實(shí)驗(yàn)-柱色譜分離

實(shí)驗(yàn)10柱色譜分離實(shí)驗(yàn)報(bào)告--亞甲基藍(lán)與熒光黃的分離一實(shí)驗(yàn)?zāi)康膶W(xué)習(xí)并掌握色譜法的原理及其應(yīng)用。學(xué)習(xí)并掌握柱色譜的實(shí)驗(yàn)操作技能。二實(shí)驗(yàn)原理色譜法亦稱色層法，層析法等，是分離，純化和鑒定有機(jī)化合物的重要方法之一。色譜法的基本原理是利用混合物各組分在某一物質(zhì)中的吸附或溶解性能（即分配）的不同，或其它親和作用性能的差異，混合物的溶液流經(jīng)該種物質(zhì)，進(jìn)行反復(fù)的吸附或分配等作用，從而將各組分分開(kāi)。色譜分離法的分類（按操作條件的不同）色譜分離法的分類（按組分在固定相中的作用原理不同）色譜法的應(yīng)用色譜法在有機(jī)化學(xué)中的應(yīng)用主要包括以下幾個(gè)方面：（1）分離混合物（2）精致提純化合物（3）利用比移值（Rf）鑒定化合物(4)跟蹤反應(yīng)進(jìn)程柱色譜常用的有吸附色譜和分配色譜兩類。前者常用氧化鋁或硅膠為吸附劑。后者以硅膠，硅藻土和纖維素為支持劑，以吸收大量的液體為固定相。當(dāng)加入的洗脫劑流下時(shí)，由于不同化合物吸附能力不同，因而以不同的速度沿柱向下流動(dòng)，繼續(xù)洗脫時(shí)，吸附能力弱的組分隨溶劑首先流出。在連續(xù)洗脫過(guò)程中，不同組分或不同色帶就能分別收集，從而達(dá)到分離純化的目的。就行。裝完的柱子應(yīng)該要適度的緊密（太密了淋洗劑走的太慢），一定要均勻（不然樣品就會(huì)從一側(cè)斜著下來(lái)）。書(shū)中寫(xiě)的都是不能見(jiàn)到氣泡，我覺(jué)得在大多數(shù)情況下有些小氣泡沒(méi)太大的影響，一加壓氣泡就全下來(lái)了。當(dāng)然如果你裝的柱子總是有氣泡就說(shuō)明需要多練習(xí)了。但是柱子更忌諱的是開(kāi)裂，甭管豎的還是橫的，都會(huì)影響分離效果，甚至作廢！

5.2加樣。

用少量的溶劑溶樣品加樣，加完后將下面的活塞打開(kāi)，待溶劑層下降至石英砂面時(shí)，再加少量的低極性溶劑，然后再打開(kāi)活塞，如此兩三次，一般石英砂就基本是白色的了。加入淋洗劑，一開(kāi)始不要加壓，等溶樣品的溶劑和樣品層有一段距離（2～4cm就夠了），再加壓，這樣避免了溶劑（如二氯甲烷等）夾帶樣品快速下行。

5.3淋洗劑的選擇。

感覺(jué)上要使所需點(diǎn)在rf在0.3左右的比較好。不要認(rèn)為在板上爬高了分的比較開(kāi)，過(guò)柱子就用那種極性，如果rf在0.6，即使相差0.2也不容易在柱子上分開(kāi)，因?yàn)橹邮且粋€(gè)多次爬板的狀態(tài)，可以通過(guò)公式的比較：0.6/0.8一次的分離度，肯定不如（0.2/0.3）的三次方或四次方大。另外，一般你的物質(zhì)酸性的話淋洗劑里面要加入幾滴乙酸，堿性的話通常使用氨水或是三乙胺等弱堿。

5.4樣品的收集。

用硅膠作固定相過(guò)柱子的原理是一個(gè)吸附與解吸的平衡。所以如果樣品與硅膠的吸附比較強(qiáng)的話，就不容易流出。這樣就會(huì)發(fā)生，后面的點(diǎn)先出，而前面的點(diǎn)后出。這時(shí)可以采用氧化鋁作固定相。

5.5最后的處理。

柱分后的產(chǎn)品，由于使用了大量的溶劑，其中的雜質(zhì)也會(huì)累積到產(chǎn)品中，所以如果想送分析，最好用少量的溶劑洗滌一下，因?yàn)榇蟛糠值碾s質(zhì)是溶在溶劑里的，一洗基本就沒(méi)了，必要時(shí)進(jìn)行重結(jié)晶。

另外，再過(guò)柱的時(shí)候，有時(shí)會(huì)出現(xiàn)氣泡，一是和使用的溶劑有關(guān)，如果是易揮發(fā)的溶劑，如乙醚、二氯甲烷等，在室溫稍高的情況下，很容易出現(xiàn)這種現(xiàn)象，因此，在室溫高的時(shí)候，可以選擇沸點(diǎn)較高，揮發(fā)相對(duì)小的溶劑。還有，使用混合溶劑時(shí)，使用的兩種溶劑的沸點(diǎn)應(yīng)該相差不大，如：乙酸乙酯和石油醚(60~90),而乙醚卻要選擇30－60的石油醚