微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)

微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)思考培養(yǎng)微生物最需要解決的兩個(gè)問(wèn)題是什么？1.為其提供合適的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和環(huán)境條件2.防止雜菌的入侵培養(yǎng)基無(wú)菌技術(shù)1培養(yǎng)基概念：人們按照微生物對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的不同需求，配制出供其生長(zhǎng)繁殖的營(yíng)養(yǎng)基質(zhì)。種類(lèi)：（按物理性質(zhì)）液體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基瓊脂種類(lèi)：（按化學(xué)成分）天然培養(yǎng)基（化學(xué)成分未知）合成培養(yǎng)基（化學(xué)成分已知）選擇培養(yǎng)基（耐高濃度食鹽的金黃色葡萄球菌）鑒別培養(yǎng)基（伊紅-美藍(lán)培養(yǎng)基）種類(lèi)：（按用途）營(yíng)養(yǎng)要素：一般都含有水、碳源（提供碳元素的物質(zhì)）、氮源（提供氮元素的物質(zhì)）和無(wú)機(jī)鹽；培養(yǎng)基組分提供的主要營(yíng)養(yǎng)牛肉膏5g碳源、氮源、磷酸鹽和維生素蛋白胨10g碳源氮源和維生素NaCl5g無(wú)機(jī)鹽H2O定容至1000mL氫元素、氧元素1000mL牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)構(gòu)成有的還需要滿(mǎn)足對(duì)pH、特殊營(yíng)養(yǎng)物資和氧氣的要求2無(wú)菌技術(shù)避免雜菌污染的四個(gè)方面：01實(shí)驗(yàn)操作的空間、操作者的衣著和手超凈工作臺(tái)清潔消毒02微生物培養(yǎng)的器皿、接種用具和培養(yǎng)基等滅菌03實(shí)驗(yàn)操作應(yīng)在酒精燈火焰附近進(jìn)行04避免已經(jīng)滅菌處理的材料用具與周?chē)奈锲方佑|消毒指使用較為溫和的物理或化學(xué)方法僅殺死物體表面或內(nèi)部一部分對(duì)人體有害得微生物（不包括芽孢和孢子）。某種細(xì)菌的芽孢毛霉的孢子休眠體繁殖體消毒煮沸消毒法在100℃，煮沸5~6min巴氏消毒法70~75℃煮30min或80℃煮15min化學(xué)藥劑消毒法紫外線消毒法滅菌指使用強(qiáng)烈的理化因素殺死物體內(nèi)外所有的微生物，包括芽孢和孢子。灼燒滅菌接種工具（接種環(huán)、接種針或其他金屬工具）請(qǐng)你判斷以下材料或用具是否需要消毒或滅菌。如果需要，請(qǐng)選擇合適的方法。（1）培養(yǎng)細(xì)菌用的培養(yǎng)基與培養(yǎng)皿（2）玻棒、試管、燒瓶和吸管（3）實(shí)驗(yàn)操作者的雙手無(wú)菌技術(shù)還能有效避免操作者自身被微生物感染。無(wú)菌技術(shù)除了用來(lái)防止實(shí)驗(yàn)室的培養(yǎng)物被其他外來(lái)微生物污染外，還有什么目的？（1）、（2）需要滅菌；（3）需要消毒。思考3實(shí)驗(yàn)操作（大腸桿菌的純化培養(yǎng)）01制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基認(rèn)真閱讀制備流程課本P16-17頁(yè)倒平板2.為什么需要使錐形瓶的瓶口通過(guò)火焰？可以用手觸摸盛有培養(yǎng)基的錐形瓶，感覺(jué)錐形瓶的溫度下降到剛剛不燙手時(shí)，就可以進(jìn)行倒平板了。1.培養(yǎng)基滅菌后，需要冷卻到50℃左右時(shí)，才能用來(lái)倒平板。你用什么辦法來(lái)估計(jì)培養(yǎng)基的溫度？通過(guò)灼燒滅菌，防止瓶口的微生物污染培養(yǎng)基。思考4.在倒平板的過(guò)程中，如果不小心將培養(yǎng)基濺在皿蓋與皿底之間的部位，這個(gè)平板還能用來(lái)培養(yǎng)微生物嗎？為什么？平板冷凝后，皿蓋上會(huì)凝結(jié)水珠，將平板倒置，既可以防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染，又可避免培養(yǎng)基中的水分過(guò)快地?fù)]發(fā)。3.平板冷凝后，為什么要將平板倒置？空氣中的微生物可能在皿蓋與皿底之間的培養(yǎng)基上滋生，因此最好不要用這個(gè)平板培養(yǎng)微生物。通過(guò)接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線的操作,將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基的表面。在數(shù)次劃線后培養(yǎng),可以分離到由一個(gè)細(xì)胞繁殖而來(lái)的肉眼可見(jiàn)的子細(xì)胞群體,這就是菌落。02純化大腸桿菌平板劃線法

1.接種環(huán)灼燒滅菌2.火焰旁冷卻，打開(kāi)棉塞。3.試管口通過(guò)火焰4.取一環(huán)菌種5.管口過(guò)火塞上棉塞6.打開(kāi)縫隙，劃3～5條平行線，蓋上皿蓋，不要?jiǎng)澠?.平板倒置放于培養(yǎng)箱7.連續(xù)劃線至五區(qū)平板劃線操作將菌液進(jìn)行一系列的梯度稀釋?zhuān)缓髮⒉煌♂尪鹊木悍謩e涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面，進(jìn)行培養(yǎng)。在稀釋度足夠高的菌液里，聚集在一起的微生物將被分散成單個(gè)細(xì)胞，從而能在培養(yǎng)基表面形成單個(gè)的菌落。稀釋涂布平板系列稀釋操作注意：移液管需要經(jīng)過(guò)滅菌。操作時(shí)，試管口和移液管離火焰1~2cm處。1.涂布器酒精消毒2.取菌液到培養(yǎng)基3.灼燒滅菌后冷卻4.將菌液均勻涂布涂布平板的所有操作都應(yīng)在火焰附近進(jìn)行。第2步應(yīng)如何進(jìn)行無(wú)菌操作？應(yīng)從操作的各個(gè)細(xì)節(jié)保證“無(wú)菌”。例如，酒精燈與培養(yǎng)皿的距離要合適、吸管頭不要接觸任何其他物體、吸管要在酒精燈火焰周?chē)?。涂布劃線操作1.未接種的培養(yǎng)基表面是否有菌落生長(zhǎng)？如果有菌落生長(zhǎng)，說(shuō)明什么？培養(yǎng)未接種培養(yǎng)基作用是對(duì)照，有菌落形成，說(shuō)明培養(yǎng)基滅菌不徹底。大腸桿菌菌落呈白色，圓形，光滑有光澤，邊緣整齊2.接種大腸桿菌培養(yǎng)基上，獨(dú)立菌落顏色、形狀、大小如何？3.培養(yǎng)12h和24h后，觀察到結(jié)果一樣嗎？菌落大小不同；菌落分布位置相同。原因是時(shí)間越長(zhǎng)，菌落中細(xì)菌繁殖越多，菌落體積越大；菌落的位置不動(dòng)，但菌落數(shù)增多。4.如果你在培養(yǎng)基上觀察到不同形態(tài)菌落