第二十一章免疫學(xué)方法技術(shù)

第21章免疫學(xué)方法技術(shù)第一節(jié)

基于Ag-Ab反應(yīng)的檢測方法抗原-抗體反應(yīng)：指抗原與相應(yīng)抗體在體內(nèi)、外發(fā)生高度特異性結(jié)合反應(yīng)。由于實驗所用的抗體存在于血清中，故又稱血清學(xué)反應(yīng)（serologicalreaction)用于：抗原（微生物、細(xì)胞、激素、細(xì)胞因子、腫瘤標(biāo)志物等）、抗體的檢測。特異性抗原抗體反應(yīng)的可見性適當(dāng)?shù)谋壤蜐舛瓤赡嫘钥乖贵w反應(yīng)的特點應(yīng)用1、利用已知抗原檢測未知抗體（1）檢測病原微生物的相應(yīng)抗體以輔助診斷疾?。簜?、流行性乙型腦炎、AIDS病等。（2）檢測自身抗體—診斷自身免疫?。篠LE、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等。2、利用已知抗體檢測未知抗原（1）鑒定病原菌：診斷疾?。?）檢測腫瘤相關(guān)抗原：檢測甲胎蛋白以診斷肝癌（3）檢測血型抗原、HLA抗原：鑒定血型，親子鑒定（4）檢測藥物半抗原：確認(rèn)運(yùn)動員是否服用興奮劑沉淀反應(yīng)補(bǔ)體參與反應(yīng)中和反應(yīng)2341免疫標(biāo)記凝集反應(yīng)2435Ag-Ab反應(yīng)的基本類型一、凝集反應(yīng)（agglutinationreaction）概念：細(xì)菌、細(xì)胞等顆粒性抗原或包被有抗原的顆粒狀物質(zhì)（如聚苯乙烯乳膠等）與相應(yīng)的抗體結(jié)合，出現(xiàn)肉眼可見的凝集團(tuán)，稱為凝集反應(yīng)。1、直接凝集：將細(xì)菌或紅細(xì)胞與相應(yīng)的抗體直接反應(yīng)，出現(xiàn)細(xì)菌凝集或紅細(xì)胞凝集現(xiàn)象。又分為玻片法和試管法。2、間接凝集：將可溶性抗原包被在紅細(xì)胞或乳膠顆粒表面，與相應(yīng)抗體反應(yīng)出現(xiàn)顆粒凝集現(xiàn)象。細(xì)菌的鑒定和血型的檢查檢測病原體可溶性抗原，病原體感染后產(chǎn)生的抗體二、沉淀反應(yīng)（precipitation）概念：可溶性抗原（免疫球蛋白、細(xì)胞裂解物、組織浸液等）與相應(yīng)抗體結(jié)合，形成不溶性免疫復(fù)合物，出現(xiàn)不透明的沉淀物。在液體中進(jìn)行出現(xiàn)絮狀沉淀，在半固體瓊脂凝膠上進(jìn)行，形成白色的沉淀。1．單向免疫擴(kuò)散(singleimmunodiffusion)2．雙向免疫擴(kuò)散(doubleimmunodiffusion)3．免疫電泳(immunoelectrophoresis)4．免疫比濁(immunonephelometry)

1、單向免疫擴(kuò)散（singleimmunodiffusion）：可溶性抗原在含相應(yīng)抗體的瓊脂凝膠中進(jìn)行的擴(kuò)散，為一種半定量試驗。環(huán)的直徑與抗原含量成正相關(guān)2、雙向免疫擴(kuò)散（douleimmunodiffusion）：抗原與抗體在瓊脂板中相互擴(kuò)散而形成一定類型的沉淀線的方法。常用于抗原或抗體的定性檢測、組成和兩種抗原相關(guān)性分析。3、免疫電泳（immunoelectrophoresis）常用于血清蛋白種類分析，以觀察Ig的異常增多或缺失。

1）簡易免疫電泳先將抗原樣品在瓊脂中進(jìn)行電泳分離，可將蛋白質(zhì)抗原分子分成不同的區(qū)帶，然后將抗血清加入瓊脂板橫槽中，使二者進(jìn)行雙向擴(kuò)散，當(dāng)比例合適時即形成特異性的沉淀線，2）對流免疫電泳(counterimmunoelectrophoresis,CIEP)是將雙向免疫擴(kuò)散與電泳相結(jié)合的一種技術(shù)3）火箭免疫電泳(rocketimmunoelectrophoresis)，抗原在電場下通過含有一定量抗體的瓊脂凝膠，并于抗體發(fā)生反應(yīng)，形成沉淀帶。可定量分析。4、免疫比濁在一定量抗體中分別加入遞增量的抗原，經(jīng)一定時間形成免疫復(fù)合物，液體混濁。用濁度計測量反應(yīng)體系的濁度，可繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線并依據(jù)濁度推算樣品中抗原含量。三、滾補(bǔ)體求參與傘的反鐘應(yīng)溶菌反應(yīng)細(xì)菌嫩與相爪應(yīng)Ab結(jié)合餅，可杏激活癥補(bǔ)體豈，使盤細(xì)菌奸溶解堂。主醉要發(fā)央生于毒霍亂泉弧菌丘等G+菌，慰可用廊于細(xì)糟菌鑒鎮(zhèn)定。溶血反應(yīng)紅細(xì)約胞與妖相應(yīng)岡抗體銳結(jié)合筋，通改過激遲活補(bǔ)限體使蓋紅細(xì)鳳胞溶勞解，邀可作襲為補(bǔ)照體結(jié)默合試蒸驗的亮指示沙系統(tǒng)榆。補(bǔ)體杜結(jié)合反妨應(yīng)是一巧種在迫補(bǔ)體牌參與護(hù)的條姻件下哭，以蒜綿羊馬紅細(xì)斧胞和蠻溶血可素作恭為指濾示系拼統(tǒng)來光測定拌有無養(yǎng)相應(yīng)醒抗原距或抗濫體的纖血清斑學(xué)試獵驗。第二遲節(jié)拳免承疫標(biāo)示記技寶術(shù)免疫娘標(biāo)記送技術(shù)（Im哪mu巧no蒼la紀(jì)be轉(zhuǎn)ll如in任gte別ch畢ni郵qu即e）概念俗：用熒室光素訴、同鼻位素釘或酶貸等示串蹤物賓質(zhì)勵標(biāo)記搭抗體膚（或滴抗原矛）進(jìn)涂行抗性原-抗體笨反應(yīng)擾。標(biāo)信記物蜘質(zhì)未員改變涌抗原除抗體遞的免食疫學(xué)確特性標(biāo)，同掌時標(biāo)柿記物禾極大正的提谷高了棋反應(yīng)悔的靈第敏度冒，可續(xù)以對溪微量如物質(zhì)天進(jìn)行枕定量紀(jì)、定鑼性或怠定位尚檢測昆。免疫樹標(biāo)記素技術(shù)圍主要五有三量種基鹽本類酸型：免疫捉熒光得技術(shù)、免疫槐酶技攤術(shù)和同位密素標(biāo)撓記技環(huán)術(shù)。熒光恩素乳：異穩(wěn)硫氰蠶酸熒軌光素越（黃戴綠色親熒光假）、施藻紅獲蛋白眠、兼羅丹灣明（舌紅色漢熒光徒）放射廁性同騎位素菠：12扒5I、13跳1I酶：叼辣根僵過氧軌化物糕酶、名堿性延磷酸癢酶免疫疲熒光粗檢測彎法（IF蘇A）放射寇免疫偏檢測復(fù)法（RI燃A）酶免蹦疫檢均測法得（EI證A）1．抗識體制億備。多克始隆抗旺體單克城隆抗部體，2．標(biāo)戚記物冊與標(biāo)蘆記方滲法。放射篩性同叔位素飽、酶寫、熒孩光分帆子、貨化學(xué)細(xì)和生珠物發(fā)辨光系繳統(tǒng)。免疫勉分析繭基本圣環(huán)節(jié)3．分劇析方芽式設(shè)糧計：非競行爭方棍式、脆競爭星方式霧；娛直接蛛法、租間接答法；廁標(biāo)逢記抗?jié)苍?、裕?biāo)記侄抗體法；垃均相億、非若均相4.信號火檢測恒。與相邁應(yīng)的享標(biāo)記鞋物對許應(yīng)。規(guī)主要嘗為分棵光光盯度法聲、雪熒光斜光度征法、哲化學(xué)坑發(fā)光具檢測市法。一、抹免疫螞熒光揀法(im端mu做no距fl嶺uo灘re武sc歐en形ce檢,I然F)概念臣：熒光出素標(biāo)動記的抗風(fēng)體（蹈抗原擇）與輝組織柄或細(xì)溜胞中騾的相叼應(yīng)抗條原（敘抗體骨）結(jié)縣合，臉借助丘于熒光輪顯微壘鏡或流式牙細(xì)胞丑儀對抗東原（認(rèn)抗體謹(jǐn)）進(jìn)孝行鑒蹈定或令定位蛛。（1）直類接熒濾光法烘：熒光當(dāng)素直寸接標(biāo)泉記抗?fàn)旙w，與對標(biāo)莫本進(jìn)旁行檢果測。該法刃優(yōu)點吩是特大異性穗高，殺缺點殺是檢回查任尋一抗螞原均源須制鼻備相鏡應(yīng)熒奔光抗填體。（2）間沫接熒顆光法猶：用一當(dāng)抗與狼標(biāo)本朽中抗姜原結(jié)拴合，象再用冬熒光簡素標(biāo)括記的倍二抗頸進(jìn)行華檢測旦。該法董優(yōu)點跡是敏穴感度太比直交接法課高，撈制備餅一種坡熒光性素標(biāo)尊記的求二抗但即可旁用于緒多種尋抗原不的檢抖測,但非協(xié)特異窯性反塔應(yīng)亦幫增強(qiáng)華。免疫盯熒光箏法分浮類免疫邊熒光默法圖蘆示Mo曬us爭e牧ki夕dn頃ey氧s昨ec瓜ti燭onLa準(zhǔn)mi阿ni驗n-常gr某ee疾n-鍵fl恭uo自re呢sc結(jié)en吩tQd慌ot?笛56拳5Ig伍GCD鄉(xiāng)豐31備-炮re陷d-銹fl寫uo粥re遺sc用en鐵tQd午ot?角65爆5Ig采GNu別cl再ei再-賓b滔lu焰e-逮fl揪uo乞re毯sc鉛en雹t子Ho椅ec霧hs趟t票33炕34芹2Co銅nt切ro坦lTS于LPTS蜜LP傻-Al壁ex故aF斜lu趁or?稀48盆8Nu嘩cl短ei拍-pr富op靜id衫iu炒mio冒di悶deHA膜SM光C流式壩細(xì)胞申術(shù)（Fl貞owCy霞to港me傳tr卸y,炎FC嫁M)概念呈：FC護(hù)M是將紙免疫唐熒光廉技術(shù)促應(yīng)用風(fēng)于流若式細(xì)鋸胞儀此，對極單個糕細(xì)胞版的表斗面標(biāo)震志（判抗原勾或受張體）葬進(jìn)行擱快速架、精庫確的昆分析鬼和自憂動檢彎測，省并將昆不同獄類型薄的細(xì)槐胞分勝選收域集。FC護(hù)M還可消對同睜一細(xì)萌胞的預(yù)多種喂參數(shù)艙（如DN精A、臘RN阿A、蛋白鈔質(zhì)和支細(xì)胞螞體積盾等）板進(jìn)行吃多信腳息分抱析，下為當(dāng)塵代生司命科浙學(xué)研愉究領(lǐng)祖域中爺廣泛流使用釀的一鼓項新悼技術(shù)蘭。流式壇細(xì)胞江儀的責(zé)細(xì)胞械分析艙原理待測庫細(xì)胞框被制傻成單椒細(xì)胞斧懸液裳，經(jīng)該特異鋼性熒企光染姜料染讀色后估加入晚樣品產(chǎn)管中窄，在胸氣體育壓力訪推動容下進(jìn)卵入流揉動室橋。流動雖室內(nèi)荷充滿菠鞘液攝，在永鞘液偏的約龍束下循，細(xì)遙胞排堪成單櫻列出獎流動唇室噴游嘴口曉，并拋被鞘林液包納繞形嚷成細(xì)伯胞液遙柱，去進(jìn)入姻流動節(jié)室。被熒艦光染相料染浙色的昨細(xì)胞扭受到岔強(qiáng)烈塌的激滿光照密時后撐發(fā)出罷熒光糧，被石熒光蔬光電攤倍增犯管接坦收，閘實現(xiàn)演了細(xì)慣胞的包定量逃分析蓮。再通扛過流跪束形蠟成含麥有細(xì)杜胞的父帶電贊液滴耽而實耽現(xiàn)了驕細(xì)胞堡的分乖選。流式逝細(xì)胞美儀工塵作原準(zhǔn)理二、辱酶免刃疫測于定(e刻nz啦ym寫e醉im完mu俗no爆as植sa桶y,漠E圣IA明)概念項：是用抗酶標(biāo)沒記的綠抗體廣進(jìn)行昨的抗賓原抗彼體反給應(yīng)。答將抗瞞原-抗體廁反應(yīng)介的特飲異性體與酶喜催化鉤作用虎的高撐效性沿相結(jié)舞合，歲借助漫酶作質(zhì)用于吸底物弄的顯判色反駛應(yīng)判轉(zhuǎn)定結(jié)弓果。常用測的酶跡為：陸辣瞇根過愛氧化兆物酶酸（HR饑P）、葉堿性零磷酸斜酯酶另（AP）酶底物顯色反應(yīng)測定波長辣根過氧化物酶鄰苯二胺（OPD）

3、3‘二氨基聯(lián)苯胺（DAB）

氨基水楊酸

鄰聯(lián)苯甲胺

2,2‘-連胺基-2(3-乙基-并噻唑啉磺酸-6)銨鹽橘紅色

黃色

棕色

蘭色

藍(lán)綠色492460449

425

642

堿性磷酸酯酶4-硝基酚磷酸鹽(PNP)

萘酚-AS-Mx磷酸鹽+重氮鹽黃色

紅色400

500葡萄糖氧化酶ABTS+HRP+葡萄糖

葡萄糖+甲硫酚嗪+噻唑蘭黃色

深藍(lán)色405420β-Ｄ-半乳糖苷酶甲基傘酮基半乳糖苷(4MuG)

硝基酚半乳糖苷(ONPG)熒光

黃色360,450

420常用墨的方捕法如躁下：（1）酶輩聯(lián)免解疫吸爭附試五驗測定碌可溶救性抗剩原或后抗體（2）免察疫細(xì)獵胞或尿組織風(fēng)化學(xué)測定犬組織茂中或串細(xì)胞話表面躺的抗挪原1.免疫平細(xì)胞捉或免晝疫組邁化技粘術(shù)概念呀：應(yīng)用酶標(biāo)俘記的抗河體與組織泄或細(xì)艙胞抗更原發(fā)生端反應(yīng)央，結(jié)合拳形態(tài)押學(xué)觀孔察，對僵組織挪或細(xì)拳胞表巷面抗閘原進(jìn)犬行定彼性、配定量犯、定而位。IC忘CIH樸C2.酶聯(lián)訊免疫是吸附幟試驗(e鴿nz符ym龜e社li蟲nk僑edim絨mu純no后so役rb額en猶tas此sa過y，EL扭IS愛A)基本駁原理斬：是將落過量酷抗體聞（抗腸原）解包被愁于載錢體（聚謹(jǐn)苯乙遷烯微出量反批應(yīng)板踐）上，晶通過舅抗原李抗體壯反應(yīng)躁使酶拾標(biāo)記扒抗體宮（抗羽原）疏也結(jié)瀉合在若載體乎上，錘經(jīng)洗猶滌去壯除游被離的蒸酶標(biāo)遺記抗東體（必抗原諒）后啦，加盤入底賣物顯笛色，年定性盤或定董量分媽析有精色產(chǎn)肥物確戰(zhàn)定待采測物課的存循在與年含量胖的檢肅測技撲術(shù)。是酶宣免疫資測定剖中應(yīng)娘用最此廣的攪技術(shù)倆，用編于測定物可溶惰性抗冰原或們抗體兼。EL率IS旁A試劑久盒1.雙抗域體夾師心法用于壇檢測只特異脅性抗攔原。方法賴：將已家知抗東體吸濕附于浪固相登載體每．加追入待寧檢標(biāo)要本(含相挪應(yīng)抗俯原)與之笨結(jié)合矩。溫丙育后包洗滌飄，加免入酶叉標(biāo)抗利體和園底物吼進(jìn)行滴測定假。該試杏驗所殃用的住包被壟抗體削與酶訓(xùn)標(biāo)抗浴體應(yīng)奸分別設(shè)針對迫不同經(jīng)抗原治決定趟基，展或其煉中之意一用徑多克蛋隆抗刮體，披且相奶互間倉應(yīng)無跨交叉軍反應(yīng)頂。2.間接深法用于支檢測檔特異憐性抗垃體。方法?。簩⒁鸭Z知抗歡原吸甜附于而固相括載體壓，加暈入待沖檢標(biāo)深本(含相戚應(yīng)抗痛體)與之吳結(jié)合口。洗進(jìn)滌后禽，加堆入酶西標(biāo)抗諒球蛋著白抗垂體(酶標(biāo)?？箍共骟w)和底磚物進(jìn)綁行測油定?？乖豢苟股锼豀R靈P親合揮素＋3.競爭法用于衛(wèi)抗原誰和半針抗原酬（抗結(jié)原決噴定簇坊少）歸的定石量測禍定，幸也可川用于酸測定刪抗體津。方法擱：以測師定抗倒原為溫例．嘴將持冬異性田抗體某吸附撒于固錘相載考體；巡壽加入督待測閥抗原能和一污定量附的酶交標(biāo)已請知抗劉原，界使二噴者競隙爭與從固相仙抗體有結(jié)合惕；經(jīng)懼過洗姐滌分切離，蜘最后外結(jié)合遲于固起相的否酶標(biāo)斷抗原蹦與待田測抗鍬原含縱量呈貸負(fù)相鄭關(guān)。EL徑IS些A反應(yīng)射過程動畫甩演示A.用已參知抗搏原檢獨測分洗泌性別特異漲性抗拾體的B細(xì)胞B.用抗勵細(xì)胞封因子旋抗體伙檢測定細(xì)胞遣分泌莫的細(xì)叨胞因麥子4.酶聯(lián)舟免疫俗斑點介試驗EL醫(yī)lS照A方法認(rèn)的技蹈術(shù)要郊點I與固怨相載任體結(jié)六合的始抗原扛或抗士體稱屠為免穿疫吸芒附劑簽。將丑抗原鋒或抗糞體固狗相化侍的過羞程稱腹為包滾被(c修oa懂ti啊ng頌)，由于兔載體假不同已，包答被的若方法她也不沒同。使用衡聚苯問乙烯回制品源為載聽體一壓般多磨采用捐物理副吸附因法。珠除載滴體的霉理化升性質(zhì)域外，離受緩爐沖液事的離欄子強(qiáng)務(wù)度、pH值、霉包被詞時的揉溫度丸和時放間等職多種斬因素限的影培響。用抗狂原或釣抗體晉包被否后。細(xì)固相艘載體兵表面稠往往摸尚殘享留少含量未特飽和叔的吸沃附位窯點，秩產(chǎn)生諷非特漫異吸委附，檢導(dǎo)致榜本底素偏高箭。為薄此．墳常用1％—5％BS翠A，或含5％—2孩0％小浙牛血間清的PH慰9.描6碳酸角鹽緩權(quán)沖液臟注滿丈凹孔達(dá)，37緩℃作用1h，可以料消除因此種唉干擾區(qū)。這竟一過廉程稱遞為封隊閉(b族lo奧ck廟in籃g)。固相眼載體婆和免唯疫吸庫附劑塊的制僵備EL彼lS銹A方法圣的技益術(shù)要余點II抗原只和抗遭體用于塵制備找酶標(biāo)駱記物椒和包奪被固岔相載龍體的搏抗原殿要求艘純度新高，改抗原鐮性完丈整；那抗體短需特笨異、躲效價衰高、蚊親和呀力強(qiáng)推，并孫具有襖較高首的比勾活性昂。如將困抗體Ig懂G用木吳瓜蛋枕白酶代水解貫為Fa脹b片段貌，再候與酶扇連接遼，可煎以減古少非肌特異偽性吸竿附，如檢測揚(yáng)效果暫更佳困。Mc健Ab的應(yīng)絨用，有進(jìn)一臨步提丘高EL盜IS值A(chǔ)法的喂特異捐性和販靈敏濾度。版使用先針對小抗原軍分子奴中不撕同決拒定簇內(nèi)的兩戀種Mc窯Ab分別榮作為欄固相邁抗體贏和酶翠標(biāo)抗?jié)O體用遮于雙啦位點半夾心液法，醫(yī)簡化附了操賀作程滾序。通常轎采用郊特異皮性較斬高的Mc球Ab作為代固相加包被占抗體壯，與界酶標(biāo)趙記的識多克弄隆抗浙體相祥結(jié)合逼進(jìn)行汗檢測病，結(jié)朱果更姥為滿擊意。在EL早IS哨A法中隱，用噸于標(biāo)數(shù)記抗歸體或蜓抗原膊的酶企與免洽疫酶吵組織展化學(xué)萌技術(shù)昏基本透上相爬同。厲但所清用底容物被概酶裂察解后軟，應(yīng)溉能生低成可叛溶性應(yīng)有色銳產(chǎn)物澆，適疊合用工分光礙光度禽計(酶標(biāo)抽儀)測量撐光密黑度值群，籍文以定種量測矮定樣叉品中獎待撿哀抗原鋪或抗原體的跌含量很。EL獻(xiàn)lS度A方法壞的技耀術(shù)要撇點II象I常用洞的酶企及其微底物辣根番過氧息化物敬酶(HR添P)OP舅D,絡(luò)T撿MB堿性名磷酸屑酶(AP花)PN絲式P半乳描糖苷如酶(Ga艘l)NP給G葡萄巧糖氧寫化酶(GO厲P)PA哈P三、賭放射是免疫陵測定矛法(R即ad斗io示im縮慧mu肉no攜as魂sa址y,威R稼IA檔)概念曾：是用逐放射位性核日素標(biāo)誼記抗奇原進(jìn)勉行的儀免疫悠學(xué)檢蹤蝶測技腦術(shù)。泛它將園放射飼性核掏素顯陸示的西高靈嘩敏性茂和抗法原抗蜓體反燥應(yīng)的韻特異品性結(jié)狂合，舅使檢肌測的麻敏感悼性達(dá)pg水平塊。常儀用于害標(biāo)記均的放柴射性斗核素瞇有I1燈25和I1籍31。常用籃于胰源島素橋、生寺長激猴素、磨藥物關(guān)等微倦量物犯質(zhì)的鈔測定英。結(jié)合蘇相游離續(xù)相基本基原理怎：RI月A是標(biāo)記似抗原和未標(biāo)貓記抗班原對有限庸量抗傾體的競利爭性謝結(jié)合溝。

Ag*AbAg標(biāo)記抗原特異性抗體待測抗原(Ag*-Ab)+(Ag-Ab)抗原抗體復(fù)合物分離Ag*-Ab和游離Ag*從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀知含量測定Ag*-Ab和/或游離Ag*放射性示意株圖RI團(tuán)A法原化理及堅標(biāo)準(zhǔn)紫曲線75503010011010煌010味00未標(biāo)糾記抗握原濃深度（ng/m押l)結(jié)合蹤蝶/未阻結(jié)合疤的放努射活捎性（欠%）四、繼化學(xué)炊發(fā)光辦免疫拔分析概念瞞：將發(fā)光技物質(zhì)紫（如即吖啶軟酯、商魯米冷諾等滔）標(biāo)記去抗原接或抗駱體，愚發(fā)光雜物質(zhì)婚在反宇應(yīng)劑雙（如浩過氧義化陰壓離子裂）激積發(fā)下朝發(fā)射頂光子嘆，通莖過自扮動發(fā)柱光分鏟析儀地測定興光子快產(chǎn)量敏，可物反映盜待檢側(cè)樣品詢中抗凡體或軌抗原懷含量外。該法零靈敏自度高福，常漫用于裕檢測墓血清鹽超微曾量活找性物在質(zhì)（缸甲狀藍(lán)腺素滲等激鴉素）尋。靈敏品，無慕污染漏，可姥用于戴替代竭放射哨免疫多。五、水免疫腳膠體盞金標(biāo)儲記技旬術(shù)(im混mu兵no只go葬ldla織be撤li違ng貝t味ec殘hn伏iq宴ue桑)概念借：是以膠體府金作為婆示蹤枯標(biāo)記搞物，仇應(yīng)用罷于抗計原抗創(chuàng)體反艷應(yīng)的噸一種憂免疫親標(biāo)記纖技術(shù)剃；膠駝體金嗚是由練氯金軍酸在贏還原甲劑如蜜白磷兵、抗吹壞血德酸、絕枸櫞掘酸鈉甜和鞣納酸等乳作用鉆下，住聚合敢成特泊定大擔(dān)小的輝金顆順粒，乒并由婚于靜習(xí)電作肆用成怒為一雪種穩(wěn)匙定的毯膠體膚狀態(tài)伍，故呆稱為稠膠體衰金。電鏡似：高電微子密嫌度試紙馳：膠體脖金的呢光散失射性堵與溶蹄膠顆江粒的擊大小婚密切利相關(guān)也，危顆粒米大小滴發(fā)生謀變化逝，光彈散射源也隨庸之發(fā)購生變暫異，越產(chǎn)生彈肉眼錯可見匆的顯擴(kuò)著的騎顏色躬變化餡。膠體公金是厘氯金科酸(H榜Au康Cl4)的水絨溶膠陰顆粒逐，具妻有高僅電子彼密度待，在半電鏡橋中顆程粒致謊密，碼易于稿辨認(rèn)圣，定質(zhì)位比文酶反淋應(yīng)物擦精確言。膠體原金標(biāo)報記舉例徒：膠造體金淋試紙逗檢測睜尿HC搭G早孕嶼尿試紛紙條之：兩條魄杠，檢奏測迅橫速，臘靈敏壯度高1）干滲燥試抄紙條膠體望金免持疫快醒速檢憶測HC比G原理2）加延樣1.雙抗廁體夾陡心法-大分討子抗匙原3）反藥應(yīng)和擁遷徙4）陽劍性結(jié)述果：置兩條鏈紅線5）陰晴性結(jié)吹果：博一條扎紅線膠體墓金免調(diào)疫試把紙構(gòu)漿造六、穿免疫臟印跡見技術(shù)免疫分印跡(im損mu稍no恩bl堅ot鉆ti襖ng)又稱柴蛋白廉質(zhì)印銀跡(W展es邪te抓rn齡b舞lo洋tt忌in聰g)，是一馬種借勉助特軟異性描抗體伏鑒定含抗原焦的有工效方孝法。凝膠勝電泳防和固幅相免殊疫測士定技自術(shù)將含壓有目濃標(biāo)蛋淋白(抗原)的樣籮品首盡先用SD宴S-聚丙冰烯酰貝胺凝男膠電查泳(S永DS容-P為AG嘩E)或非瘦變性劣電泳(N惰at拾iv補(bǔ)e-獄PA諸GE率)等分繡離后甚，通懶過轉(zhuǎn)堆移電捷泳原飄位轉(zhuǎn)糠印至匹硝酸抬纖維環(huán)素膜錦或其載它膜族的表煌面，展然后程將膜佛表面禽的蛋特白質(zhì)湯再用神抗原稱抗體畢反應(yīng)爐進(jìn)行昂特異揀性檢雜測。We宵st傘er派n巨bl守ot眼m靜et臣ho蘭d包括5個步濟(jì)驟：1)固定拳：蛋險白質(zhì)嚷進(jìn)行媽聚丙獲烯酰米胺凝戴膠電撿泳(P欄AG箱E)并從避膠上忌轉(zhuǎn)移揮到硝暗酸纖采維素鉗膜上繡。2)封閉著：保粱持膜帆上沒雙有特杏殊抗眠體結(jié)仇合的僻場所始，使洽場所眨處于譯飽和嗽狀態(tài)鄭，用址以保塞護(hù)特惑異性鋼抗體添結(jié)合次到膜場上,并與拾蛋白澤質(zhì)反加應(yīng)。3)初級欺抗體(第一稈抗體)是特湊異性暫的。4)第二次抗體濫或配代體試溝劑對父于初勝級抗叛體是通特異先性結(jié)繼合并甚作為鹽指示亦物。5)適當(dāng)排保溫掃后的翁酶標(biāo)贈記蛋協(xié)白質(zhì)鳥區(qū)帶添，產(chǎn)于生可屆見的曲、不漫溶解藥狀態(tài)炎的顏他色反念應(yīng)。第三辭節(jié)晨檢測學(xué)淋巴餃細(xì)胞賤及其猜功能宰的體傍外試統(tǒng)驗單個刮核細(xì)題胞的昏分離淋巴學(xué)細(xì)胞頁亞群旗的分董離T細(xì)胞停功能估檢測B細(xì)胞來功能憂檢測種類免疫控細(xì)胞變及其糧亞類分離奸、鑒陡定和證檢測淋巴湖細(xì)胞理功能喬測定T細(xì)胞尼的鑒靈定和歡檢測B細(xì)胞崖的鑒叮定和丸檢測一、賀免疫橋細(xì)胞膀及亞筍類分豈離、拒鑒定員和檢提測（一勺）外騰周血恰單個淡核細(xì)塞胞的卻分離葡聚瓦糖-泛影偵葡胺此（又拐稱淋累巴細(xì)無胞分都離液山）：墾密度腰梯度逼離心抬法淋巴細(xì)胞分離液血小板淋巴細(xì)胞分離液淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞紅細(xì)胞和粒細(xì)胞1.0301.0751.075-1.0901.090-1.092各細(xì)狀胞與好分離拔液的悅密度進(jìn)一哨步純莖化淋喇巴細(xì)鑼胞，獎鋪于片培養(yǎng)登皿上星，由偽于單貸核細(xì)終胞易閑與玻悲璃黏紫附而晚滯留老于平裕皿表鳳面，錯未吸僵附的亦細(xì)胞魄即主遞要是鈔淋巴參細(xì)胞暑。（二況）淋尤巴細(xì)組胞亞定群的枝分離尼龍脂棉分離宴法E花結(jié)分離朽法洗淘吹法流式細(xì)胞熱術(shù)混合騙單個夢核細(xì)拼胞懸剛液在賀通過稿尼龍忘毛柱茄時，B細(xì)胞縣、漿原細(xì)胞寨、單愁核細(xì)船胞被德選擇鋪性粘宇附于卡尼龍否毛上返，多愉數(shù)T細(xì)胞袋則通勒過尼狗龍毛虛柱人T細(xì)胞貸與SRBC結(jié)合燒形成E花結(jié)汁，經(jīng)犬密度值梯度棋離心蘆，花瞇結(jié)形麥成細(xì)展胞沉唯于管購底；賓用低鉤滲裂芝解花閥結(jié)中框的SR本BC即獲兆得T細(xì)胞停。將已急知抗買特定控標(biāo)志帝的抗萍體包快被培佛養(yǎng)板酒，加統(tǒng)入淋謙巴細(xì)含胞懸文液，籃相應(yīng)芳的細(xì)竭胞即含結(jié)合朋于培銜養(yǎng)板竹表面刊，與崗懸液微中的臣其他求細(xì)胞忘分離喂。借助川熒光垮活化距細(xì)胞蛙分類嗓儀對偵細(xì)胞遇快速則鑒定慰和分但類、呼并進(jìn)焰行多餅參數(shù)驚定量怖測定卵和綜恩合分敬析的招技術(shù)個。磁分叔離技術(shù)將特么異性購抗體跪與磁麥性微添粒交之聯(lián)，閃與表稼達(dá)相獎應(yīng)膜機(jī)抗原秤的細(xì)鄭胞結(jié)恐合，洋應(yīng)用穴強(qiáng)磁居場分錘離所暖吸附母的細(xì)償胞，榨從而梳對特廣定的杰細(xì)胞普進(jìn)行研分選1、E玫瑰脈花環(huán)曠形成給試驗（三六）T細(xì)胞顯及其裝亞群沫的鑒覆定和背檢測可用浮于T細(xì)胞輔的鑒船定和隊檢測聽。綿羊殊紅細(xì)毀胞+人外鈔周血筍淋巴既細(xì)胞4℃1~占2h花環(huán)壓樣細(xì)縣胞集跟團(tuán)正?；鹑送猱€周血攝中E玫瑰閃花環(huán)憐形成碌細(xì)胞舒占淋稱巴細(xì)嬌胞總販數(shù)的60狼~8懇0%。T細(xì)胞CD2/E受體SRBC/綿羊紅細(xì)胞（三換）T細(xì)胞毛及其臉亞群趕的鑒鴿定和錄檢測2、T細(xì)胞若單克坦隆抗心體對T細(xì)胞淡及其丹亞群扔的鑒歲定和涌檢測所用糟的Ab主要坡有：CD3Mc礦Ab、CD4Mc雙Ab和CD8Mc聽Ab。方法駛：免喚疫熒丸光間鴉接法感。外周淚血淋姨巴細(xì)倆胞+分別牧用小坡鼠抗瀉人CD3、CD4、CD8Mc已Ab（第一Ab）+熒光炒素標(biāo)息記的兔抗塌小鼠Ig讓G抗體（第拆二Ab）→阻熒光涼顯微孝鏡觀項察。小鼠抗人McAb熒光標(biāo)記的兔抗小鼠IgG抗體（三雞）T細(xì)胞匯及其塘亞群月的鑒序定和稻檢測2、T細(xì)胞孕單克撐隆抗莊體對T細(xì)胞旁及其起亞群懸的鑒上定和犬檢測結(jié)果捕：（1）被CD3Mc全Ab著染記熒光灘的細(xì)喊胞是談總T細(xì)胞遷。包括引：TH、TH1、TH2、TC、TS細(xì)胞擴(kuò)。（2）被CD4Mc史Ab著染膏熒光健的細(xì)掉胞是TH、TH1、TH2（3）被CD8Mc徑Ab著染源熒光界的細(xì)峰胞是TC、TS細(xì)胞窮。計數(shù)翁：10抱0～20墳0個淋漫巴細(xì)岸胞，庭計算擺出染食陽性殖細(xì)胞技百分紹率：CD3T細(xì)胞謹(jǐn)占65～80陽%。CD4T細(xì)胞后占50喪~6床0%。CD8T細(xì)胞私占20友~3賽0%，CD4T細(xì)胞幕與CD8T細(xì)胞藥比值價約2：1。Sm忘Ig涌M/D是B細(xì)胞掘表面特有的標(biāo)勾志。服通過宵對該窄種標(biāo)趁志的據(jù)檢測祥，可翅對B細(xì)胞厘進(jìn)行管鑒定甲和檢碰測。方法窄：免疫杜熒光惱直接踩法。熒光素素標(biāo)歲記的趕兔抗辭人Ig谷M/D抗體+外周友血淋橫巴細(xì)恢胞→直污接免無疫熒園光染樸色。著染濤熒光辰的細(xì)郊胞--范--爬--卸-B細(xì)胞佳。占淋撈巴細(xì)廉胞總補(bǔ)數(shù)的8~犯12速%。（四癥）B細(xì)胞益鑒定艘和檢贊測兔抗人IgM/D抗體二、鴿淋巴駕細(xì)胞澇功能霞測定1、淋比巴細(xì)碌胞轉(zhuǎn)鞏化試傻驗2、細(xì)斃胞毒忍性試徹驗（LM澆C-廢T）T細(xì)胞條功能答檢測1、溶血橡空斑暢試驗2、定量塔溶血袋分光依光度汗測定覽法B細(xì)胞浸功能迫檢測1、淋狡巴細(xì)謊胞轉(zhuǎn)森化試禿驗原理乎：T細(xì)胞特異勇性Ag或有池絲分飲裂原淋巴對母細(xì)下胞（體洲積更嗚大、議代謝齡旺盛晴）根據(jù)表其轉(zhuǎn)藍(lán)化程趙度和界轉(zhuǎn)化頌率，鄉(xiāng)豐測定負(fù)機(jī)體毅細(xì)胞項免疫蓋功能因狀態(tài)（1）非蔥特異紛性轉(zhuǎn)犬化試動驗（2）特膀異性輩轉(zhuǎn)化閱試驗（一亮）T細(xì)胞稈功能供檢測T細(xì)胞植物喉血凝稿素（PH削A）或刀雖豆蛋谷白A（Co盈n既A）淋巴粒母細(xì)抱胞。（有晚絲分否裂原約）正常歷人T細(xì)胞嚴(yán)轉(zhuǎn)化咽率約竿為70渠%。（1）非拐特異盆性轉(zhuǎn)播化試日驗1、淋轉(zhuǎn)巴細(xì)肺胞轉(zhuǎn)央化試筋驗（一述）T細(xì)胞任功能獅檢測原理埋：T細(xì)胞特異漁性抗測原（慢如結(jié)