現(xiàn)代醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)學(xué)課件 潰瘍性結(jié)腸炎-2016

潰瘍性結(jié)腸炎

(UlcerativeColitis)病例男性，40歲。反復(fù)排黏液血便3年，加重2個(gè)月。每天排大便次數(shù)為6次，為明顯血便；Hb125g/L；ESR26mm/h；腸鏡示直腸至肝曲黏膜明顯充血、水腫，散在針尖樣潰瘍，大便潛血試驗(yàn)（++）。1、目前該患者最可能診斷？要確診需要做何種檢查？2、與何種疾病相鑒別？首先的治療措施是什么？概述

UC是一種病因不明的慢性、非特異性潰瘍性直腸和結(jié)腸炎消化性潰瘍不是消化道潰瘍，UC是腸潰瘍好發(fā)部位：大腸，直、乙狀結(jié)腸病理改變：以潰瘍形成為特征臨床表現(xiàn)：腹瀉、腹痛、粘液膿血便病因與發(fā)病機(jī)制一、環(huán)境因素二、遺傳因素三、感染因素四、精神因素五、免疫因素UC病因和發(fā)病機(jī)制至今尚未明確，研究的熱點(diǎn)集中在環(huán)境、遺傳、感染、及免疫幾大因素及其相互作用上。環(huán)境因素發(fā)達(dá)國(guó)家發(fā)病率持續(xù)增高吸煙能促進(jìn)血栓形成，增加克羅恩病危險(xiǎn)性，但能有預(yù)防UC的作用快餐食品UC的發(fā)病率。另過(guò)敏食物可能加重腸道反應(yīng)

大量研究資料表明：本病在同一家族中單卵雙胎高于雙卵雙胎患者一級(jí)親屬發(fā)病率高，其配偶發(fā)病率不高在不同種族間也有明顯差別，白種人發(fā)病高于黑種人，提示其發(fā)病可能與遺傳因素有關(guān)多數(shù)學(xué)者認(rèn)為UC符合多基因病的遺傳規(guī)律，是由許多對(duì)等位基因共同作用的結(jié)果，在一定的環(huán)境因素作用下由于遺傳易感性而發(fā)病遺傳因素與某些感染性腸病有臨床癥狀相似之處（癥狀，病理）長(zhǎng)期探索及可疑病原中，多種渠道檢測(cè)無(wú)陽(yáng)性結(jié)果發(fā)現(xiàn)多數(shù)學(xué)者認(rèn)為細(xì)菌感染可能為其促發(fā)因素感染因素免疫因素

本病常有免疫調(diào)節(jié)異常。病灶粘膜中有亢進(jìn)的免疫炎癥反應(yīng)，參與的細(xì)胞成分有中性粒細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、肥大細(xì)胞、T和B淋巴細(xì)胞、自然殺傷細(xì)胞等。這些效應(yīng)細(xì)胞釋放出的抗體、細(xì)胞因子及炎癥介質(zhì)引起組織破壞與炎性病變。在疾病炎癥過(guò)程中又有大量氧自由基形成，加重了腸粘膜的損害程度。p-ANCA（抗中性粒細(xì)胞胞漿抗體）UC↑CCA-IgG（結(jié)腸炎結(jié)合抗體）UC↑T淋巴細(xì)胞Th1參與細(xì)胞介導(dǎo)的免疫反應(yīng)CD↑↑Th2產(chǎn)生體液免疫反應(yīng)UC↑↑免疫因子、介質(zhì):調(diào)節(jié)性細(xì)胞因子IL-2免疫抑制性細(xì)胞因子IL-10促炎癥細(xì)胞因子等IL-6參與炎癥損傷修復(fù)物質(zhì)：反應(yīng)性氧化產(chǎn)物（RCMS）一氧化氮（NO)免疫因素UC的發(fā)病機(jī)制

作用腸道菌叢參與環(huán)境因子遺傳易感者腸道免疫和非免疫系統(tǒng)啟動(dòng)

免疫反應(yīng)和炎癥臨床癥狀病理與臨床表現(xiàn)的聯(lián)系

1、最好發(fā)部位:直腸乙狀結(jié)腸-疼痛在左下腹;里急后重;粘液膿血便（右半結(jié)腸一般不會(huì)，因?yàn)橛惺澄锏葏⑴c）2、連續(xù)性彌漫性分布（非節(jié)段分布）:鑒別腸結(jié)核、CD——中毒性巨結(jié)腸3、早期粘膜組織脆觸之易出血：命名的困惑4、潰瘍表淺不規(guī)則：TB按橫軸走行，CD按縱軸走行5、易出現(xiàn)炎性息肉：6、明顯腸變形：結(jié)腸變形腸腔縮短、結(jié)腸袋消失7、癌變：大約15%病變部位:大腸-多數(shù)在直腸乙狀結(jié)腸，少數(shù)可累及全結(jié)腸。病變分布:呈連續(xù)性彌漫性分布于粘膜及粘膜下層。病理特點(diǎn)

1、非特異性炎癥，連續(xù)性非節(jié)段性布多發(fā)于直、乙狀結(jié)腸

2、結(jié)腸變形、縮短，結(jié)腸袋消失，腸腔變窄

3、少數(shù)病人可發(fā)生癌變(多為未分化型)

粘膜彌漫性充血水腫、糜爛、出血、隱窩膿腫、潰瘍、炎性息肉、腸壁僵硬縮短、結(jié)腸袋消失、腸腔狹窄等。少數(shù)癌變。

潰瘍炎性息肉病理表現(xiàn)病理Thisgrossappearanceischaracteristicforulcerativecolitis.Themostintenseinflammationbeginsatthelowerrightinthesigmoidcolonandextendsupwardandaroundtotheascendingcolon.Atthelowerleftistheileocecalvalvewithaportionofterminalileumthatisnotinvolved.Inflammationwithulcerativecolitistendstobecontinuousalongthemucosalsurfaceandtendstobeginintherectum.Themucosabecomeseroded,asinthisphotograph,whichshowsonlyremainingislandsofmucosacalled"pseudopolyps".病理Hereisanotherexampleofextensiveulcerativecolitis(UC).Theileocecalvalveisseenatthelowerleft.Justabovethisvalveinthececumisthebeginningofthemucosalinflammationwitherythemaandgranularity.Asthediseaseprogresses,themucosalerosionscoalescetolinearulcersthatundermineremainingmucosa..病理UC腸結(jié)核Pseudopolypsareseenhereinacaseofsevereulcerativecolitis.Theremainingmucosahasbeenulceratedawayandishyperemic.病理病理病變特點(diǎn)——后期炎性息肉粘膜萎縮腸腔狹窄結(jié)腸癌變Thereisariskforadenocarcinomawithulcerativecolitis.Here,morenormalglandsareseenattheleft,buttheglandsattherightdemonstratedysplasia,thefirstindicationthatthereisamovetowardsneoplasia.

病理直腸結(jié)腸癌變UC癌變率：國(guó)外：5-10%國(guó)內(nèi)：0.8%多發(fā)生于：病程長(zhǎng)、病變廣泛者。⒉腹痛部位：左下或下腹部程度：輕→中度

性質(zhì)：陣發(fā)性、痙攣性規(guī)律：疼痛-便意-便后緩解（特有表現(xiàn)？）⒊其它癥狀：腹脹、食欲↓、惡心、嘔吐。4.體征輕、中型：左下腹壓痛，增厚乙狀結(jié)腸。重、暴發(fā)型：鼓腸、腹肌緊張、壓痛、反跳痛。臨床表現(xiàn)

㈡全身表現(xiàn)⒈發(fā)熱：較少見(jiàn)中重型：低或中度發(fā)熱；暴發(fā)型：高熱伴全身中毒癥狀。⒉營(yíng)養(yǎng)障礙衰竭、消瘦、貧血；水電平衡紊亂；低蛋白血癥臨床表現(xiàn)㈢腸外表現(xiàn)眼睛：虹膜睫狀體炎、葡萄膜炎口腔：口腔潰瘍皮膚：結(jié)節(jié)紅斑、壞疽性膿皮病關(guān)節(jié)：杵狀指、關(guān)節(jié)炎血管：血管炎膽道：硬化性膽管炎肝臟：慢性活動(dòng)性肝炎臨床表現(xiàn)㈣臨床分型⒈根據(jù)病程經(jīng)過(guò)：①初發(fā)型②慢性復(fù)發(fā)型③慢性持續(xù)型④急性暴發(fā)型2.根據(jù)病變范圍：直腸

直腸乙狀結(jié)腸

左半結(jié)腸、右半結(jié)腸全結(jié)腸臨床表現(xiàn)病變范圍直腸乙狀結(jié)腸炎直腸炎左半結(jié)腸炎全結(jié)腸炎倒灌性回腸炎

⒊根據(jù)病情嚴(yán)重程度：

腹瀉

便血TPHbESR

輕度<4次/d無(wú)正常正常正常正常

中度介于輕與重型之間

重度>6次/d重>37.7>90<75>30

⒋根據(jù)病期：活動(dòng)期、緩解期。臨床表現(xiàn)并發(fā)癥一、中毒性巨結(jié)腸Ｘ線平片示巨結(jié)腸：橫結(jié)腸明顯擴(kuò)張，左側(cè)結(jié)腸縮短和結(jié)腸袋消失。

多見(jiàn)于暴發(fā)型或重癥。臨床表現(xiàn)癥狀：毒血癥、脫水、電解質(zhì)紊亂。體征：鼓腸、壓痛、腸鳴音消失。血常規(guī)：WBC顯著↑腹平片：結(jié)腸擴(kuò)張、結(jié)腸袋消失。預(yù)后：很差，易穿孔，死亡率高。并發(fā)癥二、直腸結(jié)腸癌變UC癌變率：國(guó)外：5-10%國(guó)內(nèi)：0.8%多發(fā)生于：病程長(zhǎng)、病變廣泛者。并發(fā)癥三、其他并發(fā)癥腸大出血3%腸穿孔多與中毒性巨結(jié)腸有關(guān)腸梗阻少見(jiàn)。實(shí)驗(yàn)室及輔助檢查血液檢查

貧血、血WBC↑↑、ESR↑,重者凝血酶原時(shí)間↑

血清蛋白電泳：A↓,α1`α2↑↑,γ↓

發(fā)作期：γ↓提示預(yù)后不良,若治療后γ↑,說(shuō)明向緩解期發(fā)展,預(yù)后較好

緩解期：若α1`α2↑↑,提示復(fù)發(fā),預(yù)后不良糞便檢查

反復(fù)查病原體陰性

結(jié)腸鏡檢查彌漫性充血、水腫、糜爛、淺潰瘍細(xì)顆粒狀、脆性增加、炎性息肉直腸

乙狀結(jié)腸降結(jié)腸橫結(jié)腸升結(jié)腸回盲瓣結(jié)腸鏡檢查：正常結(jié)腸實(shí)驗(yàn)室和其他檢查結(jié)腸鏡檢查：最重要粘膜多發(fā)性淺潰瘍，伴充血水腫，病變大多從直腸開(kāi)始，且呈彌漫性分布。粘膜粗糙呈細(xì)顆粒狀，粘膜血管模糊，質(zhì)脆易出血，可附有膿性分泌物。假息肉（炎性息肉）形成，結(jié)腸袋變鈍或消失。直腸乙狀結(jié)腸實(shí)驗(yàn)室和其他檢查結(jié)腸鏡檢查Absenthaustrationandmultiplesmall,superficialulcerations.Peristalticmovementsarealmostcompletelymissingandthecolonisshowingearlysignsofstenosis.Edematousmucosawithulcerations,stenosisandabsentperistalticmovements.

Colitiswithsuperficial,extendedulcer.Theneighbouringmucosaisvulnerableandshowsgranularlesions.

實(shí)驗(yàn)室和其他檢查結(jié)腸鏡檢查UlcerativecolitiswithpseudopolypX線檢查急性期：黏膜粗大紊亂，腸壁邊緣毛刺狀或鋸齒狀后期：(橢)圓形充盈缺損，腸管呈水管狀Forcomparisonax-rayofanormalcolonisshownhere.Peristalticmovementsandhaustraeareprominent.實(shí)驗(yàn)室和其他檢查X-ray檢查實(shí)驗(yàn)室和其他檢查Thesetwopicturearemeanttooutline,thatbesidesinflammatorychangesaconsiderablefunctionallossresults.Herethecolonpresentsasarigidtube.Peristalticmovementsarepracticallyabsentasisshown.Leftpicture:sigmoidcolon.Rightpicture:transverseandascendingcolon.診斷和鑒別診斷

診斷步驟⒈臨床表現(xiàn)⑴持續(xù)或反復(fù)發(fā)作的粘液膿血便⑵全身表現(xiàn)⒉結(jié)腸鏡檢或X線鋇劑灌腸⒊排除其他腸道疾病⒋臨床病程、病情、范圍、病期完整的診斷包括：

A：臨床類型B：嚴(yán)重程度

C：病變范圍D：病態(tài)分期

A：初發(fā)型、慢性復(fù)發(fā)型、慢性持續(xù)型、急性暴發(fā)型

B：輕度、中度、重度

C：直腸炎、直乙結(jié)腸炎、左半結(jié)腸炎、廣泛性/全結(jié)腸炎

D：活動(dòng)期、緩解期診斷和鑒別診斷女，48歲。直腸和橫結(jié)腸粘膜分別可見(jiàn)彌漫性充血水腫、點(diǎn)、片狀糜爛潰瘍，覆污苔和膿性分泌物，滲血，脆性增加。女，42歲。循腔進(jìn)鏡至結(jié)腸脾曲，可見(jiàn)直腸、乙狀結(jié)腸、降結(jié)腸彌漫性充血水腫，糜爛潰瘍。表面覆白苔膿液。病理結(jié)果：1.潰瘍性結(jié)腸炎；2.腺瘤型息肉，伴慢性炎。診斷和鑒別診斷需鑒別的疾病

慢性細(xì)菌性痢疾慢性阿米巴痢疾

Crohn’s病

結(jié)腸癌血吸蟲病腸易激綜合征

(IrritableBowelDisease,IBS)

阿米巴滋養(yǎng)體血吸蟲及卵顯微鏡檢查

①找溶組織阿米巴滋養(yǎng)體、包囊

②血吸蟲檢查診斷和鑒別診斷（新鮮糞便、保溫）診斷和鑒別診斷Crohn病（回腸末端）診斷和鑒別診斷大腸癌診斷和鑒別診斷腸結(jié)核潰瘍性結(jié)腸炎與結(jié)腸Crohn病的鑒別

項(xiàng)目結(jié)腸Crohn病潰瘍性結(jié)腸炎癥狀有腹瀉但膿血便少見(jiàn)

膿血便多見(jiàn)病變分布呈節(jié)段性

病變連續(xù)直腸受累少見(jiàn)

絕大多數(shù)受累末端回腸受累多見(jiàn)

少見(jiàn)腸腔狹窄多見(jiàn)、偏心性

少見(jiàn)，中心性瘺管形成多見(jiàn)

罕見(jiàn)內(nèi)鏡表現(xiàn)縱行或匍行潰瘍、伴周圍粘膜正常或鵝卵石樣改變

潰瘍淺，粘膜彌漫性充血水腫、顆粒狀，脆性增加病理改變節(jié)段性全壁炎，有裂隙狀潰瘍、非干酪性肉芽腫等病變主要在粘膜層，有淺潰瘍、隱窩膿腫、杯狀細(xì)胞減少等治療一般治療

休息：急性期應(yīng)盡量臥床休息。

飲食：低脂流質(zhì)，嚴(yán)重者禁食。

支持療法：輸血(漿)、白蛋白，靜脈高營(yíng)養(yǎng)。治療一、一般治療藥物治療

首選水楊酸偶氮磺胺類藥物salicylazpsulfapyridine(SASP)，適用于輕型或重型經(jīng)激素治療已有緩解者.主要副作用為血WBC減少、溶血反應(yīng)。持續(xù)用藥1～2年,目前有5-ASA緩釋劑及灌腸劑.

腎上腺皮質(zhì)激素

重型和暴發(fā)型，第一周用沖擊量，漸漸見(jiàn)至維持量，用激素維持治療或停用激素后應(yīng)加用SASP，可結(jié)合灌腸療法。

免疫抑制劑

硫唑嘌呤，副作用為骨髓抑制；環(huán)胞素A，副作用相對(duì)較小。

手術(shù)治療

緊急手術(shù)：穿孔、大出血、中毒性巨結(jié)腸.

經(jīng)內(nèi)科治療無(wú)效者擇期手術(shù)：慢性活動(dòng)性病例，內(nèi)科治療效果差，嚴(yán)重影響生活質(zhì)量，膿腫、瘺管以手術(shù)為佳。預(yù)后

潰瘍性結(jié)腸炎急性期經(jīng)積極治療后，逐漸向恢復(fù)期發(fā)展，直至穩(wěn)定期。一般來(lái)說(shuō)，穩(wěn)定期患者尚需維持治療，部分患者可以長(zhǎng)期處于穩(wěn)定期，多數(shù)患者呈慢性反復(fù)發(fā)作，少數(shù)暴發(fā)。潰瘍性結(jié)腸炎動(dòng)物模型

近年來(lái),在潰瘍性結(jié)腸炎實(shí)驗(yàn)研究中常用的動(dòng)物疾病模型建立方法,大致分為免疫法,物理刺激法,復(fù)合法和中醫(yī)模型制造4大類.一免疫法1

胎鼠結(jié)腸包埋法選用5~6月齡的成年健康大白鼠,體質(zhì)量250~400g,用戊巴比妥鈉腹腔麻醉(80mg/kg),另取受孕14~16d的孕鼠3只,處死,取出胎鼠結(jié)腸3~4cm,用無(wú)菌手術(shù)包埋在成年鼠右腎包膜下,術(shù)后正常飼養(yǎng).7d后解剖大鼠,可見(jiàn)其結(jié)腸炎性反應(yīng).術(shù)后14d病變加重,21d后解剖大鼠,可見(jiàn)有典型的潰瘍性結(jié)腸炎形成[1~3].該實(shí)驗(yàn)方法的特點(diǎn)是動(dòng)物疾病模型與臨床癥狀相似,但實(shí)驗(yàn)技術(shù)要求高,實(shí)驗(yàn)周期長(zhǎng),成功率較低.2結(jié)腸黏膜組織致敏法選用體質(zhì)量在250~400g的健康大鼠,取大鼠結(jié)腸黏膜或人體術(shù)后的新鮮結(jié)腸黏膜或兔結(jié)腸黏膜,制成黏膜勻漿,冷凍24h,融凍后以3000r/min速度離心30min,取上清液提純測(cè)定蛋白質(zhì)含量,冰箱保存?zhèn)溆?使用時(shí)加入Frend’s佐劑.首次每鼠足墊內(nèi)注射0.1~0.3mL抗原;間隔10d.于每鼠足墊內(nèi)注射0.1~0.3mL抗原;實(shí)驗(yàn)第17d,于每鼠背部皮下注射0.1~0.3mL抗原;實(shí)驗(yàn)24d,在每鼠腹股溝處注射0.1~0.3mL抗原;實(shí)驗(yàn)31d,在每鼠腹腔內(nèi)注射0.1~0.3mL抗原(最后1次注射不加佐劑).35d后實(shí)驗(yàn)動(dòng)物出現(xiàn)典型的潰瘍性結(jié)腸炎的癥狀[4,5].該實(shí)驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)周期長(zhǎng),實(shí)驗(yàn)動(dòng)物產(chǎn)生的癥狀與臨床相似,且重復(fù)性好,但需要一定的實(shí)驗(yàn)設(shè)備、條件及相應(yīng)的技術(shù).另取1只健康大鼠,處死后用無(wú)菌手術(shù)取出結(jié)腸內(nèi)容物,畫線于伊紅-美蘭平板,37℃培養(yǎng)24h, 取典型菌落擴(kuò)增,并做數(shù)值鑒定,確認(rèn)為大腸桿菌后,冰箱保存?zhèn)溆?免疫前,取菌種擴(kuò)增,用福爾馬林殺死細(xì)菌.經(jīng)無(wú)菌實(shí)驗(yàn)證明無(wú)活菌,用生理鹽水洗2次,最后將細(xì)菌懸浮于生理鹽水內(nèi),使之終體積分?jǐn)?shù)為1.2×108/mL.首次每鼠足墊內(nèi)注射細(xì)菌懸液.0.2mL,間隔10d,在每鼠腹部皮下注射0.4mL細(xì)菌懸液;實(shí)驗(yàn)17d,在每鼠背部皮下注射0.6mL細(xì)菌懸液;實(shí)驗(yàn)24d,再在每鼠腹腔內(nèi)注射1.2mL細(xì)菌懸液.在動(dòng)物第2次免疫前灌服相同濃度的細(xì)菌懸液1.5mL.免疫開(kāi)始后第3周,實(shí)驗(yàn)動(dòng)物即可出現(xiàn)潰瘍性結(jié)腸炎的癥狀,并逐漸加重,在第31天可出現(xiàn)典型的潰瘍性結(jié)腸炎癥狀[6].該實(shí)驗(yàn)操作方法簡(jiǎn)單,抗原來(lái)源方便,動(dòng)物模型與臨床癥狀相似,成功率高,實(shí)驗(yàn)周期稍長(zhǎng).3鼠大腸桿菌免疫法

2,4-二硝基氯苯(DNCB)是具有毒性的化學(xué)物質(zhì),在其與組織蛋白結(jié)合時(shí)起半抗原作用,能誘發(fā)T細(xì)胞依賴性細(xì)胞介導(dǎo)的免疫反應(yīng),多次接觸可使實(shí)驗(yàn)動(dòng)物對(duì)其產(chǎn)生變態(tài)反應(yīng).選用體質(zhì)量在350~400g的健康短毛♂豚鼠,將豚鼠頸背部毛剪去,涂擦DNCBⅠ號(hào)液(DNCB0.4g:丙酮1mL),約1cm大小,電吹風(fēng)吹干.2周后在豚鼠腹部再1次涂擦DNCBⅡ號(hào)液(DNCB0.2g:丙酮1mL),約1cm大小,如2d后,豚鼠腹部涂擦部位出現(xiàn)紅腫、硬結(jié),說(shuō)明豚鼠已對(duì)DNCB致敏,此時(shí)經(jīng)肛門插管6cm左右,注入DNCBⅢ號(hào)液(DNCB0.1g:丙酮1mL)0.5mL,2d后即可產(chǎn)生典型的急性潰瘍性結(jié)腸炎模型.也可選用體質(zhì)量為250~300g健康大鼠,♀♂兼用.將大鼠背部毛剪去,以DNCBⅠ號(hào)液(DNCB0.4g:丙酮1mL)滴背,每次5滴,連續(xù)14d致敏,其后每日經(jīng)肛門插管約6cm左右注入DNCBⅢ號(hào)液(DNCB0.1g:丙酮1mL)0.5mL,連續(xù)4d.造模后大鼠產(chǎn)生典型急性潰瘍性結(jié)腸炎癥狀[7].該實(shí)驗(yàn)方法,實(shí)驗(yàn)動(dòng)物產(chǎn)生的病變較為嚴(yán)重,可選用于療效明確的抗?jié)冃越Y(jié)腸炎作用強(qiáng)度的比較.4二硝基氯苯法 角叉菜膠是紅海藻類棘狀麒麟菜屬中提取的硫酸多糖,用低濃度酸水解可得到致潰瘍性結(jié)腸炎作用更強(qiáng)的降解產(chǎn)物,對(duì)家兔、小鼠、大鼠、豚鼠、靈長(zhǎng)類等都可引起實(shí)驗(yàn)性潰瘍性結(jié)腸炎.選用500g左右的豚鼠,將20

g/L降解的角叉菜膠溶液投入水瓶中,供豚鼠飲用,為增加其可口性,可按50g/L加入蔗糖,記錄動(dòng)物的飲水量.角叉菜膠的致潰瘍作用與劑量和給藥時(shí)間有關(guān).一般在10d內(nèi),實(shí)驗(yàn)動(dòng)物即可出現(xiàn)潰瘍性結(jié)腸炎的癥狀,在3~4周時(shí),幾乎所有的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物都出現(xiàn)潰瘍性結(jié)腸炎的癥狀[8~10].也可用硫酸葡聚糖(DextravenSulfatesodium,DSS)致敏法.選用體質(zhì)量在300g左右的健康大鼠,♀♂兼用.將5%DSS溶液裝入瓶中,供大鼠飲用,連續(xù)10d.大鼠在飲DSS溶液的第3~4d后,即開(kāi)始出現(xiàn)潰瘍性結(jié)腸炎癥狀[12,13].上述這2個(gè)實(shí)驗(yàn)方法,操作簡(jiǎn)單,可重復(fù)性好,技術(shù)要求低,并可在實(shí)驗(yàn)期間,同時(shí)觀察到不同階段的潰瘍性結(jié)腸炎情況.5角叉菜膠法6.免疫復(fù)合物/福爾馬林模型

其制作原理是提供抗原的主動(dòng)免疫,方法是:動(dòng)物先被某種抗原全身致敏,然后局部滴注該抗原產(chǎn)生損害。具體方法如下:取家兔新鮮結(jié)腸粘膜組織,用玻璃勻漿器制成勻漿,-20℃下冷凍24h,凍融后以4000r/min速度低溫離心30min,取上清液用雙縮脲法測(cè)其蛋白含量,置入冰箱備用。使用時(shí)加入等量freund完全佐劑,制成抗原乳化劑。各組造模大鼠均于第1d于大鼠左足跖注射抗原乳化劑0·4mL(含抗原4mg),于第10、17、24、31d分別于右足跖、腹股溝、腹腔、背部注射抗原乳化劑0·8mL(含抗原8mg,末次注射不加佐劑)。確定大鼠體內(nèi)產(chǎn)生抗結(jié)腸抗體后,將大鼠用氯胺酮麻醉(100mg/kg),用1·5%的福爾馬林2mL灌腸,留置1h,用生理鹽水洗凈排出,再用抗原液2mL(含抗原8mg),不加佐劑灌腸,留置2h,然后洗凈排出。于上述處理第二天,大鼠出現(xiàn)軟便、稀便,甚則膿血便,精神萎靡,呈拱背狀。取4只大鼠處死取其結(jié)腸,病理顯示粘膜表面部分糜爛,固有層存在少量慢性炎癥細(xì)胞,但未見(jiàn)潰瘍,可能與取材部位不當(dāng)有關(guān)。此種造模方法雖合乎UC發(fā)病機(jī)制,且達(dá)到全身免疫異常和局部炎癥病變的結(jié)合,但模型制作過(guò)程較繁瑣,周期較長(zhǎng),動(dòng)物死亡率高,且重現(xiàn)性不理想,其腸道病理變化的程度與人類UC的病變過(guò)程不太符合,達(dá)不到科研實(shí)驗(yàn)的要求。二物理刺激法選用體質(zhì)量為350~400g健康短毛豚鼠,♀♂兼用.禁食24h,用2%戊巴比妥鈉溶液做腹腔麻醉(30mg/kg),并用5%肥皂水灌腸清糞.以制備浸沾10%冰醋酸液的0.3cm×0.3cm棉花紙,通過(guò)細(xì)橡皮管由肛門送入距肛門約5~6cm處.豚鼠醒后,常規(guī)飼養(yǎng).間隔2d,重復(fù)進(jìn)行,連續(xù)3次至第8d完成實(shí)驗(yàn),處死動(dòng)物,取出結(jié)、直腸觀察,可見(jiàn)潰瘍性結(jié)腸炎病變[11,12].本實(shí)驗(yàn)疾病模型為應(yīng)用化學(xué)介質(zhì)直接接觸動(dòng)物直腸或結(jié)腸,是接觸部位產(chǎn)生炎性病灶,短期內(nèi)即可出現(xiàn)明顯的癥狀,為急性模型.三復(fù)合法12,4-二硝基氯苯+乙酸聯(lián)合建模法選取成年健康大白鼠,體質(zhì)量250~350g,適應(yīng)性喂養(yǎng)1周.1周后大鼠頸背部用10%NaS脫毛,以2%DNCB液滴背,每次5滴,連續(xù)14d致敏.第15天用直徑3mm的尼龍導(dǎo)管經(jīng)肛門插入結(jié)腸8cm處,注入0.04mmol/LDNCB乙醇液(DNCB0.1%,乙醇50%)0.25mL.第16天,同部位注入乙酸溶液2mL,準(zhǔn)確定時(shí)15s后再用5mL生理鹽水沖洗.建模完成后1~2周,動(dòng)物出現(xiàn)潰瘍性結(jié)腸炎的典型表現(xiàn),并持續(xù)到16周以上[15].本實(shí)驗(yàn)方法操作簡(jiǎn)單,成功率高,自愈時(shí)間長(zhǎng),為觀察藥物療效提供了有利條件.2.三硝基苯磺酸/乙醇模型TNBS

此模型是1989年由Morris等[3]建立的細(xì)胞免疫法動(dòng)物模型,目前在國(guó)內(nèi)外應(yīng)用較多。其方法是將三硝基苯磺酸(TNBS)按一定劑量(100mg/kg)與一定濃度的乙醇混合制成30%乙醇灌腸液，給大鼠灌腸后,TNBS作為一種半抗原物質(zhì),與大分子組織蛋白結(jié)合后成為一種抗原物質(zhì),使T淋巴細(xì)胞致敏,溶解了與半抗原結(jié)合的動(dòng)物自身細(xì)胞,從而導(dǎo)致腸道炎癥的發(fā)生;TNBS被代謝而產(chǎn)生O-2和H2O2,這些活性氧及過(guò)氧化物對(duì)組織上皮細(xì)胞產(chǎn)生毒性而損傷腸壁。動(dòng)物給予TNBS后其病理特點(diǎn)是組織呈一種慢性炎癥反應(yīng),各種炎癥介質(zhì)也發(fā)生明顯變化。該模型雖然有操作簡(jiǎn)便、重現(xiàn)性好、造模時(shí)間短、成功率高等特點(diǎn),但筆者認(rèn)為此種方法僅僅是T細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞免疫反應(yīng),不完全符合B淋巴細(xì)胞和T淋巴細(xì)胞混合浸潤(rùn)所致UC的要求;同時(shí)由于大鼠對(duì)局部免疫損傷有較強(qiáng)的修復(fù)能力,用此法制作的UC模型其病變維持時(shí)間不夠長(zhǎng),據(jù)報(bào)道,該模型只造成了1周左右的急性炎癥和3周的慢性炎癥。可見(jiàn)單純的TNBS/乙醇方法亦不容易達(dá)到理想U(xiǎn)C動(dòng)物模型的要求。四中醫(yī)對(duì)潰瘍性結(jié)腸炎的模型肝郁脾虛證模型此種模型主要從兩方面入手[13]，一是用過(guò)量或毒性藥物造成急慢性中毒性肝損傷來(lái)制造模型，二是通過(guò)情志刺激改變動(dòng)物生理狀態(tài)來(lái)制造模型。前者主要有應(yīng)用CCl4造成大鼠急慢性中毒方法；艾葉注射法；腎上腺素皮下注射法等。而后者有夾尾急性激怒法；捆綁動(dòng)物法；模具激怒法；夾尾激怒加苦寒瀉下法；限食限動(dòng)加醋酸結(jié)腸內(nèi)注射法等。脾虛證模型利用苦寒瀉下中藥番瀉葉灌服大鼠，使其產(chǎn)生脾虛癥狀；再用冰乙酸化學(xué)刺激法復(fù)制潰瘍性結(jié)腸炎動(dòng)物的病理模型，實(shí)驗(yàn)表明大鼠癥狀與臨床脾虛型潰瘍性結(jié)腸炎癥狀相符，且病理改變與該疾病病變相一致。脾虛是潰瘍性結(jié)腸炎基本病理因素，但UC的發(fā)病與多因素相關(guān)，如疾病過(guò)程中存在氣滯、血瘀、濕熱、陽(yáng)虛等，因而單純研究脾虛證UC模型不能很準(zhǔn)確的闡明疾病機(jī)制，故而臨床現(xiàn)已較少應(yīng)用。先于大鼠足跖、腹股溝注射兩次上述抗原乳化劑(每次含抗原8mg),間隔時(shí)間為2周,在大鼠全身致敏、發(fā)生免疫異常的前提下,再用TNBS(購(gòu)于Sigma公司)與無(wú)水乙醇等體積配比的混合液按100mg/kg劑量局部灌腸,使大鼠腸道發(fā)生局部炎癥變化。此方法既達(dá)到全身免疫異常與局部炎癥病變的共存,又可產(chǎn)生與人類UC較為接近的臨床癥狀及腸道病變情況。在局部灌腸后的第5d,大鼠大便次數(shù)增多,且為稀便或粘液便,動(dòng)物精神萎靡,體重減輕明顯,瘦弱懶動(dòng),呈拱背狀。分別于局部灌腸后第3、6、9周各取4只大鼠結(jié)腸組織,觀察均可見(jiàn)粘膜充血、水腫,腸壁增厚,鏡下表現(xiàn)為病變累及腸壁深層,潰瘍明顯,并有中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)等炎癥變化;大部分大鼠可見(jiàn)稀便或粘液便、精神萎靡等癥狀。第12周取4只大鼠結(jié)腸組織,觀察仍可見(jiàn)腸壁增厚、狹窄,鏡下見(jiàn)到腸壁纖維組織形成,部分仍有潰瘍、中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)等炎癥變化。該模型方法重現(xiàn)