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關(guān)于蛋白質(zhì)沉淀反應(yīng)第1頁(yè),課件共11頁(yè),創(chuàng)作于2023年2月一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康恼莆諑追N使蛋白質(zhì)沉淀的方法;掌握蛋白質(zhì)可逆沉淀與不可逆沉淀的區(qū)別;理解蛋白質(zhì)變性和沉淀的關(guān)系。第2頁(yè),課件共11頁(yè),創(chuàng)作于2023年2月二、原理蛋白質(zhì)是親水膠體,正常狀態(tài)下,蛋白質(zhì)分子表面具有水化膜和電荷層,能保持其膠體溶液的穩(wěn)定性,在一定因素的影響下,蛋白質(zhì)會(huì)失去電荷和脫水沉淀。蛋白質(zhì)的變性與沉淀之間沒(méi)有必然聯(lián)系第3頁(yè),課件共11頁(yè),創(chuàng)作于2023年2月蛋白質(zhì)沉淀反應(yīng)(一)蛋白質(zhì)的鹽析作用(二)乙醇沉淀蛋白質(zhì)(三)重金屬鹽類(lèi)沉淀蛋白質(zhì)(四)生物堿試劑沉淀蛋白質(zhì)第4頁(yè),課件共11頁(yè),創(chuàng)作于2023年2月(一)蛋白質(zhì)的鹽析作用加鹽類(lèi)如硫酸銨、硫酸鈉、氯化鈉等可以破壞蛋白質(zhì)膠體周?chē)乃ぃ瑫r(shí)又中和了蛋白質(zhì)分子的電荷,因此使蛋白質(zhì)產(chǎn)生沉淀,這種加鹽使蛋白質(zhì)沉淀析出的現(xiàn)象稱(chēng)鹽析。鹽溶現(xiàn)象為低鹽濃度可使蛋白質(zhì)的溶解度增加,實(shí)驗(yàn)時(shí)要加足夠量的鹽。蛋白質(zhì)的鹽析作用是可逆過(guò)程,用鹽析方法沉淀蛋白質(zhì)時(shí),較少引起蛋白質(zhì)變性,經(jīng)透析或用水稀釋時(shí)又可溶解。第5頁(yè),課件共11頁(yè),創(chuàng)作于2023年2月(二)乙醇沉淀蛋白質(zhì)有機(jī)溶劑如酒精、丙酮等可使蛋白質(zhì)產(chǎn)生沉淀,這是由于這些有機(jī)溶劑和水有較強(qiáng)的作用,破壞了蛋白質(zhì)分子周?chē)乃?,因此發(fā)生沉淀作用。若及時(shí)將蛋白質(zhì)沉淀與丙酮或乙醇分離,蛋白質(zhì)沉淀則可重新溶解于水中。第6頁(yè),課件共11頁(yè),創(chuàng)作于2023年2月(三)重金屬鹽類(lèi)沉淀蛋白質(zhì)溶液pH在蛋白質(zhì)等電點(diǎn)以上時(shí),重金屬鹽類(lèi)(如Pb2+、Cu2+、Hg2+及Ag+等)易與蛋白質(zhì)結(jié)合成不溶性鹽而沉淀。重金屬鹽類(lèi)沉淀蛋白質(zhì)通常比較完全,故常用重金屬鹽除去液體中的蛋白質(zhì)。但應(yīng)注意,在使用某些重金屬鹽(如硫酸銅或醋酸鉛)沉淀蛋白質(zhì)時(shí),不可過(guò)量,否則將引起沉淀再溶解。此時(shí)的溶解為生成憎水膠體的緣故。第7頁(yè),課件共11頁(yè),創(chuàng)作于2023年2月(四)生物堿試劑沉淀蛋白質(zhì)生物堿是植物中具有顯著生理作用的—類(lèi)含氮的堿性物質(zhì)。凡能使生物堿沉淀,或能與生物堿作用產(chǎn)生顏色反應(yīng)的物質(zhì),稱(chēng)為生物堿試劑。如鞣酸、苦味酸和磷鎢酸等。當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)溶液pH值低于其等電點(diǎn)時(shí),蛋白質(zhì)為陽(yáng)離子,能與生物堿試劑的陰離子結(jié)合成性鹽而沉淀。溶液中的蛋白亦能被有機(jī)酸沉淀,其中以三氯醋酸的作用最為靈敏而且特異。因此被用于蛋白質(zhì)的首選沉淀劑,只能沉淀蛋白質(zhì),不能沉淀其水解產(chǎn)物,加熱可除去。第8頁(yè),課件共11頁(yè),創(chuàng)作于2023年2月三、實(shí)驗(yàn)材料實(shí)驗(yàn)材料:雞卵清蛋白液,吸管(1mlx4,2mlx4,0.5mlx1,5mlx2),試管(1.5x15cmx14),水浴鍋,滴管,電爐實(shí)驗(yàn)試劑:苯酚(0.5%),硫酸銅(1%),硫酸銨固體,95%乙醇,NaCl,醋酸鉛,鞣酸,苦味酸,冰醋酸第9頁(yè),課件共11頁(yè),創(chuàng)作于2023年2月四、操
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