【幽門螺桿菌免疫學抗體檢測方法研究綜述4500字（論文）】

幽門螺桿菌免疫學抗體檢測方法研究綜述目錄TOC\o"1-2"\h\u13739幽門螺桿菌免疫學抗體檢測方法研究綜述 17772摘要 1154001引言 1112852免疫學抗體檢測方法 2198502.1免疫印跡技術 2281392.2膠乳免疫比濁法 3136302.3膠體金法 34642.4酶免疫法 383552.5臨床應用 4128033小結 5522參考文獻 6摘要幽門螺桿菌（helicobacterpylori，HP）是慢性胃炎，胃癌等的主要致病病因，HP感染是常見的一種全球性和廣泛傳播的疾病，我國一直都是幽門螺桿菌的高感染和胃癌的高發(fā)國家，其感染造成了巨大的經(jīng)濟負擔，WHO已經(jīng)將HP列為胃癌的頭號致癌因子。因此選擇合理的檢查方法，給患者提供可靠的檢查結果，進行有效的治療，阻斷炎癥，潰瘍進一步向惡性腫瘤發(fā)展，具有臨床價值。本文就HP免疫學抗體檢測的方法、應用和優(yōu)缺點進行綜述。關鍵詞：幽門螺桿菌；臨床價值；免疫學抗體檢測1引言幽門螺桿菌（helicobacterpylori，HP）是人類胃部疾病的重要致病菌之一，與胃潰瘍、慢性胃炎、胃癌及十二指腸潰瘍的關系較為密切[1]，幽門螺桿菌是一種革蘭陰性致病菌，全球有超過50%的人感染了H.pylori，在一些社會經(jīng)濟不發(fā)達的地區(qū)，感染率已超過總人數(shù)的一半ADDINNE.Ref.{3EDD8628-D001-4822-8878-5DEAFB0433DA}[2]。胃內(nèi)局部pH值可達到0.9-1.8，但H.pylori依然可存活、定殖和繁殖。主要原因如下：幽門螺桿菌產(chǎn)生尿素酶（Urease），分解尿素產(chǎn)生氨氣能夠中和胃的酸性環(huán)境ADDINNE.Ref.{705235D9-2BB9-4FD7-A8A0-FD28A72AC6C5}[3]；H.pylori借助鞭毛在胃中自由游走逃避宿主的免疫攻擊，或者阻礙了先天性免疫功能和適應性免疫ADDINNE.Ref.{C9F21090-5AFD-48D2-9D24-A2DF13AADCCC}[4-6]應答NE.Cms_Insert；另外，細胞毒素相關蛋白A(cytotoxin-associatedgeneA，CagA)、空泡毒素A(vacuolationassociatedgeneA，VacA)和γ-谷氨酰轉肽酶（γ-glutamyltranspeptidase，GGT）還可以誘導樹突狀細胞發(fā)生免疫耐受，抑制T細胞的增殖和信號轉導導致細胞凋亡，使H.pylori免受T細胞的攻擊ADDINNE.Ref.{94BBC543-F01A-4386-B34C-DCA9B3662B3A}[7]。幽門螺桿菌感染導致人體胃消化不良，患萎縮性胃炎、腸化生、消化性潰瘍，甚至胃癌等疾病ADDINNE.Ref.{A26EBA53-0044-44CB-8D7F-32EC9FC5AF14}[8，9]。除了胃內(nèi)消化性疾病之外，H.pylori還會導致一些胃外疾病，比如神經(jīng)疾病阿爾茨海默癥ADDINNE.Ref.{8C45201D-84AD-4F8E-A865-C70256D941BF}[10]、血液疾病免疫性血小板減少癥ADDINNE.Ref.{AAD2EFEA-EB28-42B3-AC0E-9204260E07E5}[11]、肝膽疾病酒精性脂肪肝ADDINNE.Ref.{B21A0DD8-8B08-494B-99F0-1BCDB4B19394}[12]等。因此，根除H.pylori對于治療胃部疾病和其他與H.pylori相關疾病十分重要。目前臨床治療中H.pylori抗生素耐藥性不斷提高，甲硝唑、克拉霉素的耐藥性在亞洲高達99.5%、85.5%ADDINNE.Ref.{1AEB3BB1-F7F4-4396-82E2-1DFF71C917AA}[13，14]。隨著人們對HP的不斷研究，幽門螺桿菌的檢測方法也在改進與創(chuàng)新，并且在臨床上得到廣泛應用。根據(jù)HP檢測時是否需要從胃部取材，可以將檢測分為2類：侵入性檢測和非侵入性檢測[15]。侵入性檢測主要包括病理學檢測法、病原學檢測法；非侵入性檢測主要有免疫學檢測法、尿素呼氣實驗檢測法。從檢驗工作者和患者的感受來講，一般認為最好的方法是能簡便、快速、無創(chuàng)、還有準確測試的方法。因此，免疫學抗體檢測更易接受和采用且更有研究意義。2免疫學抗體檢測方法2.1免疫印跡技術免疫印跡技術（immunoblotting）免疫印跡是一種新的免疫化學技術。用聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS–PAGE）將HP中分子量大小不同的蛋白組份分離，得到的不同區(qū)帶與待檢血清中相應抗體相結合，通過顯色來判斷患者的HP感染情況。HP臨床分型一般將其分為兩類:即I型和II型。有研究顯示，HP分型檢測對臨床工作更有指導意義。若為I型感染，主張積極給予抗HP治療，若為II型感染，可不給予治療，隨訪后再觀察，避免了抗生素的濫用。臨床上使用于診斷HP感染的檢測方法很多，而免疫印跡法是非侵入性的診斷檢測方法，還因其具有敏感性高、特異性強、檢測方法簡單、時間短等優(yōu)勢，免疫印跡法檢測門診消化不良患者的HP感染簡便易行，同時在臨床上對抗HP的治療中也具有很好的指導意義[16]。免疫印跡法降低對檢查者的創(chuàng)傷，且檢查費用較一般常規(guī)方法更經(jīng)濟實惠，減輕了經(jīng)濟負擔，使檢測幽門螺桿菌應用率提高，從而有效避免其他疾病滋生。并用其他技術對菌株進行特性分析，可控制最佳治療效果及毒副作用，把握治療HP的明確方向。可以增強診斷效果，為臨床治療感染幽門螺桿菌提供指導方向，值得在臨床推廣[17]。2.2膠乳免疫比濁法膠乳增強免疫比濁法是將一定量的抗原或抗體標記到一定顆粒直徑大小的膠乳顆粒上，制備成膠乳溶液，與相應的抗體或抗原溶液混合后，會發(fā)生抗原抗體反應，形成一定的濁度，通過對濁度變化的檢測來判定抗體或抗原濃度的方法[18]。這是其他方法無法比擬的。有研究用膠乳免疫比濁法檢測HP抗體試劑的性能評價，得出其可用于全自動生化分析儀，，具有定量檢測、操作簡便、通量大、成本低等優(yōu)勢，適合體檢人群HP感染的篩查和大規(guī)模人群的流行病學調(diào)查。并且認為膠乳比濁法定量檢測血清胃HP抗體的準確性、線性、精密度、抗干擾等各性能指標均可以符合臨床檢測的要求[19]。而另一項試驗研究通過膠乳免疫比濁法與金標法和14C呼氣試驗分別對HP檢測，對其結果進行比對分析得知，乳免疫比濁法的檢測結果假陽性和假陰性率高，與尿素14C呼氣試驗檢測結果的一致性很不理想。該方法學敏感性較差，其方法學還有待改進[20]。這點與前一個報道不一致?？赡苁窃噭┑牟町?。2.3膠體金法膠體金法是檢測幽門螺桿菌抗體的方法，是利用先進的金標技術，用膠體金作為顯色劑或示蹤標志物，用于抗原抗體反應的一種新型的免疫標記技術。這種方法具有明顯的易操作、無痛并且可在加樣五分鐘內(nèi)顯示結果的快捷特點[21]。在有做過的試驗可以看出，在與胃鏡下的快速尿素酶試驗進行比較，膠體金法的HP陽性檢出率為65.71%，快速尿素酶試驗的HP陽性檢出率為67.14%，相比得到的P>0.05，差異不具有統(tǒng)計學意義，而且膠體金法檢測的敏感度為91.24%，特異性為89.76%，都明顯高于胃鏡下快速尿素酶試驗，因此膠體金法在檢測HP時具有很高的可靠性?？傊?，膠體金法檢測HP不僅具有很高的陽性檢出率，而且檢測所需時間短，操作無需專業(yè)人士，檢測無疼痛，更易于被患者接受，無禁忌使用的患者，具有可高的可靠性，非常適合臨床使用[22]。2.4酶免疫法酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）是用酶標記抗體，并將已知的抗原或抗體吸附在固相載體表面，使抗原抗體反應在固相載體表面進行，用洗滌法將液相中的游離成分洗滌，用最廣的技術。ELISA可以采集病人的血液、唾液、尿液及糞便等標本檢測抗體。有研究血清HP抗體ELISA檢測法的優(yōu)勢和有效性，通過對200例疑似HP感染患者均進行血清HP抗體ELISA檢測、14C-UBT法、嗜銀染色法檢測。其結果研究顯示，嗜銀染色法的Kappa值為0.915，14C-UBT法的Kappa值為0.853，血清HP抗體ELISA檢測法的Kappa值為0.882；三種檢測方法的特異度無明顯差異(P>0.05)，說明嗜銀染色法診斷HP陽性的一致性比其他兩種方法更佳，但三種檢測方法的一致性都為良好，并且都具有較好的特異度，則表明血清HP抗體ELISA檢測法、14C-UBT法都可以滿足臨床診斷HP陽性的需求。而血清HP抗體ELISA檢測法和14C-UBT法的操作更簡單，檢查費用較低，且不具有侵入性，但血清HP抗體ELISA檢測法在適用人群方面比14C-UBT法更好。在此研究中，嗜銀染色法與血清HP抗體ELISA檢測法的靈敏度無明顯差異(P>0.05)；血清HP抗體ELISA檢測法的特異度、靈敏度、準確度略高于14C-UBT法，但差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。且較多研究顯示，14C-UBT法中的14C會對人體和環(huán)境造成一定污染傷害，且對孕婦和嬰幼兒不適用，則說明選擇血清HP抗體ELISA檢測法的可行性更高[23]。因此應用血清HP抗體ELISA檢測法診斷HP感染具有較好的效果，靈敏度及特異度都較高，而且操作更簡便，無創(chuàng)傷性，患者更易接受。2.5臨床應用尿素呼氣試驗是目前最常用的HP感染診斷和用于根除效果評價方法[24]，敏感性、特異性、準確性高，且操作簡便、快速、無創(chuàng)傷，無交叉感染的風險。最大缺點是檢測費用貴，14C有放射性，會受抗生素影響出現(xiàn)假陰性，所以會受到檢測近期藥物影響HP免疫學抗體檢測因為抗體的持續(xù)存在和產(chǎn)生的時間，則存在著假陰性，HP抗體測定結果在治愈后也需半年才能轉為陰性，不能準確反映患者當時的HP感染情況，所以不能用于愈后療效評價[25]，抗體檢測陽性的不能區(qū)分近期感染或是既往感染。但臨床上可用于大批量人群初篩及流行病學調(diào)查，初篩陽性再行，呼氣試驗。3小結免疫學抗體檢測包括免疫印跡分型技術、膠體金法、酶聯(lián)免疫吸附試驗及膠乳免疫比濁法，檢測的抗體包括細胞毒抗體、空泡毒抗體和尿素酶亞單位A和B等抗原的抗體[26]，檢測的抗體是IgG，它反映了一段時間內(nèi)幽門螺桿菌感染的狀況，因為目前試劑盒檢測的準確性差異比較大，而且與其他細菌抗原有一定的交叉反應，所以可以出現(xiàn)幽門螺桿菌感染的假陽性。這些方法均具有較高的特異性和敏感度，無創(chuàng)性，操作簡單且檢測費用低，適合大批量檢測。其中免疫印跡法聯(lián)合分型能增強診斷效果；膠乳免疫比濁法能定量檢測，適合體檢初篩；ELISA可以選擇檢測抗體標本更多。有研究結果顯示，以13C-尿素呼氣試驗結果作標準，膠體金法聯(lián)合免疫印跡法評估HP感染的特異性、敏感性和陽性符合率都比單一使用膠體金法、免疫印跡法高，且與13C-尿素呼氣試驗結果的一致性較好[27]。但是在某些方面尚有值得商榷的地方:研究發(fā)現(xiàn)，某些檢測出HPI型抗體陽性的患者，其胃鏡和呼氣試驗并不支持患者現(xiàn)在患有慢性胃炎、消化性潰瘍和胃癌等胃腸道疾病。其原因可能是抗體的水平高低與患者本身的免疫力有關系，或既往感染HP經(jīng)治療后康復的患者，其體內(nèi)HP抗體仍為陽性，因為抗體含量下降緩慢，存在血液中長達1a-2a[28]，因此HP的抗體檢測不能作為HP現(xiàn)癥感染或是療效觀察的指標，須結合胃鏡或呼氣試驗的結果來臨床治療及判斷疾病的預后[29]。參考文獻[1]張永芬,昝學凱.消化系統(tǒng)常見疾病與幽門螺桿菌感染的關系探討[J].基層醫(yī)學論壇,2020,24(31):4468-4469.[2]HirukawaS,SagaraH,KanetoS,etal.CharacterizationofmorphologicalconversionofHelicobacterpyloriunderanaerobicconditions[J].MicrobiolImmunol.2018,62(4):2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