外源化合物致癌作用醫(yī)學(xué)知識(shí)

近三十年以來，癌癥發(fā)病數(shù)以年均3-5%的速度遞增；3/4新增病例發(fā)生在新興工業(yè)國(guó)家及發(fā)展中國(guó)家；癌癥已成為人類第二位死因，超過艾滋病、結(jié)核、瘧疾致死病例的總和；WHO要求各會(huì)員國(guó)制定國(guó)家癌癥防控規(guī)劃，指出“Ifyou’renotplanning,you’replanningtofail”—Dr.JohnR.Seffrin癌癥已成為一個(gè)全球性公共健康問題全球癌癥狀況2008

年,(IARC報(bào)告)全球惡性腫瘤新發(fā)病例1270萬（2002-1090萬）死亡病例760萬（670)帶瘤生存患者2460萬發(fā)病率最高：肺癌、乳腺癌和大腸癌死亡率最高：肺癌、胃癌和肝癌患病率最高：乳腺癌

２００８年，５６％的新確診癌癥病人和６３％的死亡病例來自發(fā)展中國(guó)家預(yù)計(jì)2030

年1320萬人死于癌癥確診癌癥病人將有大約2140萬我國(guó)改革開放以來，經(jīng)濟(jì)、社會(huì)、環(huán)境和生活方式發(fā)生了快速變化人口結(jié)構(gòu)快速向老齡化轉(zhuǎn)變?cè)谶@一特定歷史時(shí)期，中國(guó)癌譜將呈現(xiàn)特征性變化開始進(jìn)入老齡化老齡社會(huì)中國(guó)癌癥現(xiàn)狀（1）全國(guó)老齡工作委員會(huì):2013年底，全國(guó)60歲以上的老年人口將達(dá)到2億，占人口總數(shù)的14.8%，今后每年將增加約1000萬老年人口，預(yù)計(jì)到2053年達(dá)到4.87億人。IARC報(bào)告:2008年282萬（2012-220萬）新發(fā)病例196(2002-160)萬死亡病例中國(guó)癌癥現(xiàn)狀（2）腫瘤發(fā)生過程是宿主與環(huán)境之間發(fā)生復(fù)雜的、動(dòng)態(tài)的相互作用過程重要的宿主因素：遺傳構(gòu)成、健康狀況主要的環(huán)境因素：食物、環(huán)境污染、職業(yè)和生活方式一般估計(jì)，80%-90%的人類腫瘤與環(huán)境有關(guān)，其中主要是化學(xué)因素腫瘤是可以預(yù)防的要降低腫瘤的發(fā)病率，首先必須識(shí)別、鑒定化學(xué)致癌因素和有害的生活方式，闡明其作用機(jī)理，然后采取措施加以防治研究化學(xué)物致癌作用具有非常重要意義目的要求掌握致癌作用概念并了解其機(jī)制熟悉致癌化學(xué)物分類熟悉致癌作用評(píng)價(jià)方法第一節(jié)化學(xué)致癌過程Mechanismsofchemicalcarcinogegesis毒理學(xué)中“癌”－腫瘤Tumor：指有分裂潛能的細(xì)胞受到致癌因素作用后發(fā)生惡性轉(zhuǎn)化和克隆性增生所形成的新生物。上皮細(xì)胞惡性病變---癌間質(zhì)細(xì)胞惡性病變---肉瘤良性腫瘤生理特征細(xì)胞周期失控具有遷移性接觸抑制喪失定著依賴性喪失去分化現(xiàn)象對(duì)生長(zhǎng)因子需要量降低，代謝旺盛蛋白質(zhì)合成及分解代謝都增強(qiáng)線粒體功能障礙11化學(xué)致癌物（chemicalcarcinogen）:具有致癌作用的化學(xué)物質(zhì)化學(xué)致癌作用（chemicalcarcinogensis）:化學(xué)物質(zhì)引起或誘導(dǎo)正常細(xì)胞發(fā)生惡性轉(zhuǎn)化并發(fā)展成為腫瘤的過程英國(guó)的煙囟清掃工陰囊癌多環(huán)芳烴化合物（3,4苯并芘、…）（進(jìn)展）多因素、多基因參與的多階段過程

q-長(zhǎng)臂；p－短臂正常細(xì)胞必須通過腫瘤相關(guān)基因遺傳改變的積累才能形成癌細(xì)胞APC、DCC、p53---抑癌基因，Ras---癌基因20s世紀(jì)40年代，Rous、Mottram和Bernblum等分別試驗(yàn)i亞致癌劑量的多環(huán)芳烴，皮膚涂抹，（DMBA:二羥甲基丁酸）P巴豆油（其中有促長(zhǎng)作用的有效成分為佛波醇酯（TPA））

?腫瘤發(fā)生是一個(gè)長(zhǎng)期的、多階段、多基因改變累積的過程，具有多基因控制和多因素調(diào)節(jié)的復(fù)雜性。

?化學(xué)致癌過程至少可分為:

引發(fā)（initiation）促長(zhǎng)（promotion）進(jìn)展（progression）細(xì)胞癌變的多階段學(xué)說1.引發(fā)階段（Initiation)。2.促長(zhǎng)階段（Promotion)3.進(jìn)展階段（Progression)DNA損傷損傷固定遺傳性狀改變

突變細(xì)胞在內(nèi)、外因素的作用下，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的分裂和增生突變細(xì)胞生長(zhǎng)速度快侵襲性和轉(zhuǎn)移能力強(qiáng)生理生化和免疫性狀改變1、引發(fā)階段引發(fā)（啟動(dòng)）是遺傳毒性發(fā)生的過程，是化學(xué)致癌的第一步。致癌物直接作用于DNA，引起基因突變，使單個(gè)或少量細(xì)胞發(fā)生永久性的、不可逆的遺傳性改變，成為突變細(xì)胞，或稱“啟動(dòng)細(xì)胞”，誘發(fā)細(xì)胞突變的因素稱為引發(fā)劑（啟動(dòng)劑）。啟動(dòng)細(xì)胞的表型可能正常，它必須通過克隆擴(kuò)增才能形成良性損傷。在接觸致癌物與發(fā)生細(xì)胞轉(zhuǎn)化之間要有一個(gè)相當(dāng)長(zhǎng)的潛伏期，需要啟動(dòng)效應(yīng)的遺傳傳遞。1.引發(fā)階段（Initiation)2.促長(zhǎng)階段（Promotion)3.進(jìn)展階段（Progression)DNA損傷損傷固定遺傳性狀改變

突變細(xì)胞在內(nèi)、外因素的作用下，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的分裂和增長(zhǎng)突變細(xì)胞生長(zhǎng)速度快侵襲性和轉(zhuǎn)移能力強(qiáng)生化學(xué)和免疫性狀改變引發(fā)階段的主要特征?不可逆?需要通過細(xì)胞分裂加以固定?劑量-反應(yīng)顯示沒有可測(cè)定的閾值，無可測(cè)定的最大反應(yīng)?存在自發(fā)的引發(fā)作用?對(duì)外源性化學(xué)物質(zhì)和其他化學(xué)因素敏感?引發(fā)作用必須發(fā)生在促長(zhǎng)作用之前，“純”引發(fā)作用在無促長(zhǎng)時(shí)不導(dǎo)致腫瘤2、促長(zhǎng)階段細(xì)胞在致癌物的作用下變成啟動(dòng)細(xì)胞后，在某些因素作用下，以相對(duì)于周圍正常細(xì)胞的選擇優(yōu)勢(shì)進(jìn)行克隆擴(kuò)增，形成鏡下或肉眼可見的細(xì)胞群，即良性腫瘤（如乳頭狀瘤或腺瘤）。促長(zhǎng)價(jià)段癌細(xì)胞的表型發(fā)生變化，惡性腫瘤細(xì)胞的各種性狀得以表達(dá)。起促進(jìn)作用的因素稱為促長(zhǎng)劑或促癌劑。促癌劑包括多種人類環(huán)境中存在的因子，如TCDD、苯巴比妥，以及高鹽高脂飲食、糖精、香煙煙霧等。其中煙霧既是肺癌、胰腺癌、食道癌和其它器官癌的啟動(dòng)劑，同時(shí)也是促癌劑。人體內(nèi)的一些內(nèi)源性物質(zhì)也具有促癌作用，如雌激素對(duì)乳腺癌有促進(jìn)作用；膽酸是結(jié)腸癌與肝癌的促進(jìn)劑。促癌劑的作用機(jī)理：①通過細(xì)胞毒性或激素作用刺激細(xì)胞增殖。如高脂肪飲食可使乳腺癌的發(fā)病率增高，原因是高脂肪飲食可使催乳素分泌增多，而催乳素對(duì)乳腺癌的發(fā)生有促進(jìn)作用。②抑制細(xì)胞間的信息互通，從而解除細(xì)胞生長(zhǎng)的接觸抑制，使啟動(dòng)了的細(xì)胞能逃脫周圍正常細(xì)胞的抑制，出現(xiàn)增殖失控。③免疫抑制。1.引發(fā)階段（Initiation)2.促長(zhǎng)階段（Promotion)3.進(jìn)展階段（Progression)DNA損傷損傷固定遺傳性狀改變

突變細(xì)胞在內(nèi)、外因素的作用下，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的分裂和增長(zhǎng)突變細(xì)胞生長(zhǎng)速度快侵襲性和轉(zhuǎn)移能力強(qiáng)生化學(xué)和免疫性狀改變促長(zhǎng)階段的主要特征?可逆性?促長(zhǎng)劑通常是非致突變物，需要持續(xù)和反復(fù)暴露?促長(zhǎng)劑的有效性僅出現(xiàn)在引發(fā)作用之后?促長(zhǎng)細(xì)胞群的存在取決于促長(zhǎng)劑的持續(xù)存在?內(nèi)源性促長(zhǎng)劑可起自發(fā)促長(zhǎng)作用?劑量-反應(yīng)顯示有可測(cè)定的閾值，有可測(cè)定的最大效應(yīng)?對(duì)飲食和激素等因素敏感?促長(zhǎng)作用的相對(duì)效力取決于達(dá)到最大效應(yīng)的時(shí)間和劑量速率3、進(jìn)展階段

?指在腫瘤形成過程中，在促進(jìn)之中或之后，細(xì)胞表現(xiàn)出不可逆的遺傳學(xué)改變，其標(biāo)志為遺傳不穩(wěn)定性增加和惡性變化，在形態(tài)上或功能代謝和行為方面逐漸表現(xiàn)出惡性腫瘤的生物學(xué)特征，如生長(zhǎng)速度、侵襲性、轉(zhuǎn)移能力、以及生理生化、免疫性能的改變等。?當(dāng)細(xì)胞開始失去維持核型穩(wěn)定的能力并出現(xiàn)染色體畸變時(shí)，它們即進(jìn)入進(jìn)展期。核型不穩(wěn)定性進(jìn)一步促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)和惡性表型的發(fā)展，同時(shí)引起細(xì)胞代謝調(diào)節(jié)功能的改變，且逃避機(jī)體免疫監(jiān)視等功能。1.引發(fā)階段（Initiation)2.促長(zhǎng)階段（Promotion)3.進(jìn)展階段（Progression)DNA損傷損傷固定遺傳性狀改變

突變細(xì)胞在內(nèi)、外因素的作用下，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的分裂和增長(zhǎng)突變細(xì)胞生長(zhǎng)速度快侵襲性和轉(zhuǎn)移能力強(qiáng)生化學(xué)和免疫性狀改變進(jìn)展階段的主要特征?不可逆?伴隨生長(zhǎng)率和侵襲性的增加出現(xiàn)核型異常，核型不穩(wěn)定性導(dǎo)致細(xì)胞基因組結(jié)構(gòu)的形態(tài)學(xué)改變?有可測(cè)定的和/或形態(tài)學(xué)可描述的細(xì)胞基因組的改變?進(jìn)展的早期階段對(duì)環(huán)境因素敏感?可見良性和/或惡性腫瘤?促展劑可促進(jìn)細(xì)胞進(jìn)入該階段，但可能不是引發(fā)劑?可以發(fā)生自發(fā)的進(jìn)展作用第二節(jié)化學(xué)致癌機(jī)制

化學(xué)致癌作用：多因素、多基因參與的多階段過程。?遺傳機(jī)制學(xué)派（genetictheory）：親電子劑學(xué)說、體細(xì)胞突變學(xué)說、癌基因?qū)W說、癌變的階段學(xué)說?

表觀遺傳機(jī)制學(xué)派（epigenetictheory）

化學(xué)物致癌機(jī)理：

(1)親電子劑學(xué)說

(2)染色體異常學(xué)說

(3)癌基因?qū)W說

(4)細(xì)胞異常增生、免疫抑制

(5)癌變的表遺傳學(xué)機(jī)制

(6)癌變的階段學(xué)說指非基因序列改變所致基因表達(dá)水平變化:DNA甲基化/組蛋白修飾/染色質(zhì)重塑/非編碼RNA突變代謝酶須在體內(nèi)代謝活化（母體化合物）a.直接致癌物b.間接致癌物的活化代謝產(chǎn)物前致癌物→近致癌物→終致癌物主要解毒物終致癌物親電子代謝物1971年Miller提出直接致癌物（directcarcinogen）間接致癌物終致癌物(ultimatecarcinogen)親電劑與生物大分子（如DNA）親核物結(jié)合→形成加合物→DNA損傷→部分細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化→腫瘤致癌物多數(shù)具有遺傳毒性，具有遺傳毒性的致癌物盡管化學(xué)結(jié)構(gòu)和性質(zhì)不盡相同，但有一共同特點(diǎn)：均為親電子劑。依據(jù)：1.大多數(shù)致癌物同時(shí)也是致突變物2.許多致癌物的致突變和致癌性質(zhì)取決于它們是否轉(zhuǎn)變?yōu)橛H電子的代謝物3.DNA加合物的水平通常與致癌性和致突變性成正相關(guān)4.DNA和致癌物的相互作用可活化腫瘤基因DNA加合物可作為人類接觸環(huán)境致癌物的生物標(biāo)記物DNA加合物是引起腫瘤的直接原因之一√對(duì)DNA損傷而引起腫瘤的遺傳毒性機(jī)制√對(duì)DNA以外靶分子作用的非遺傳毒性機(jī)制從本質(zhì)上說，腫瘤是一種遺傳物質(zhì)改變導(dǎo)致的疾病，即“遺傳病”大多數(shù)環(huán)境因素的致癌作用都是通過影響遺傳基因作用的，腫瘤是細(xì)胞中多種基因突變累積的結(jié)果。1920年Roreri提出惡性腫瘤細(xì)胞起源于一個(gè)染色體不平衡的細(xì)胞

一個(gè)世紀(jì)前,兩位德國(guó)科學(xué)家發(fā)現(xiàn),染色體紊亂可能是癌癥的直接成因,但這一發(fā)現(xiàn)沒有得到應(yīng)有的關(guān)注,因?yàn)榭茖W(xué)界的主流觀點(diǎn)認(rèn)為,基因突變才是引起癌癥的真正原因,染色體紊亂只是癌癥發(fā)生的結(jié)果。隨著檢測(cè)技術(shù)的進(jìn)步,越來越多的發(fā)現(xiàn)和證據(jù)與主流理論背道而馳。

致癌劑的實(shí)際作用是導(dǎo)致非整倍化

染色體的改變方式只與長(zhǎng)出腫瘤的組織有關(guān),而與患者沒有太大的關(guān)系。這就是說,某一組織的細(xì)胞要發(fā)生癌變,染色體必須發(fā)生一定的改變,才能使細(xì)胞擺脫遺傳程序的束縛。因此,非整倍體細(xì)胞要走上惡變之路,染色體變異就是最基本的條件。致癌物質(zhì)會(huì)隨機(jī)地造成染色體的損傷和有絲分裂的故障，受此影響的分裂細(xì)胞就會(huì)無法平均分配染色體，使兩個(gè)子細(xì)胞都變成非整倍體細(xì)胞。大多數(shù)非整倍體細(xì)胞都不能存活，但存活下來的細(xì)胞繼續(xù)分裂。輕度非整倍體細(xì)胞及其子代細(xì)胞會(huì)逐步喪失正常功能，但還沒有導(dǎo)致大量增值。細(xì)胞內(nèi)染色體數(shù)目異常造成了更多染色體損傷和混亂，于是每一代子細(xì)胞越加不穩(wěn)定，并逐步發(fā)展出惡性細(xì)胞的特征。癌基因

20世紀(jì)60年代初,很多著名科學(xué)家都認(rèn)為,病毒是引發(fā)絕大多數(shù)腫瘤的罪魁禍?zhǔn)?。?dāng)時(shí)發(fā)現(xiàn),一些病毒感染細(xì)胞后,會(huì)將自身的遺傳物質(zhì)插入細(xì)胞的基因組,引起細(xì)胞的惡性轉(zhuǎn)化和異常增殖,最終導(dǎo)致白血病等癌癥。

逆轉(zhuǎn)錄病毒的研究對(duì)于闡明人類癌癥的發(fā)生機(jī)理具有重要意義。逆轉(zhuǎn)錄病毒的基因組中除了病毒本身復(fù)制所必需的基因，如編碼病毒核心蛋白（gag）、外殼糖蛋白（env）及逆轉(zhuǎn)錄酶（pol）等的基因外，還包括一個(gè)能引起細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化的基因。這種基因就是現(xiàn)在為人們所熟知的癌基因（oncogene，onc）。由于最初是在病毒中發(fā)現(xiàn)的，所以稱之為病毒癌基因（v-onc）。后來發(fā)現(xiàn)，在許多動(dòng)物的正常細(xì)胞中都存在著與v-onc相對(duì)應(yīng)的DNA序列，稱之為原癌基因（proto－oncogene）或細(xì)胞癌基因（c-onc)

原癌基因癌基因突變致癌物癌變?cè)┗蚺c癌基因關(guān)系“原癌基因”(proto-oncogene）就像一顆顆“定時(shí)炸彈”,埋藏在人類基因組里,隨時(shí)可能爆發(fā)，一旦發(fā)生突變,原癌基因就會(huì)變成癌基因

1.細(xì)胞癌基因在長(zhǎng)期進(jìn)化過程中極為保守，在無脊椎動(dòng)物（如果蠅）的基因組中就可以找到與哺乳動(dòng)物細(xì)胞癌基因基本上同源的序列。所以實(shí)際上在正常情況下，細(xì)胞癌基因不僅對(duì)機(jī)體無害，而且可能在發(fā)育過程中，以至于對(duì)生命的維持起著重大的作用2.細(xì)胞癌基因在正常細(xì)胞中可以有低水平的表達(dá)，而在癌組織中與其相對(duì)應(yīng)的活化癌基因的表達(dá)水平卻比它高的多。

現(xiàn)有資料表明：抑癌基因（anti-oncogene）又稱腫瘤抑制基因（tumorsuppressorgene），指對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)、增殖和分化起負(fù)性調(diào)節(jié)的基因抑癌基因失活→→腫瘤細(xì)胞增殖失控正常情況抑癌基因具有多種多樣的細(xì)胞功能，如P53野生型抑癌基因的功能是使正常細(xì)胞以及腫瘤細(xì)胞分化避免增值過多（減少增值和/或誘導(dǎo)分化和增加凋亡）遺傳毒性致癌物主要通過原癌基因突變從而激活為癌基因或/和抑癌基因突變從而失活引起致癌作用癌基因的兩個(gè)等位基因中的單個(gè)基因突變可以影響細(xì)胞表型抑癌基因的兩個(gè)等位基因都必須失活才能改變細(xì)胞表型（原癌基因）癌基因、抑癌基因與生長(zhǎng)因子的關(guān)系癌基因抑癌基因細(xì)胞生長(zhǎng)因子正調(diào)控負(fù)調(diào)控產(chǎn)物終末分化增殖化學(xué)致癌過程完全致癌物： 兼有引發(fā)、促長(zhǎng)和進(jìn)展作用的化學(xué)物外來化學(xué)物與人體接觸大多數(shù)經(jīng)代謝解毒排泄非遺傳毒性化合物直接致癌物少數(shù)經(jīng)代謝活化終致癌物直接或間接誘導(dǎo)有絲分裂、促進(jìn)細(xì)胞過度增殖作用于大分子DNA損傷修復(fù)DNA加合物形成、癌基因與抑癌基因的改變引發(fā)細(xì)胞逃避細(xì)胞免疫監(jiān)視促癌物癌前病變腫瘤多階段致癌理論圖解化學(xué)致癌多基因、多因素參與的多階段理論化學(xué)致癌物癌基因抑癌基因DNA修復(fù)基因代謝酶基因凋亡基因抗凋亡基因外源性因素

理化生物因素、營(yíng)養(yǎng)等內(nèi)源性因素遺傳、免疫、激素、精神等生物體

引起癌基因、抑癌基因等發(fā)生點(diǎn)突變、擴(kuò)增、易位、重排、缺失等使癌基因活化，抑癌基因失活，導(dǎo)致細(xì)胞的增殖、分化、凋亡異常引起腫瘤

第三節(jié)化學(xué)致癌相關(guān)的分子事件端粒調(diào)控與細(xì)胞永生化細(xì)胞調(diào)控周期紊亂細(xì)胞凋亡與腫瘤發(fā)生第四節(jié)化學(xué)致癌物分類

IRAC分類 按化學(xué)致癌作用模式和機(jī)制分類按對(duì)人和動(dòng)物致癌性的其它分類

人類致癌 動(dòng)物致癌 證據(jù) 證據(jù)1組（致癌物） 充分2組（A可疑致癌物）有限 充分 （B可能致癌物）有限 不充分 不足 充分3組（目前無法分類）不足 不足4組（可能是非致癌物）沒有 沒有 根據(jù)致癌物對(duì)人類和動(dòng)物的致癌性分類（國(guó)際癌癥研究中心IARC，至2012年1月共評(píng)價(jià)927種）組1，對(duì)人類是致癌物。對(duì)人類致癌性證據(jù)充分。有107種；組2，對(duì)人類是很可能或可能致癌物。組2A，對(duì)人類很可能是致癌物。對(duì)人類致癌性證據(jù)有限，對(duì)動(dòng)物致癌性證據(jù)充分。有58種；組2B，對(duì)人類是可能致癌物。對(duì)人類致癌性證據(jù)有限，對(duì)動(dòng)物致癌性證據(jù)并不充分；或?qū)θ祟愔掳┬宰C據(jù)不足，對(duì)動(dòng)物致癌性證據(jù)充分。有249種；組3，現(xiàn)有證據(jù)不能對(duì)人類致癌性分類。有512種；組4，對(duì)人類可能是非致癌物，有1種（己內(nèi)酰胺）。遺傳毒性致癌物化學(xué)致癌作用模式直接致癌物：不經(jīng)過代謝活化就具有活性間接致癌物：必須經(jīng)過代謝活化才具有致癌性促癌劑：本身不致癌，但對(duì)致癌物有促進(jìn)作用物質(zhì)表觀遺傳毒性致癌物促癌劑、細(xì)胞毒物、激素、免疫抑制劑、固態(tài)物質(zhì)暫未確定遺傳毒性的致癌物（表觀）第六節(jié)

化學(xué)致癌物篩查的基本方法化學(xué)致癌物判斷的證據(jù)1.人群流行病學(xué)調(diào)查：必須具備兩項(xiàng)以上由不同研究者在不同地點(diǎn)、不同對(duì)象中以不同調(diào)查方法獲得的結(jié)論相符的證據(jù)2.動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證據(jù)：至少有兩項(xiàng)按現(xiàn)行常規(guī)設(shè)計(jì)進(jìn)行，符合GLP，在不同物種動(dòng)物所得結(jié)果一致的動(dòng)物致癌物鑒定資料基本方法定量構(gòu)效關(guān)系分析：特定結(jié)構(gòu)、空間構(gòu)象—生物學(xué)效應(yīng)（生物信息學(xué)）短期試驗(yàn)—快速篩查致突變?cè)囼?yàn)、細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗(yàn)、哺乳動(dòng)物短期致癌試驗(yàn)哺乳動(dòng)物長(zhǎng)期致癌試驗(yàn)人群流行病學(xué)調(diào)查

一、短期試驗(yàn)（一）致突變?cè)囼?yàn)：①基因突變?cè)囼?yàn)：Ames試驗(yàn)...②染色體畸變?cè)囼?yàn)：體外細(xì)胞系細(xì)胞遺傳學(xué)分析，小鼠骨髓微核試驗(yàn)，大鼠骨髓染色體畸變?cè)囼?yàn);③原發(fā)性DNA損傷：DNA加合物，鏈斷裂，DNA修復(fù)誘導(dǎo)(細(xì)菌SOS反應(yīng)，大鼠肝UDS誘導(dǎo))，SCE試驗(yàn)；④體外細(xì)胞轉(zhuǎn)化：敘利亞地鼠胚胎細(xì)胞，Balb/c3T3細(xì)胞

（二）細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗(yàn)受試物與正常細(xì)胞在體外接觸，如有致癌作用，可使正常細(xì)胞形態(tài)、功能發(fā)生變化，發(fā)生與癌細(xì)胞相似的過程惡性轉(zhuǎn)化后的細(xì)胞接種在裸鼠皮下可形成肉眼可見的腫瘤可以彌補(bǔ)致突變?cè)囼?yàn)的不足：可檢測(cè)遺傳毒和非遺傳毒致癌物（三）哺乳動(dòng)物短期致癌試驗(yàn)哺乳動(dòng)物短期致癌試驗(yàn)又稱為有限體內(nèi)試驗(yàn)，指時(shí)間有限(數(shù)月)，靶器官有限。較受重視的短期致癌試驗(yàn)有下列四種：1．小鼠皮膚腫瘤誘發(fā)試驗(yàn)：引發(fā)劑為致癌性多環(huán)芳烴，促長(zhǎng)劑為佛波醇酯(TPA)。2．小鼠肺瘤誘發(fā)試驗(yàn)：引發(fā)劑為烏拉坦，促長(zhǎng)劑為二丁基經(jīng)基甲苯(BHT)。3．大鼠肝轉(zhuǎn)化灶誘發(fā)試驗(yàn):

引發(fā)劑為二乙基亞硝胺(DEN)，促長(zhǎng)劑為苯巴比妥(PB)4．雌性大鼠乳腺癌誘發(fā)試驗(yàn)

此四個(gè)試驗(yàn)不是成組試驗(yàn)，應(yīng)根據(jù)受試物的特點(diǎn)選擇使用。此四個(gè)試驗(yàn)任一試驗(yàn)得到陽(yáng)性結(jié)果的意義與長(zhǎng)期動(dòng)物致癌試驗(yàn)相似，但陰性結(jié)果并不能排除受試物的致癌性。適用于按照構(gòu)效關(guān)系能預(yù)測(cè)靶器官的受試物何時(shí)應(yīng)考慮進(jìn)行致癌性評(píng)價(jià)：

①人體可能長(zhǎng)期暴露于該化學(xué)物；②該化學(xué)物或其代謝物的化學(xué)結(jié)構(gòu)與已知致癌物相似；③反復(fù)染毒毒性試驗(yàn)提示該化學(xué)物可能產(chǎn)生癌前病變。如在3種遺傳毒理學(xué)短期試驗(yàn)均得到陽(yáng)性結(jié)果，可預(yù)測(cè)為遺傳毒性致癌物；如在3種遺傳毒理學(xué)短期試驗(yàn)均得到陰性結(jié)果，可預(yù)測(cè)為非遺傳毒性非致癌物；如經(jīng)5種遺傳毒理學(xué)短期試驗(yàn)仍不能預(yù)測(cè)其致癌性的化學(xué)品，應(yīng)優(yōu)先進(jìn)行哺乳動(dòng)物致癌試驗(yàn)。二、哺乳動(dòng)物長(zhǎng)期致癌試驗(yàn)期限：

長(zhǎng)期或終生大鼠－2年小鼠－1.5年動(dòng)物：敏感動(dòng)物（兩種）剛斷乳或斷乳不久雌雄各半每組每性別50只，希望在第1個(gè)腫瘤出現(xiàn)時(shí)，每組還有不少于25只動(dòng)物劑量：3個(gè)染毒組無作用劑量組閾劑量組發(fā)生腫瘤劑量組1個(gè)對(duì)照組1個(gè)溶劑組（必要時(shí)）結(jié)果觀察、分析與評(píng)定腫瘤總發(fā)生率(％)＝(實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)患腫瘤動(dòng)物總數(shù)/有效動(dòng)物總數(shù))×100％有效動(dòng)物總數(shù)指最早發(fā)現(xiàn)腫瘤時(shí)存活動(dòng)物總數(shù)致癌試驗(yàn)常用指標(biāo)：1.腫瘤發(fā)生率：最重要指標(biāo)2.多發(fā)性：一個(gè)動(dòng)物出現(xiàn)多個(gè)腫瘤或一個(gè)器官出現(xiàn)多個(gè)腫瘤3.潛伏期：通常用各組第一個(gè)腫瘤出現(xiàn)時(shí)間為該組潛伏期腫瘤總發(fā)生率、惡性腫瘤總發(fā)生率、各器官或組織腫瘤發(fā)生率和惡性腫瘤發(fā)生率，各病理類型腫瘤發(fā)生率…應(yīng)著重報(bào)告發(fā)現(xiàn)腫瘤的部位、數(shù)量、性質(zhì)、癌前病變，以及其他毒性效應(yīng)；應(yīng)報(bào)告劑量—反應(yīng)關(guān)系及統(tǒng)計(jì)學(xué)分析結(jié)果。同時(shí)重視染毒組出現(xiàn)而對(duì)照組未出現(xiàn)的腫瘤類型如在動(dòng)物組織中觀察到良性和惡性腫瘤，并有良性腫瘤向惡性化進(jìn)展的證據(jù)，在進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析之前將良性和惡性腫瘤合并是適宜的，但仍希望分別對(duì)良性和惡性分別統(tǒng)計(jì)處理。評(píng)價(jià)該試驗(yàn)不同劑量良性和惡性腫瘤的相對(duì)數(shù)量可有助于確定該受試動(dòng)物對(duì)受試物的劑量反應(yīng)關(guān)系。另一方面，如果僅觀察到良性腫瘤，并無惡性化進(jìn)展的證據(jù)，則將此受試物認(rèn)為是致癌物是不適宜的，此僅提示在該試驗(yàn)條件下需要進(jìn)一步研究。結(jié)果報(bào)告：三、人群流行病學(xué)調(diào)查（一）