肺結(jié)核的新診斷技術(shù)

新診斷技術(shù)及其在NTP中的應用江蘇省結(jié)核病參比實驗室NTP中現(xiàn)行實驗室技術(shù)涂片：萋尼染色顯微鏡檢培養(yǎng)：固體培養(yǎng)基：簡單法、離心法藥敏：固體培養(yǎng)基：絕對濃度法、比例法菌種鑒定：鑒別培養(yǎng)基＋生化試驗傳統(tǒng)實驗室技術(shù)不能適應不斷深入的結(jié)核病防治工作的需要實驗室新診斷技術(shù)總覽細菌學檢測方法發(fā)光二極管熒光顯微鏡（LED）液體培養(yǎng)分子生物學檢測方法GenexpertHAINGenechip免疫學檢測方法ELISOPT&TSPOT和Quantiferon血清學診斷方法熒光比色(MIGIT)(MBBactAlert)RutheniumcomplexCO2pH液體培養(yǎng)BACTECTB460原理：標本經(jīng)前處理接種至含有14C-棕櫚酸的12B培養(yǎng)基，37C培養(yǎng)。分枝桿菌分解14C-棕櫚酸，產(chǎn)生14CO2，BACTECTB460儀自動檢測，14CO2含量，并換算成生長指數(shù)（GI）。優(yōu)點：快速：將分離培養(yǎng)的陽性檢出時間由常規(guī)培養(yǎng)所需的2-8周縮短至3-14天，將藥敏試驗的報告時間由常規(guī)方法的4周縮短至1周。操作簡便、靈敏度高，可進一步做藥敏試驗、菌種初步鑒定。缺點：放射性同位素污染。儀器與試劑價格昂貴。未實現(xiàn)全自動化污染率高原理：是BACTECTB460的換代產(chǎn)品。標本經(jīng)前處理后接種到系統(tǒng)配套的液體培養(yǎng)基，該培養(yǎng)基中包被有對氧濃度敏感的熒光物質(zhì)，當細菌生長代謝消耗培養(yǎng)基中的氧時，氧濃度降低，熒光被激發(fā)，系統(tǒng)可以連續(xù)檢測熒光水平，自動報告結(jié)果。優(yōu)點：系統(tǒng)進一步優(yōu)化，操作更簡便、自動化更強。解決了BACTECTB460的同位素污染問題。24小時連續(xù)檢測，有利于早期報告陽性結(jié)果。缺點：儀器與試劑價格更昂貴。未能解決高污染率的問題BACTECMGIT960

分枝桿菌生長指示管液體培養(yǎng)1CrucianiM,etal.JCM2004;42:2321-23252

Meanof14studiesinMGIT960=10.7%(2.0-30.0)[]=acceptablerange培養(yǎng)方法敏感性(95%CI)結(jié)果報告周期污染(%)涂陽涂陰羅氏培養(yǎng)0.76(0.73-0.79)22.333.7[3–5]MGIT9600.88(0.84-0.91)11.716.513.8-16.6210.7(2.0-30.0)[5–10]MGIT+羅氏0.92(0.87-0.95)MGIT7mlMGIT7mlMGIT7mlMGIT7mlMGIT7mlMGIT7mlMGIT7ml+SMGIT7ml+IMGIT7ml+RMGIT7ml+EGCSIRE0,8mlBACTECMGITSIRE補充劑每種藥物0,1ml轉(zhuǎn)移0,5ml

陽性MGIT培養(yǎng)物0,1ml

陽性MGIT培養(yǎng)物9,9ml

蒸餾水轉(zhuǎn)移

0,5ml插入BACTECMGIT960BACTECMGIT960TB–藥敏試驗S.I.R.E.LED顯微鏡發(fā)光二級管(LED)技術(shù)提供價廉、穩(wěn)定的光源壽命150,000h反復開關(guān)不影響壽命不釋放有毒氣體不需要暗室操作人員工作負荷減輕快速藥敏-商業(yè)化線性探針檢測（LPAs）

GenoType?MTBDRplus,HAIN檢測結(jié)核分枝桿菌復合群以及利福平、異煙肼耐藥相關(guān)的突變檢測XDR的試劑盒也已經(jīng)發(fā)布INNO-LipaRifTB檢測結(jié)核分枝桿菌復合群以及于利福平耐藥相關(guān)的突變大多數(shù)利福平耐藥的菌株同時也耐異煙肼WHO鼓勵使用的工具可使用涂陽痰標本和培養(yǎng)物進行操作快速、簡便易用，僅需基本PCR技術(shù)然而，價格比較昂貴，且不能檢測造成耐藥突變的熱點區(qū)域外的突變11MTBDRplus操作流程DNA提取用NALC/NaOH處理痰標本2)PCR擴增3)

雜交擴增產(chǎn)物和固化在膜上的特異性探針雜交4)

結(jié)果判讀rpoB

野生型探針:WT1-WT8rpoB

突變探針:MUT1-3:D516V,H526Y,H526D,S531L→野生型缺失→野生型突變MTBDRplus

rpoB511513516518522526531533rpoBWT2rpoBWT4rpoBWT6rpoBWT8rpoBWT7rpoBMUT1(D516V)rpoBMUT3(S531L)rpoBMUT2A(H526Y)rpoBMUT2B(H526D)514515rpoBWT1rpoBWT3rpoBWT5509508505katG

基因突變MTBDRplus

katG野生探針區(qū)域突變探針突變KatGWT315KatGMUT1S315T1KatGMUT2S315T2MTBDRplus

inhA野生探針區(qū)域突變探針突變InhAWT1-15InhAMUT1C15T-16InhAMUT2A16GInhAWT2-8InhAMUT3AT8CInhAMUT3BT8AinhA

基因突變MT股BD斗Rpl病us反應灑條帶(示范)南非暖的經(jīng)匆驗：Ge妖no射ty鵝pe躁M芹TB垃DR刷p劫lu錄s廈as喪sa狼y:直接煙從涂抵片陽忽性標松本中娘檢測rp牢ob基因治突變(耐激利福氏平)罷,紀ka捕tG掃基購因攔(高蜓濃度即異煙灑肼耐構(gòu)藥)膊,券in課hA付基與因(希低濃止度異產(chǎn)煙肼距耐藥堆)靈敏蹲度、寺特異淹度，摸陽性梨預測箱值、著陰性卻預測南值耐利傅福平可98績.9航,行99箭.4魚,滑97羨.9案,和99惡.7耐異饅煙肼悼94食.2匪,貪99地.7步,蒸99休.1研,和97羽.9耐M顆DR謹-T邪B餡9疲8.奪8,糾1翼00鼠,磚1完00板,和99幼.7Ba畢rn礦ar桶d白M,燙e挨t漂al陳.商Am饑J摩R另es差pi位r棟Cr遍it駁C擁ar佩e孕Me感d貨20貧08偷;1全77煮:7雞87滑-9婆2結(jié)核崗耐藥牲檢測敗基因違芯片激光衣共焦爐掃描縣儀軟件脆判讀結(jié)核炕耐藥拐檢測倡芯片作獲北京嗚市自翅主創(chuàng)蠅新產(chǎn)烈品證鳳書樣品牲制備閣儀雜交艷儀通量：兩個例一線狠抗結(jié)瞞核藥速度：6小時晃（比傳此統(tǒng)藥奴敏試掃驗法罵快50療-1婆00倍）靈敏沫度：103CF表U/反應特異奔性：黃對照愛設(shè)計念嚴謹軌；自胖動判班讀基于rp壘oB螞/k原at垮G/塊in婆hA的基袋因突因變，民快速期檢測劑分離道株或執(zhí)者痰柱樣本核中結(jié)姜核桿出菌多楚藥耐苗藥（營利福賞平、施異煙山肼）赤。In悔te潔rn笑at松io剪na遺l丟Jo短ur放na賤l松of稍T章ub概er訪cu苗lo扛si陽s針an拆d焰Lu密ng閉D孕is花ea饅se棄,13歪:9寨14虛-9務20圣,20亮09（IF尤=2捉.3）18獲國雷家醫(yī)撿療器頂械證字書和辮歐盟CE認證Xp迷er泰t悶MT什B/轎RI得F檢測概結(jié)核立分枝警桿菌檢測艦利福谷平耐費藥直接順標本陵檢測10拍0分鐘干可獲櫻得結(jié)虛果工作吸流程痰簡單掌，僅鏡需1披個步暮驟的劑準備蔬工作獲得喬結(jié)果貌的時餃間<從90筒mi登n工作社量:>16樣本/天厚/莊模塊不需騙要生承物安南全規(guī)綜合音控制性能對MT散B特異敏感昆性與脾培養(yǎng)笑相似通過rp混oB基因箏檢測鍋利福墳平耐損藥產(chǎn)品禾和系喪統(tǒng)設(shè)孤計Ge泳ne局Xp如er笛t系統(tǒng)系的檢隆測模肢塊測試照模塊吐的擴槐大和燒交換對非激分枝戰(zhàn)桿菌逼實驗挖室人騾員僅匠需要瘦最多魔1天蠶的培乒訓Ge乞ne伶Xp緒er鞋t樣本遭準備茂、擴說增、獨檢測役自動嚷化MT津B延/利福脂平耐巖藥性希檢測痰標謀本可講以直頁接放柜入模盟塊中聯(lián)，而爽無需習與任桿何試源劑進婚行混胃合處葵理報告結(jié)果時間:1h45minGeneXpertDNA分子與PCR試劑混合樣本自動過濾和清洗超聲裂解捕獲的生物體，釋放DNA半嵌套實時PCR擴增

&檢測集成反應管456濃縮細菌去除抑制劑12標本液化和作用15分鐘后轉(zhuǎn)移2ml3結(jié)束手工工作7結(jié)果可打印Xp燥er最t嚷MT槐B/墻RI造F單中荒心評宣估研體究（廉初步炕結(jié)果針）不同樓研究黃設(shè)計躺和研宗究人甩群，協(xié)肺結(jié)輛核和俘肺外夾結(jié)核稈標本檢測閃結(jié)核匯總榨的未排經(jīng)校饞正的川敏感世性92板%匯總陸的未宇經(jīng)校議正的飲特異翁性98截%檢測償利福龍平耐寧藥匯總浩的未駕經(jīng)校頭正的纏敏感弊性98址%匯總卷的未羊經(jīng)?；闭睦p特異愚性99巷%操作煩方面廢棄際物管罪理–如痰肌標本中容器儲存嫁和供湖應–反應旺盒龐供大,恥2許-身28癥°C貸,有效菊期12個月電力網(wǎng)供應–糠UP摔S閘(4肺00肯V輪A)或電迅池組培訓–需求栗不高(使用艱計算李機、售預防娃污染)生物粒安全–與涂謎片鏡媽檢相題同每年精校正–模塊詞更換安全–防盜(計算闖機)世界扮衛(wèi)生委組織快速莖開展Xp爪er罰t隸MT膚B/攝RI糾F診斷悠試驗技術(shù)墓和實惡施方防面的習考慮20慶11年3月WH竊O對Xp盟er擇t遭MT傾B/辣RI磨F的建常議摘暈要：高度觀推薦針用于椒懷疑MD核R-慢TB以及各合并HI瘡V感染語的結(jié)晚核病競病人某的初味診診皂斷對于MD缺R－TB、HI餃V不嚴較重的硬地區(qū)齡，可魯以在漸涂片忍之后長考慮蟲使用Xp探er相t接MT桂B(yǎng)/求RI樂F，特翼別是拋用于佛診斷彩涂陰懂病人寧（取目決于賽費用困）肺外毛標本秤的有痕關(guān)證蛋據(jù)尚丹有限增加秩檢測拉次數(shù)謀可能掏增加宰敏感故性，觸但需翼考慮粉費用雪增加適用孕于兒讓童不能捕替代燭傳統(tǒng)通涂片吼、培長養(yǎng)、亮藥敏璃試驗步驟1:特異訓抗原奔激發(fā)揮淋巴尤細胞IF斜N-釋放陰性嘗對照ES柳AT進-6或CF裳P-鑒10孵育孵育顯影步驟2:用EL眠IS社A檢測IF丹N-Y娃Y株YYYYY院Y闊YYYY洗滌Y愛Y顫YYYY洗滌Y雞Y謹YQu懼an閣ti問FE圣RO最N擱TB復G買ol加d?實驗T-隙SP群OT遺T漂B賢(E卷LI訓SP辮OT半)技術(shù)單核訴細胞爐分離TB抗原姿刺激榆，IF成N-釋放一抗艦捕獲IF蘿N-與標必記的足二抗甘結(jié)合酶作匯用標萍記物道－顯去色每一毀斑點蜓代表多釋放IF捐N-的一個細胞YYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYIF糖N-抗原小景結(jié)用途操作生物安全要求費用液體培養(yǎng)更敏感、快速的培養(yǎng)＋＋＋＋＋＋＋＋LPA/基因芯片快速診斷M/XDR＋＋＋＋＋＋＋LED涂陽病人發(fā)現(xiàn)＋＋＋＋Xpert快速診斷＋＋＋＋＋NT舌P中如坊何應物用覽－據(jù)給誰李用？世哪里兩做？撇怎么冷用？國家索結(jié)核縮慧病參蹤蝶比實座驗室低推薦永建議液體呀培養(yǎng)奮用于:結(jié)核廁病可游疑癥坦狀者藏檢查,可以槳作為拘結(jié)核魯?。◤R耐藥鈴）的荷診斷這依據(jù)演和結(jié)瘋核病慌患者憲治療些效果陳判斷,液體扁培養(yǎng)可以代替?zhèn)鹘y(tǒng)乳培養(yǎng)推薦逝理由:液體勵培養(yǎng)喊在已追經(jīng)在席我國抽注冊爐；國內(nèi)頓外研擾究顯稿示其骨敏感擊性和TA某T優(yōu)于柔傳統(tǒng)炊培養(yǎng)孕；數(shù)據(jù)捏顯示造在我泉國具燒有可周行性,符合粥成本豈效果差；推薦爹使用父層級:區(qū)縣輔、地筋市和禽省級鞏（醫(yī)療啄機構(gòu)溜和疾催病預拜防機蝴構(gòu)）國家蝕結(jié)核乘病參語比實況驗室番推薦夕建議Ge倦nX腹pe炮rt即將器可以蹈用于:結(jié)核招病可健疑癥由狀者堪檢查,可以星作為山結(jié)核孟病的席輔助鐘診斷丟方法醋和結(jié)泄核病稍患者令治療武效果測判斷,它有誰望代替滾傳統(tǒng)讀的培沫養(yǎng)和節(jié)利福叔平的顛藥敏全試驗束（可砌疑耐渣藥結(jié)全核病羅患者據(jù)）推薦密理由:即將哭在我劫國獲帥得注晴冊證綢書；國內(nèi)都外研栽究顯已示其坑敏感量性和繳特異騰性，就陽性塘結(jié)果俗報告瘦時間廁優(yōu)于歌傳統(tǒng)際方法遠；WH溜O在全攪球推折薦數(shù)據(jù)聚顯示仁在我舍國具功有可笑行性,符合歇成本依效果蹈；可能聞使用碌層級:區(qū)縣凝（？齡）、纖地市芝和省左級（醫(yī)鞠療機析構(gòu)和勝疾病酸預防遣機構(gòu)酬）國家糾結(jié)核拐病參蜻比實磚驗室搬推薦劃建議LP傷A可以乘用于:可疑鋪耐藥此結(jié)核昌病患會者查,它有州望代替杯利福因平和俯異煙言肼的片傳統(tǒng)禿藥敏扛試驗推薦筐理由:在我只國獲碌得注娃冊證導書；國內(nèi)枝外研秀究顯陳示其叫敏感洪性和招特異遮性（TA螺T)較好怖；WH域O在全盈球推浪薦數(shù)據(jù)歇顯示濁在我動國具杰有可繪行性,符合瞇成本療效果通；可能絞使用詳層級:地市士和省腳級（醫(yī)妹療機詢構(gòu)和本疾病銷預防敗機構(gòu)窩）國家寄結(jié)核橋病參躲比實坊驗室挨推薦壺建議基因響芯片桃可以傍用于:可疑較耐藥裂結(jié)核天病患腐者查,它有糕望代替初利福遵平和葵異煙報肼的竄傳統(tǒng)搭藥敏紙試驗推薦短理由:在我夫國獲杏得注炮冊證鞠書；國內(nèi)延研究雀顯示仿其敏瓦感性四和特營異性藏和(T蚊AT顆)較好貓；民族男品牌數(shù)據(jù)踢顯示納在我夢國具講有可慶行性,符合各成本退效果挨；可能圣使用閃層級:地市孩和省碎級（醫(yī)綿療機堪構(gòu)和礎(chǔ)疾病析預防天機構(gòu)鍬）國家因結(jié)核顫病參廁比實名驗室題推薦