淺論Smad4和轉(zhuǎn)化生長因子β受體Ⅱ在宮頸腺癌中的表達及意義

淺論Smad4和轉(zhuǎn)化生長因子β受體Ⅱ在宮頸腺癌中的表達及意義【摘要】目的：研究Smad4和轉(zhuǎn)化生長因子β受體Ⅱ(TβRⅡ)在宮頸腺癌中的表達及其與臨床病理的相關(guān)性，探討其作為宮頸腺癌預(yù)后判斷分子指標的可能性。方法：免疫組織化學(xué)鏈霉菌抗生物素蛋白-過氧化物酶連接法(SP法)檢測36例宮頸腺癌組織中Smad4和TβRⅡ的表達，以20例正常宮頸腺上皮組織作為對照，對Smad4和TβRⅡ的表達與宮頸腺癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系進行分析。結(jié)果：Smad4和TβRⅡ在宮頸腺癌中的表達顯著低于正常宮頸腺上皮組織()，在低分化癌中的表達率顯著低于中高分化癌()，在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組顯著低于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組()。Smad4和TβRⅡ的表達相關(guān)。結(jié)論：Smad4和TβRⅡ的表達缺失與宮頸腺癌的發(fā)生、分化程度及轉(zhuǎn)移有關(guān)。Smad4和TβⅡ的低表達可能作為判斷宮頸腺癌惡性程度和轉(zhuǎn)移的標記，Smad4和TβRⅡ聯(lián)合檢測能作為一種有效的腫瘤標記物用于宮頸腺癌患者預(yù)后的評估。

【關(guān)鍵詞】Smad4;轉(zhuǎn)化生長因子β受體Ⅱ;宮頸腺癌;診斷

[Abstract]Objective:TostudythecorrelationoftheexpressionofSmad4andTGFβreceptorⅡ(TβRⅡ)withclinicalpathologyincervicaladenocarcinoma,andtoexploreitspossibilityasamarkertodecidetheprognosisofcervical：TodetecttheexpressionofSmad4andTβRⅡin36casesofcervicaladenocarcinomaand20casesofnormalcervicalglandularepitheliumtissueandtoinvestigatetherelationbetweentheexpressionofSmad4withTβRⅡandclinicalpathology.Results：TheexpressionofSmad4andTβRⅡincervicaladenocarcinomaissignificantlylowerthannormalcervicalglandularepitheliumtissue().TheexpressionofSmad4andTβRⅡincervicaladenocarcinomawithpoordifferentiatedwassignificantlylowerthanthatofmoderateorwelldifferentiated().TheexpressionofSmad4andTβRⅡissignificantlylowerincervicaladenocarcinomawithmetastaticlymphnodesthaninthetissuewithnometastaticlymphnodes().TheexpressionofSmad4andTβRⅡwassignificantlyrelatedwithclinicalstage().Conclusion：ThedeletedexpressionofSmad4andTβRⅡwasassociatedwithdevelopment,advanced,differentiatedandmetastasisincervicalandTβRⅡmaybeamarkerfordifferentiatedandmetastasisofcervicaldetectSmad4andTβRⅡmaybeausefultumormarkertodecidetheprognosisofcervicaladenocarcinoma.

[Keywords]Smad4;TGFβreceptorⅡ;cervicaladenocarcinoma;prognosis

宮頸腺癌近年來在宮頸癌中所占的比例明顯增高[1]，宮頸腺癌較宮頸鱗癌更易于發(fā)生轉(zhuǎn)移，預(yù)后差。其主要死亡原因是術(shù)后復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移。臨床尚無可靠方法做到早期預(yù)測。因此,對宮頸腺癌復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移等預(yù)后指標的生物學(xué)標志物的研究有非常重要的意義。轉(zhuǎn)化生長因子βⅡ型受體(TβRⅡ)可直接結(jié)合轉(zhuǎn)化生長因子β(TGFβ)參與細胞增殖分化、血管形成、腫瘤發(fā)生等多種生物學(xué)過程。Smad4是TGFβ信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路中重要的調(diào)控因子，活化的TβR與Smad結(jié)合成寡聚物，將TGFβ的信號傳遞至細胞核內(nèi)，調(diào)節(jié)靶基因的轉(zhuǎn)錄并誘導(dǎo)下游基因的表達。本研究用免疫組化法檢測Smad4和TβRⅡ在宮頸腺癌組織中的表達,探討Smad4和TβRⅡ在宮頸腺癌組織中表達情況及其相關(guān)性，結(jié)合臨床及病理資料探討其在評價宮頸腺癌預(yù)后中的意義。

1對象與方法

對象

收集2006年1月至2008年12月共3年間在鎮(zhèn)江地區(qū)各二級及以上醫(yī)院收治的宮頸腺癌患者術(shù)后存檔蠟塊共36例，選取同期正常宮頸腺上皮組織20例作為對照。腫瘤組織學(xué)類型、分化程度由兩位病理專家根據(jù)HE染色判斷。兩組間年齡構(gòu)成比差異無統(tǒng)計學(xué)意義()。所有病例術(shù)前均未行放、化療。根據(jù)WHO標準按分化程度分為高、中分化癌20例，未、低分化癌16例。23例手術(shù)標本有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移,13例無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。臨床分期采用國際婦產(chǎn)科協(xié)會(FIGO)標準，其中Ⅰ～Ⅱ期14例，Ⅲ～Ⅳ期22例。

試劑與方法

濃縮型Smad4和TβRⅡ單克隆抗體、SP超敏試劑盒及DAB酶底物顯色試劑盒均購自北京中山生物技術(shù)有限公司。采用SP免疫組化法，方法按試劑盒說明進行。Smad4按照1∶50稀釋，TβRⅡ按照1∶100稀釋。石蠟組織2～3μm厚度切片，高溫高壓抗原修復(fù)，檸檬酸修復(fù)，一抗4℃冰箱過夜，孵育約16h左右，用試劑公司提供的陽性片做陽性對照，PBS代替一抗做陰性對照，蘇木素復(fù)染。

結(jié)果判定

在雙盲法下進行結(jié)果判定，Smad4蛋白表達定位于細胞質(zhì)內(nèi),也可出現(xiàn)于胞核內(nèi)，TβRⅡ蛋白表達定位于細胞質(zhì)內(nèi)，出現(xiàn)淡黃色、棕黃色、棕褐色顆粒為陽性表達。每張切片在高倍鏡下隨機選取5個視野，每個視野計數(shù)100個腫瘤細胞，著色強度分為無著色(-)為0分，淺黃色(+)為1分，黃色及棕黃色(++)為2分。陽性細胞數(shù)10%為0分，10%～50%為1分，50%為2分。兩項得分相加結(jié)果≥2分記為陽性。

統(tǒng)計方法

運用軟件,采用χ2檢驗、四格表確切概率法進行統(tǒng)計分析。取雙側(cè)α=為檢驗水準。

2結(jié)果

正常宮頸腺上皮組織、宮頸腺癌中Smad4與TβRⅡ的表達

見表1。Smad4和TβRⅡ在正常宮頸腺上皮組織中的表達率高于宮頸腺癌組織，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=,,χ2=,)。表1正常宮頸腺上皮組織、宮頸腺癌中Smad4與TβRⅡ的表達

宮頸腺癌中Smad4,TβRⅡ的表達與臨床病理學(xué)參數(shù)的關(guān)系

見表2。Smad4和TβRⅡ的陽性表達率在高、中分化癌組高于未、低分化癌組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義()。Smad4和TβRⅡ陽性表達率在無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組陽性率高于有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義()。Smad4和TβRⅡ在Ⅰ期+Ⅱ期組中陽性率高于在Ⅲ期+Ⅳ期組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義()。

宮頸腺癌中Smad4,TβRⅡ表達的關(guān)系

見表3。27例Smad4蛋白表達陽性標本TβRⅡ陽性24例，29例Smad4蛋白表達陰性標本TβRⅡ陰性22例，兩者明顯相關(guān)(χ2=,)。表2宮頸腺癌中Smad4,TβRⅡ的表達與臨床病理學(xué)參數(shù)的關(guān)系表3正常宮頸腺上皮組織、宮頸腺癌中Smad4和TβRⅡ表達的關(guān)系

3討論

Smad4基因是位于18號染色體長臂上，編碼一種552個氨基酸的蛋白，Smad4蛋白是TGFβ信號轉(zhuǎn)導(dǎo)系統(tǒng)中的關(guān)鍵因子。近年來研究證實Smad4與惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展、浸潤、轉(zhuǎn)移有密切關(guān)系。TGFβⅡ型受體TβRⅡ是一種存在于細胞膜表面的跨膜糖蛋白，相對分子質(zhì)量75ku，屬于絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶家族，包括配體結(jié)合部、跨膜區(qū)域、蛋白激酶部。TGFβ的多種生物學(xué)功能都由其相應(yīng)的受體介導(dǎo)，磷酸化后被激活的受體可進一步激活細胞質(zhì)內(nèi)的Smads蛋白，調(diào)節(jié)靶基因的轉(zhuǎn)錄，控制細胞生長、分化和凋亡,其中Smad4是其胞內(nèi)重要傳導(dǎo)成分。這一通路中的任一環(huán)節(jié)異常都將導(dǎo)致細胞異常增殖，而Ⅱ型受體和Smad4是TGFβ信號傳導(dǎo)系統(tǒng)中最為關(guān)鍵的部分。研究表明，在多種腫瘤都有TβRⅡ和(或)Smad4基因缺失，點突變或者功能性滅活。

有研究證實，Smad4在胰腺癌中缺失和突變率為50%，并存在TGFβ抵抗。Ijichi等對11種結(jié)腸癌細胞系TGFβSmad通路研究發(fā)現(xiàn)，91%的細胞系存在TβRⅡ和Smad4的失活導(dǎo)致該通路的受損。Xie等對瑞典600多份結(jié)腸癌標本研究提示Smads基因的不表達與腫瘤進展、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和生存時間較短有關(guān)。Kim等研究表明，在胃癌中Smad4陽性表達者腫瘤多數(shù)分化好、生長速度慢、侵襲和轉(zhuǎn)移能力弱，預(yù)后較好。研究認為Smad4的失活一般發(fā)生在腫瘤進展的后期，屬于晚期分子事件。Zhou等[10]研究了64例子宮內(nèi)膜癌的染色體缺失圖譜，發(fā)現(xiàn)20例存在第18染色體的雜合性缺失，14例存在Smad4基因片段的純合性缺失，6例發(fā)生Smad4的轉(zhuǎn)錄異常。而在國內(nèi)未見有宮頸腺癌中Smad4和TβRⅡ表達情況的報道。我們發(fā)現(xiàn)Smad4和TβRⅡ在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的宮頸腺癌中的陽性率明顯低于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組,在臨床分期ⅢⅣ期的宮頸腺癌中的陽性率明顯低于ⅠⅡ期,提示Smad4和TβRⅡ表達缺失對促進宮頸腺癌細胞侵襲及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移具有重要作用。作用機制可能為TβRⅡ及Smad4的表達受到阻遏，使得TGFβ信號傳導(dǎo)系統(tǒng)在多個部位阻斷，無法介導(dǎo)TGFβ的生長抑制效應(yīng)，從而促進腫瘤的發(fā)生發(fā)展。

在本研究中,Smad4和TβRⅡ在宮頸腺癌中的表達率均明顯低于正常宮頸腺上皮組織，兩者表達明顯相關(guān)，且其表達情況與宮頸腺癌分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及臨床分期有關(guān)。因此,Smad4和TβRⅡ的表達缺失可能與宮頸腺癌的惡性程度及轉(zhuǎn)移潛能有關(guān)。綜上所述，Smad4和TβRⅡ聯(lián)合檢測能作為一種有效的腫瘤標記物用于宮頸腺癌患者預(yù)后的評估。

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