水蛭對熱刺激后血管壁增厚的干預(yù)作用

水蛭對熱刺激后血管壁增厚的干預(yù)作用【摘要】目的探討水蛭對熱刺激后動脈管壁增厚的干預(yù)效果。方法使用局部熱刺激兔耳，溫度為(43±)℃，每次3h，每天1次，共做3次。模型組分別于造模后1周、2周、4周時取材；水蛭組實驗前3天及實驗后一直用水蛭灌胃，/(kg·d)，分別于造模后1周、2周及4周時取材。采用光學(xué)顯微鏡及圖像分析儀進(jìn)行形態(tài)學(xué)觀察。結(jié)果模型組熱刺激后動脈中膜成分增殖并突入血管腔內(nèi)，造成管腔變狹。造模處平滑肌細(xì)胞層數(shù)及中膜厚度增加。水蛭組與模型組相比，增殖程度減小，各項觀測指標(biāo)均有不同程度的變化，但統(tǒng)計學(xué)分析差異無顯著性。結(jié)論/(kg·d)劑量的水蛭對熱刺激后血管壁增厚的干預(yù)效果不理想。

【關(guān)鍵詞】動脈；狹窄；水蛭；形態(tài)學(xué)

【Abstract】ObjectiveThisstudywasdesignedtobuildanewexperimentalmodelofproliferationofarterialsmoothmusclecells(SMC).MethodsThecentralarteryoftherabbitearwasheatedby(43±)℃for3hoursaday，andforthreeexaminedthemorphologicalchangesofthearterialsbylightmicroscopyanddigitalplanimetry，3days，1week，2weeks，and4weeksafterexperiment.Hirudopowderwasadministered3daysbeforeheating，andrabbitswereexamined4weeksafterAstheincreasingofthetime，theproliferationofSMCincreasedandextendedtothelumineoftheartery，buttheinternalelasticmembranewasnotdisrupted.So，theluminastenosisoccuerd.HirudopowdercausedtheproliferationofSMCtodecrease.Althoughtheluminabecomesmaller，theeffectisnotFromtheresearchresultsabove，wecandrawtheconclusionthatheatcaninducearterialSMCtoproliferate，andthendecreasetheareaofthearterylumina.Themodelisavailable.HeatcanactivateautocrinegrowthofthelocalSMC，andalterthestructuresandfunctionofvascularwall.originatedfromthehost.HirudopowderhasaslighteffectondecreacingSMCproliferaton，becauseitmaynotplayapartintherelaventmechanismofheat.

【Keywords】artery；stenosis；Hirudopowder；morphology

水蛭是應(yīng)用已久的活血祛瘀類藥物，味咸苦，性平、有小毒，歸肝經(jīng)。其主要功效為破血逐瘀。臨床廣泛應(yīng)用于心腦血栓性疾病及瘀血經(jīng)閉的治療中，亦可用于治療生殖系統(tǒng)疾病如精不液化等。本實驗研究水蛭對家兔熱刺激后血管壁增厚的干預(yù)作用，現(xiàn)報告如下。

1實驗材料

實驗動物中國家兔48只，體重～，雄性，由湖南中醫(yī)學(xué)院實驗動物中心提供。合格證號為湘醫(yī)動字第20-003號。

藥物與試劑水蛭購自湖南長沙九芝堂藥店，產(chǎn)地為山東，寬體金線蛭，生產(chǎn)日期為2005年1月。

儀器GSY型恒溫水浴鍋(北京醫(yī)療器械廠)；數(shù)字彩色圖像分析儀(美國Optimas公司)；OlympusBH—2顯微鏡；局部加熱器。

2實驗方法

實驗動物分組48只家兔隨機分為左耳模型組和右耳模型組，每組24只。一只耳朵造模，另一只耳朵為假處理。再將上述兩組動物分別隨機納入6組，使每組含有8只動物，即左、右耳造模各4只。模型組分為3個，水蛭灌胃組為3個，分別在熱刺激后3天、1周、2周、4周時處死取材。

造模及灌胃法的實施從耳根部起至耳尖部，測量兔耳中央動脈的長度，選取中央2cm的長度作為受試部位。將加熱器置于受試部位，以膠布固定，使之緊貼皮膚。加熱器為厚的鐵皮制成的小圓匣，直徑2cm，高；側(cè)面開2個小孔，分別接入水管和出水管。熱水流速為156～160ml/min，流入前溫度為(43±)℃，流出后溫度為41℃～42℃。假處理組僅給予同樣的器具操做，溫度與室溫一致，時間均為每次3h，每天1次，連續(xù)做3次。水蛭組熱刺激前3天及熱刺激后一直給予水蛭粉灌胃。/(kg·d)，分2次于上、下午灌胃。每次劑量溶于3ml蒸餾水中，灌入后再灌2ml蒸餾水，以使胃管壁不殘留藥末。所有動物均以普通兔飼料喂養(yǎng)。

標(biāo)本的采集及處理按預(yù)定日期空氣栓塞法處死動物，石蠟切片法，用地依紅染彈性纖維，再用Harris蘇木素染細(xì)胞核，最后用伊紅染膠原纖維及細(xì)胞質(zhì)。

觀測指標(biāo)均為光鏡下觀測［1］(1)內(nèi)彈性膜的完整性：在10×40倍放大的條件下，觀察所有切片內(nèi)彈性膜是否有斷裂。(2)血管腔面積的測定：10×10倍放大條件下，使用圖像分析儀進(jìn)行測量，標(biāo)本選取及計算法同上。(3)中膜厚度的測量：10×40倍放大條件下，線型測微尺進(jìn)行測量。選取中膜最厚處為中心點，然后從中心點開始，將動脈橫截面等距離分成五段。分別測出5個均分點處的中膜厚度，取均值。標(biāo)本選取及計算法同上。(4)血管壁平滑肌細(xì)胞層的計數(shù)：10×10倍放大條件下，在上述5個點分別測量平滑肌細(xì)胞層數(shù)，取均值。標(biāo)本選取及計算法同上。

3統(tǒng)計學(xué)方法

所有數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示。多組均數(shù)比較進(jìn)行方差齊性檢查，方差齊采用方差分析、方差不齊采用tD檢驗，兩組均數(shù)比較采用t檢驗。所有數(shù)據(jù)經(jīng)軟件進(jìn)行處理。

4結(jié)果

一般情況觀察實驗后模型組兔耳局部輕度發(fā)紅，持續(xù)20～35min，對照組無變化。所有動物耳部皮膚無潰爛及腫脹。兔子毛發(fā)有光澤，活動、進(jìn)食及二便均未見異常。無生病及中途死亡發(fā)生。

血管相關(guān)性指標(biāo)的觀察結(jié)果見表1、2、3。模型組中膜有不同程度的增生。所有受檢標(biāo)本均未見內(nèi)彈性膜斷裂。熱刺激后3天可見局部內(nèi)彈性膜厚度，向管腔內(nèi)突入；1周后，模型組的局部中膜增厚，增生物主要由VSMC及膠原纖維構(gòu)成。2周、4周時局部中膜繼續(xù)增厚，管腔進(jìn)一步縮小。表1家兔不同時間管腔面積測量

注：與同期假處理組相比，*P；與模型組28天相比，＃P；與水蛭組3天相比，ΔP；與水蛭對照組28天相比，※P表2家兔不同時間血管中膜厚度測量

注：與同期假處理組相比，*P；與模型組28天相比，＃P；與水蛭組3天相比，ΔP；與水蛭對照組28天相比，※P

模型組與同期假處理組相比，管腔明顯縮窄。模型組4周后管腔面積明顯3、7天組，見表1；假處理組內(nèi)彈性膜光滑完整，局部中膜無增厚，管腔面積間相比差異無顯著性，見表1。

模型組中膜厚度隨動物熱刺激后生存時間的延長而增加，提示損傷后管壁的厚度在一定時間內(nèi)有增加的趨勢見表2。平滑肌細(xì)胞的層數(shù)隨動物熱刺激后生存時間延長而增加，提示熱刺激后平滑肌細(xì)胞在28天內(nèi)始終保持增殖狀態(tài)，見表3。表3家兔不同時間血管壁平滑肌層數(shù)測量

注：與同期假處理組相比，*P；與模型組28天相比，＃P；與模型組14天相比，ΔP；與水蛭對照組28天相比，※P；與水蛭組3天相比，▲P

水蛭組各項指標(biāo)的變化趨勢與模型組類似，但變化幅度相對較小，與同期模型組相比，統(tǒng)計學(xué)差異無顯著性。提示/kg水蛭對模型的干預(yù)效果不理想。

5討論

水蛭是應(yīng)用已久的活血祛瘀類藥物，味咸苦、性平、有小毒，歸肝經(jīng)。其主要功效為破血逐瘀，并可墮胎。臨床廣泛應(yīng)用于心腦血栓性疾病及瘀血經(jīng)閉的治療中，亦可用于治療生殖系統(tǒng)疾病如精不液化等。

本研究使用兔耳皮膚局部熱刺激法，造

成兔耳中央動脈中膜平滑肌細(xì)胞增殖，管腔狹窄。水蛭對此病理變化的干預(yù)效果較差，除了藥物劑量和制劑的問題，可能與其所含成分有關(guān)。水蛭分離出的活性成分大致可分為兩大類：一類直接作用于凝血系統(tǒng)的成分，包括凝血酶抑制劑，以及其他抑制血液凝固的物質(zhì)，如水蛭素(Hirudin)；第二類是其他蛋白酶抑制劑及其他活性成分，如溶纖素(Hement—erin)等［2］。水蛭素是水蛭的主要活性成分，是目前已知的最強的凝血酶抑制劑。水蛭素可與凝血酶形成復(fù)合物，阻斷凝血酶的蛋白質(zhì)水解功能，不僅阻止了纖維蛋白凝塊形成，而且阻止凝血酶催化的其他凝血反應(yīng)：如對凝血因子Ⅴ、Ⅷ的激活以及凝血酶誘導(dǎo)的血小板聚集和釋放。因此，水蛭的主要作用為抗血栓，表現(xiàn)為大大降低血小板和纖維蛋白形成的凝塊，而不改變血小板數(shù)量和纖維蛋白含量［3］。

家兔股動脈形成粥樣斑塊后，應(yīng)用氣囊法形成術(shù)后，立即給予肝素和水蛭素，結(jié)果水蛭素組的再狹窄明顯降低，療效優(yōu)于肝素組，表明水蛭具有一定的抗平滑肌細(xì)胞增殖的作用，但是該作用的發(fā)揮機理可能與其抗血栓作用關(guān)系密切。由于熱刺激后局部血管壁未見血小板聚積和血栓形成，所以我們推測管壁的增厚與血小板和血栓的關(guān)系不大。熱應(yīng)激激活血管局部的自/旁分泌性增殖。研究表明：急性熱應(yīng)激能使血中血管緊張素Ⅱ明顯升高［4］。由于血管平滑肌細(xì)胞具有分泌血管緊張素原的功能，且含有血管緊張素轉(zhuǎn)換酶，所以我們推測熱刺激可使受熱局部平滑肌細(xì)胞分泌過多的血管緊張素，通過自／旁分泌途徑直接作用于平滑肌細(xì)胞；也可通過間接作用激活其他生長因子，如PDGF-A、ET－1、FGF等，共同作用于平滑肌，促進(jìn)其增殖及合成基質(zhì)［5］。此外，當(dāng)局部熱刺激時，滋養(yǎng)血管平滑肌交感神經(jīng)受熱刺激，緊張度降低［5］，可以引起滋養(yǎng)血管擴張，血流量增加［6］。同時，由于所支配的動脈受熱擴張，局部血管內(nèi)壓力升高，平滑肌舒張，動脈壁變薄，會使滋養(yǎng)血管受到中膜和外膜的擠壓作用而扭曲［7］，管腔縮窄，血流減慢，血流量降低。后者的作用抵消并大于前者的作用，故使中膜血液供應(yīng)量降低，造成中膜缺血缺氧。缺氧可以誘發(fā)平滑肌增殖［8］，缺血可以促進(jìn)新內(nèi)膜的產(chǎn)生。由于水蛭并不能作用于上述病理環(huán)節(jié)，因此對熱刺激后引起的動脈管壁狹窄的干預(yù)作用較差?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】

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