微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)

微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)思考培養(yǎng)微生物最需要解決的兩個問題是什么？1.為其提供合適的營養(yǎng)物質(zhì)和環(huán)境條件2.防止雜菌的入侵培養(yǎng)基無菌技術(shù)1培養(yǎng)基概念：人們按照微生物對營養(yǎng)物質(zhì)的不同需求，配制出供其生長繁殖的營養(yǎng)基質(zhì)。種類：（按物理性質(zhì)）液體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基瓊脂種類：（按化學(xué)成分）天然培養(yǎng)基（化學(xué)成分未知）合成培養(yǎng)基（化學(xué)成分已知）選擇培養(yǎng)基（耐高濃度食鹽的金黃色葡萄球菌）鑒別培養(yǎng)基（伊紅-美藍(lán)培養(yǎng)基）種類：（按用途）營養(yǎng)要素：一般都含有水、碳源（提供碳元素的物質(zhì)）、氮源（提供氮元素的物質(zhì)）和無機(jī)鹽；培養(yǎng)基組分提供的主要營養(yǎng)牛肉膏5g碳源、氮源、磷酸鹽和維生素蛋白胨10g碳源氮源和維生素NaCl5g無機(jī)鹽H2O定容至1000mL氫元素、氧元素1000mL牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的營養(yǎng)構(gòu)成有的還需要滿足對pH、特殊營養(yǎng)物資和氧氣的要求2無菌技術(shù)避免雜菌污染的四個方面：01實(shí)驗(yàn)操作的空間、操作者的衣著和手超凈工作臺清潔消毒02微生物培養(yǎng)的器皿、接種用具和培養(yǎng)基等滅菌03實(shí)驗(yàn)操作應(yīng)在酒精燈火焰附近進(jìn)行04避免已經(jīng)滅菌處理的材料用具與周圍的物品接觸消毒指使用較為溫和的物理或化學(xué)方法僅殺死物體表面或內(nèi)部一部分對人體有害得微生物（不包括芽孢和孢子）。某種細(xì)菌的芽孢毛霉的孢子休眠體繁殖體消毒煮沸消毒法在100℃，煮沸5~6min巴氏消毒法70~75℃煮30min或80℃煮15min化學(xué)藥劑消毒法紫外線消毒法滅菌指使用強(qiáng)烈的理化因素殺死物體內(nèi)外所有的微生物，包括芽孢和孢子。灼燒滅菌接種工具（接種環(huán)、接種針或其他金屬工具）請你判斷以下材料或用具是否需要消毒或滅菌。如果需要，請選擇合適的方法。（1）培養(yǎng)細(xì)菌用的培養(yǎng)基與培養(yǎng)皿（2）玻棒、試管、燒瓶和吸管（3）實(shí)驗(yàn)操作者的雙手無菌技術(shù)還能有效避免操作者自身被微生物感染。無菌技術(shù)除了用來防止實(shí)驗(yàn)室的培養(yǎng)物被其他外來微生物污染外，還有什么目的？（1）、（2）需要滅菌；（3）需要消毒。思考3實(shí)驗(yàn)操作（大腸桿菌的純化培養(yǎng)）01制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基認(rèn)真閱讀制備流程課本P16-17頁倒平板2.為什么需要使錐形瓶的瓶口通過火焰？可以用手觸摸盛有培養(yǎng)基的錐形瓶，感覺錐形瓶的溫度下降到剛剛不燙手時，就可以進(jìn)行倒平板了。1.培養(yǎng)基滅菌后，需要冷卻到50℃左右時，才能用來倒平板。你用什么辦法來估計(jì)培養(yǎng)基的溫度？通過灼燒滅菌，防止瓶口的微生物污染培養(yǎng)基。思考4.在倒平板的過程中，如果不小心將培養(yǎng)基濺在皿蓋與皿底之間的部位，這個平板還能用來培養(yǎng)微生物嗎？為什么？平板冷凝后，皿蓋上會凝結(jié)水珠，將平板倒置，既可以防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染，又可避免培養(yǎng)基中的水分過快地?fù)]發(fā)。3.平板冷凝后，為什么要將平板倒置？空氣中的微生物可能在皿蓋與皿底之間的培養(yǎng)基上滋生，因此最好不要用這個平板培養(yǎng)微生物。通過接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線的操作,將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基的表面。在數(shù)次劃線后培養(yǎng),可以分離到由一個細(xì)胞繁殖而來的肉眼可見的子細(xì)胞群體,這就是菌落。02純化大腸桿菌平板劃線法

1.接種環(huán)灼燒滅菌2.火焰旁冷卻，打開棉塞。3.試管口通過火焰4.取一環(huán)菌種5.管口過火塞上棉塞6.打開縫隙，劃3～5條平行線，蓋上皿蓋，不要劃破8.平板倒置放于培養(yǎng)箱7.連續(xù)劃線至五區(qū)平板劃線操作將菌液進(jìn)行一系列的梯度稀釋，然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面，進(jìn)行培養(yǎng)。在稀釋度足夠高的菌液里，聚集在一起的微生物將被分散成單個細(xì)胞，從而能在培養(yǎng)基表面形成單個的菌落。稀釋涂布平板系列稀釋操作注意：移液管需要經(jīng)過滅菌。操作時，試管口和移液管離火焰1~2cm處。1.涂布器酒精消毒2.取菌液到培養(yǎng)基3.灼燒滅菌后冷卻4.將菌液均勻涂布涂布平板的所有操作都應(yīng)在火焰附近進(jìn)行。第2步應(yīng)如何進(jìn)行無菌操作？應(yīng)從操作的各個細(xì)節(jié)保證“無菌”。例如，酒精燈與培養(yǎng)皿的距離要合適、吸管頭不要接觸任何其他物體、吸管要在酒精燈火焰周圍等。涂布劃線操作1.未接種的培養(yǎng)基表面是否有菌落生長？如果有菌落生長，說明什么？培養(yǎng)未接種培養(yǎng)基作用是對照，有菌落形成，說明培養(yǎng)基滅菌不徹底。大腸桿菌菌落呈白色，圓形，光滑有光澤，邊緣整齊2.接種大腸桿菌培養(yǎng)基上，獨(dú)立菌落顏色、形狀、大小如何？3.培養(yǎng)12h和24h后，觀察到結(jié)果一樣嗎？菌落大小不同；菌落分布位置相同。原因是時間越長，菌落中細(xì)菌繁殖越多，菌落體積越大；菌落的位置不動，但菌落數(shù)增多。4.如果你在培養(yǎng)基上觀察到不同形態(tài)菌落