志，它的存在使這類病例對一些藥物有較好的反應(yīng)。因此基于細(xì)胞遺傳學(xué)和分子遺傳學(xué)的檢測結(jié)果，可以為病人選擇風(fēng)險低的較好的治療方案。該基因陽性的病人，可用于療效監(jiān)測和微小殘留的檢測。第14頁，課件共49頁，創(chuàng)作于2023年2月PML/RARat(15,17)易位形成；是APL的一個典型標(biāo)志，其易位造成了15號染色體上的PML基因和17號染色體上的RARa基因的融合，產(chǎn)生了一個融合基因PML/RARa。由于PML基因上融合位點的不同，PML/RARa有三種融合型，即:bcr1(55%),bcr2(5%),bcr3(40%)。檢測PML/RARa融合基因的存在與否，對APL的診斷，判斷ATRA的療效和預(yù)后復(fù)發(fā)都非常重要。PML/RARa陽性強(qiáng)烈預(yù)示著復(fù)發(fā)的可能，而其持續(xù)性陰性則預(yù)示病人有更長的生存期。該基因陽性的病人，可用于療效監(jiān)測和微小殘留的檢測。第15頁，課件共49頁，創(chuàng)作于2023年2月E2A/PBX1t(1:19)導(dǎo)致了19號染色體上的E2A基因和1號染色體上的PBX1基因的融合，產(chǎn)生了融合基因E2A/RBX1；5-6%的兒童ALL和3%的成人ALL檢測到，幾乎全部出現(xiàn)在前B細(xì)胞ALL病例中。攜帶有該易位的病人，其臨床癥狀都比較兇險。該基因陽性的病人，可用于療效監(jiān)測和微小殘留的檢測。第16頁，課件共49頁，創(chuàng)作于2023年2月MLL/AF4在50-70%的嬰幼兒ALL和將近5%的小兒和成人ALL病例中有MLL/AF4融合基因。t(4,11)(q21;q23)與前B-ALL(CD79A+,CD19+,CD10-,CD24-)相關(guān)，同時與粒系分化抗原CD16和CD65以及NG2抗原共表達(dá)。MLL/AF4融合基因在所有t(4;11)移位的病例中存在，也存在于相當(dāng)一部分細(xì)胞遺傳學(xué)沒有檢測到t(4;11)移位的病例中。在嬰幼兒ALL中MLL/AF4融合基因被認(rèn)為是預(yù)后不良的標(biāo)志。在成人ALL中也是一個不良的標(biāo)志，但對于成人ALL，該融合基因的存在似乎能增強(qiáng)高劑量的Ara-C的療效。該基因陽性的病人，可用于療效監(jiān)測和微小殘留的檢測。第17頁，課件共49頁，創(chuàng)作于2023年2月BCR/ABL在超過95%的CML病人的白血病細(xì)胞中，30%（20-50%）的成人ALL和2-10%的兒童ALL中，以及小于2%的AML（淋巴瘤和骨髓瘤）的病例中有BCR/ABL融合基因。在CML中BCR/ABL融合基因都是p210型的，在CML病例中有55%的b3-a2型，40%的b2-a2型。在5%的病例中b3-a2和b2-a2型由于剪接的不同同時存在。另外，在非常少的ph+的CML病人中存在一種大的BCR/ABL融合基因e19-a2，即u-bcr,p230型BCR/ABL融合基因。在30-50%的成人ph+的ALL，20-30%兒童ph+的ALL病例中BCR/ABL融合基因是p210型的。還有60%的ph+的ALL患者的BCR/ABL融合基因是p190型的。在ALL中，Ph陽性和隨之出現(xiàn)的BCR/ABL融合基因是一個非常不好的標(biāo)志，它影響著病人血相的完全緩解率和可能的生成率。該基因陽性的病人，可用格列衛(wèi)進(jìn)行治療，并可進(jìn)行療效監(jiān)測和微小殘留的檢測。第18頁，課件共49頁，創(chuàng)作于2023年2月CML病例中的應(yīng)用BCR-ABL融合基因檢測：

t(9;22)(q34;q11)BCR-ABLp210t(9;22)(q34;q11)BCR-ABLp230BCR-ABL融合基因ABL激酶突變檢測第19頁，課件共49頁，創(chuàng)作于2023年2月BCR-ABL融合基因

超過95%的CML病例中存在BCR-ABL融合基因

P210型M-bcr（絕大多數(shù)）

b3-a2（55%）

b2-a2（40%）

b3-a2和b2-a2（5%）

b3-a3（罕見）

b2-a3（罕見）p230型u-bcre19-a2（罕見）第20頁，課件共49頁，創(chuàng)作于2023年2月BCR-ABL融合基因ABL激酶突變檢測

ABL激酶突變會引起伊馬替尼治療耐藥

T315I

耐藥機(jī)制:T315突變后不能與伊馬替尼形成關(guān)鍵性的氫鍵，可完全阻斷伊馬替尼與ABL激酶區(qū)的結(jié)合,從而耐藥。

P環(huán)的突變(244-255)

耐藥機(jī)制：如Y253F／H、E255K／V、Q252H、G250E等通過改變ABL激酶的空間構(gòu)象，亦可阻礙伊馬替尼與之結(jié)合。第21頁，課件共49頁，創(chuàng)作于2023年2月

A環(huán)突變(381-402)

一般提高用藥量可以降低耐藥程度。

其它突變對于耐藥程度較弱的突變，如M244V、G250E、F317L、E355G、F359V及V379I等，通過提高藥物劑量，可以克服耐藥。第22頁，課件共49頁，創(chuàng)作于2023年2月TEL/AML1t(12;21)(p13;q22)易位最早在1995年被報道。隨后的報道發(fā)現(xiàn)這種普通遺傳學(xué)無法檢測的易位，是兒童ALL中最為常見的易位。幾乎25%的小兒ALL有該易位。其主要的陽性病人出現(xiàn)在1-12歲之間，其中最多的在2-5歲的這個年齡段。所有的病例其免疫分型都是前B細(xì)胞ALL。另外，這類病人的另一個特征是其白細(xì)胞比較低。t(12;21)陽性的病人都有較好的預(yù)后，其復(fù)發(fā)的時間也會較晚。該基因陽性的病人，可用于療效監(jiān)測和微小殘留的檢測。 第23頁，課件共49頁，創(chuàng)作于2023年2月SIL/TAL1位于染色體1p32上的TAL1基因可以通過多種遺傳變異導(dǎo)致在T細(xì)胞中異常表達(dá)。其中最常見的重組方式是TAL1基因上游約90kb的DNA缺失，導(dǎo)致SIL與TAL1融合，這種染色體內(nèi)微缺失全部出現(xiàn)在T-ALL病例中。SIL/TAL1融合基因與T-ALL的免疫表型密切相關(guān)。SIL/TAL1融合基因可以在26%的兒童T-ALL病例和16%的成人（主要是年輕成人）T-ALL病例檢測到。SIL/TAL1融合基因與T-ALL預(yù)后的關(guān)系還不是很清楚。該融合基因可以用于T-ALL的輔助診斷，該融合基因還可以用于療效監(jiān)測和微小殘留的檢測。第24頁，課件共49頁，創(chuàng)作于2023年2月EVI1定位于染色體3q26。在小鼠逆轉(zhuǎn)錄病毒誘發(fā)的急性髓系白血病模型中，EVI1是病毒常見的插入位點。EVI1編碼一個能結(jié)合DNA的鋅指蛋白，其過度表達(dá)在髓系惡性腫瘤的發(fā)生和發(fā)展中起重要作用。與其表達(dá)相關(guān)的還有MDS和CML?，F(xiàn)階段的研究表明EVI1高表達(dá)的患者的預(yù)后不良，但其機(jī)制尚未清晰。第25頁，課件共49頁，創(chuàng)作于2023年2月HOX11據(jù)細(xì)胞基因?qū)W研究，4-7%的T-ALL中涉及染色體10q24的易位。HOX11正是定位在10q24上，并被t(10;14)(q24;q11)易位以及t(7;10)(q35;q24)易位激活。B-ALL中無HOX11的發(fā)現(xiàn)。在現(xiàn)階段的文獻(xiàn)報道中，HOX11高表達(dá)的兒童T-ALL的預(yù)后較陰性者有優(yōu)勢1。成人中也有相似的論斷2。低表達(dá)的HOX11與陰性者無統(tǒng)計學(xué)差異3。1、

ExpressionofHOX11inchildhoodT-lineageacutelymphoblasticleukaemiacanoccurintheabsenceofcytogeneticaberrationat10q24:astudyfromtheChildren’sCancerGroup(CCG).URKees,NAHeeremaet,20032、Prognosticimportanceof

TLX1(HOX11)

oncogeneexpressioninadultswithT-cellacutelymphoblasticleukaemia.AdolfoA

FerrandoMDet,20043、PrognosticandoncogenicrelevanceofTLX1/HOX11

expressionlevelinT-ALLs.

JulieBergeronet,2007第26頁，課件共49頁，創(chuàng)作于2023年2月MLL/AF10:MLL/AF10與AML相關(guān)，染色體上表現(xiàn)為t(10;11)(p12;q23)的易位，主要見于AML-M5型患者，兒童多見，80%的患者小于3歲。MLL/AF10陽性的患者的預(yù)后差1。1

、AMLwith11q23/MLL

abnormalitiesasdefinedbytheWHOclassification:incidence,partnerchromosomes,FABsubtype,agedistribution,andprognosticimpactinanunselectedseriesof1897cytogeneticallyanalyzedAMLcases.

ClaudiaSchoch,SusanneSchnittgeret,2003第27頁，課件共49頁，創(chuàng)作于2023年2月MLL-AF9:t(9;11)(p22;q23)易位主要發(fā)生在AML中,是AML中t(11q23)最常見的易位形式。MLL-AF9的病人的預(yù)后較差1,2。1、MicroenvironmentDeterminesLineageFateinaHumanModelof

MLL-AF9

Leukemia.JunpingWei,MarkWunderlichet,20082、TheprognosticvalueofMLL-AF9detectioninpatientswitht(9;11)(p22;q23)-positiveacutemyeloidleukemia.ClaudiaSchollet,2005第28頁，課件共49頁，創(chuàng)作于2023年2月MLL/ENL:t(11;19)(q23;p13.3)易位可見于ALL，AML-M4,M5,M1,M2。以小于1歲的嬰兒多見，中位生存期為17.6月。易位導(dǎo)致MLL-ENL融合基因形成。預(yù)后尚無確切說明，與年齡，免疫表型相關(guān)1。1、ChildhoodacutelymphoblasticleukemiawiththeMLL-ENLfusionandt(11;19)(q23;p13.3)translocation.

RubnitzJEet,1999第29頁，課件共49頁，創(chuàng)作于2023年2月MLL/ELL:t(11;19)(q23;p13.1)占11q23異常的3.8%，為AML特征性異常，年齡以成人為主。白細(xì)胞20×109/L，F(xiàn)AB分型M4或M5，免疫表型為CD13CD33，CD14CD15，CD11，HLA-DR表達(dá)陽性。易位導(dǎo)致MLL-ELL融合基因形成。預(yù)后不良，2年無病生存率50%。第30頁，課件共49頁，創(chuàng)作于2023年2月MLL/AFX:t(X;11)(q13;q23)易位僅有體外分子的一些研究研究表明MLL-AFX可以增強(qiáng)造血干細(xì)胞的自我更新并阻止它們成熟1。無預(yù)后相關(guān)資料。1、MLL-AFXRequirestheTranscriptionalEffectorDomainsofAFXToTransformMyeloidProgenitorsandTransdominantlyInterferewithForkheadProteinFunction.ChiWaiSo

and

MichaelL.Cleary,2002第31頁，課件共49頁，創(chuàng)作于2023年2月MLL/AF1q:t(1;11)(q21;q23)易位，多發(fā)于AML。關(guān)于MLL/AF1q的預(yù)后說法存在爭論2：在一項研究中，高表達(dá)的AF1q是一個獨立的不良預(yù)后因子1；另一項研究表明MLL-AF1q陽性的患者預(yù)后良好，是否因為MLL-AF1q的形成改變了AF1q的表達(dá)還不得而知2。1、ElevatedexpressionoftheAF1qgene,anMLLfusionpartner,isanindependentadverseprognosticfactorinpediatricacutemyeloidleukemia.WilliamTseet,20042、Novelprognosticsubgroupsinchildhood11q23/MLL-rearrangedacutemyeloidleukemia:resultsofaninternationalretrospectivestudy.BrianVet,2009第32頁，課件共49頁，創(chuàng)作于2023年2月MLL/AF1p:t(1;11)(p32;q23)易位，ALL,AML,MDS中均有發(fā)現(xiàn)。中位生存期為15個月。預(yù)后與性別及分型相關(guān)，女性的中位生存期可達(dá)28個月，而男性為11個月。缺乏關(guān)于預(yù)后的相關(guān)文獻(xiàn)。第33頁，課件共49頁，創(chuàng)作于2023年2月PLZF/RARa：t(11;17)(q23;q21)易位，特定的在急性早幼粒白血病或急性非淋巴細(xì)胞白血病M3型中發(fā)現(xiàn)。功能尚不明確。預(yù)后明顯差與有t(15;17)易位的ANLLM3型，其對ATRA的化療無反應(yīng)。第34頁，課件共49頁，創(chuàng)作于2023年2月MLL/AF6：t(6;11)(q27;q23)是11q23中常見的易位，長發(fā)與AML，特別是M4，M5中，在T-ALL中也有發(fā)現(xiàn)。預(yù)后非常差1，幾乎無緩解，生存期短。1、MonitoringofminimalresidualdiseaseinpatientswithMLL-AF6-positiveacutemyeloidleukaemiabyreversetranscriptasepolymerasechainreaction.GerlindeMitterbaueret,2000第35頁，課件共49頁，創(chuàng)作于2023年2月MLL/MLL:11q23的部分串聯(lián)重復(fù)（MLL-PTD），已經(jīng)在10%的正常核型的AML中檢測出MLL-PTD，可以作為穩(wěn)定的MRD的監(jiān)測標(biāo)記。預(yù)后差，臨床緩解率低1,2,3。1、ClinicalandbiologicalimplicationsofpartialtandemduplicationoftheMLLgeneinacutemyeloidleukemiawithoutchromosomalabnormalitiesat11q23.H-SShiahet,20022、PrognosticSignificanceofPartialTandemDuplicationsoftheMLLGeneinAdultPatients16to60YearsOldWithAcuteMyeloidLeukemiaandNormalCytogenetics:AStudyoftheAcuteMyeloidLeukemiaStudyGroupUlm.KonstanzeDo¨hneret,20023、RiskassessmentbymonitoringexpressionlevelsofpartialtandemduplicationsintheMLLgeneinacutemyeloidleukemiaduringtherapy.MartinWeisseret,2005第36頁，課件共49頁，創(chuàng)作于2023年2月TLS/ERG:t(16;21)(p11;q22)易位多見于年輕患者，F(xiàn)AB各亞型均見。預(yù)后不良1，可能不能達(dá)到完全緩解，一年內(nèi)的復(fù)發(fā)率高，中位生存期為22個月。1、RelapseofAcuteMyeloidLeukemiawitht(16;21)(p11;q22)MimickingAutoimmunePancreatitisafterSecondAllogeneicBoneMarrowTransplantation.YuheiKamadaet，2011第37頁，課件共49頁，創(chuàng)作于2023年2月TEL/PDGFR:t(5;12)(q33;p13)易位形成的融合基因，與Ras/ERK和STAT5信號傳導(dǎo)通路相關(guān)，誘導(dǎo)干細(xì)胞的分化1.預(yù)后尚不明確，中位生存期<20個月（n=11）1、Tel/PDGFRβinducesstemcelldifferentiationviatheRas/ERKandSTAT5signalingpathways.Edwina

Dobbinet,2008第38頁，課件共49頁，創(chuàng)作于2023年2月TEL/ABL:t(9;12)(q34;p13)易位罕見，至2010年只有19例被報道于CML,AML,ALL中。數(shù)量少，從報道的病例上看，預(yù)后不良1。1、Acuteleukemiaswith

ETV6/ABL1

(TEL/ABL)fusion:Poorprognosisandprenatalorigin.JanZunaet,2010第39頁，課件共49頁，創(chuàng)作于2023年2月SET/CAN:t(9;9)(q34;q34)易位，罕見，作用不明；有文獻(xiàn)報道稱SET-CAN可以抑制增生，促分化1.1、EffectsofSETandSET-CANonthedifferentiationofthehumanpromonocyticcelllineU937.A

Kandilciet,2004第40頁，課件共49頁，創(chuàng)作于2023年2月DEK/CAN:t(6;9)(p23;q34)易位，由位于9q34的CAN基因與6q23的DEK基因融合，CAN基因是產(chǎn)物核孔復(fù)合物的一部分，能夠運送RNA及蛋白質(zhì)穿過核膜。在AML中占2%，主要為M2型，其次為M4。最初描述是以骨髓中正常嗜堿粒細(xì)胞增多為特征20%患者有既往MDS病史。年輕患者(20～30歲)。預(yù)后差1,2。1、DEK-CAN

molecularmonitoringofmyeloidmalignanciescouldaidtherapeuticstratification.L

Gar?onet,20052、DevelopmentofaD-FISHmethodtodetect

DEK/CANfusionresultingfromt(6;9)(p23;q34)inpatientswithacutemyelogenousleukemia.L

Gar?onet,2005第41頁，課件共49頁，創(chuàng)作于2023年2月MLL/AF17:t(11;17)(q23;q12-21)易位，發(fā)現(xiàn)于AML中。數(shù)據(jù)不足，無預(yù)后相關(guān)文獻(xiàn)。第42頁，課件共49頁，創(chuàng)作于2023年2月E2A/HLF:t(17;19)(q22;p13)易位產(chǎn)生E2A/HLF融合基因，發(fā)生在其少數(shù)的ALL病例中。預(yù)后差，對密集化療無反應(yīng)，生存期短1,2。1、AdultPrecursor-BAcu