冠心病患者血細胞流變行為改變的臨床研究

冠心病患者血細胞流變行為改變的臨床研究【摘要】目的：研究冠心病患者血細胞流變行為改變的特點。方法：在高放大多投射顯微鏡下直接觀察66例冠心病患者及60例正常對照者紅細胞、白細胞和血小板等的流變行為；應(yīng)用定量、半定量和定性相結(jié)合的方法，檢測冠心病患者及正常對照者的紅細胞聚集性、流動性，白細胞聚集性、活化性，血小板聚集性、活化性以及循環(huán)內(nèi)皮細胞斑塊的數(shù)量、大小。結(jié)果：冠心病患者紅細胞聚集率，血小板聚集率、活化率和白細胞聚集率、活化率顯著增高(P＜或P＜）;循環(huán)內(nèi)斑塊增多(P＜）。結(jié)論：冠心病患者紅細胞、白細胞、血小板的聚集性增高，紅細胞的變形性降低，白細胞、血小板的活化性升高，即血細胞黏度增高；內(nèi)皮細胞斑塊增多，即血管損傷明顯加重。

【關(guān)鍵詞】冠心病；細胞流變學；布氏多功能顯微鏡

作者在高放大多投射顯微鏡下直接觀察了66例冠心病患者紅細胞、白細胞、血小板等的流變行為，發(fā)現(xiàn)患者血細胞流變行為的改變有一些特點，現(xiàn)總結(jié)如下，為臨床冠心病的診治提供一些依據(jù)。

1對象與方法

對象

66例冠心病患者，男40例，女26例，年齡52～73歲。診斷按WHO標準，其中急性心肌梗死并配有優(yōu)良的圖像處理系統(tǒng)、高清晰度彩色激光打印機和錄像機。

方法

活血片制作酒精消毒右手小拇指皮膚，用消毒紙擦干，然后用一次性刺血針快速垂直刺破指端皮膚1mm深使血流出，立即以清潔的載玻片黏附血滴，但不接觸皮膚，蓋上玻片，輕打蓋片，使血滴散開，制成的活血片放在BVPM下分析研究。

紅細胞流變學指標紅細胞畸形率：失去正常紅細胞的雙凹圓盤狀及膜流動變形性，紅細胞呈棘狀、扭曲或破碎為紅細胞畸形。在5000倍相差視野下觀察100個細胞，計算畸形紅細胞占紅細胞總數(shù)的百分比，即為紅細胞畸形率。細胞膜的流動性：觀察紅細胞膜流動或波動及圓盤狀紅細胞中央的透光區(qū)大小。膜流動性用好、一般、差或+、++、+++表示?；渭t細胞增多也是細胞膜流動性降低的表現(xiàn)。在最初的2min內(nèi)，還可根據(jù)紅細胞流過較小間隙時的實際變形情況來判斷紅細胞膜的流動性。紅細胞聚集率：紅細胞之間相互黏著或疊加稱為聚集，可呈緡線狀、橋連狀和凝塊狀。在5000倍相差視野下觀察100個紅細胞，計算聚集的紅細胞占紅細胞總數(shù)的百分比，即為紅細胞聚集率。紅細胞聚集性：觀察平均每個視野緡錢狀聚集或團塊狀聚集的紅細胞數(shù)。在5000倍暗視野下數(shù)10個視野進行平均計數(shù)，無聚集或團塊為－，2～4為+，5～9為++，≥10為+++。

白細胞流變學指標白細胞聚集率：在5000倍相差視野下觀察100個白細胞，計算聚集的白細胞占白細胞總數(shù)的百分比，即為白細胞聚集率。白細胞活化率：正常白細胞逡巡稍動，偽足數(shù)＜2，散在分布；如果其運動增強甚或吞噬、聚集則稱為活化。方法為在5000倍暗視野下觀察100個白細胞，計算活化的白細胞占白細胞總數(shù)的百分比，即為白細胞活化率。白細胞聚集或活化性：無聚集或偽足為－，2個聚集或1個偽足為+,3個聚集或2個偽足為++,3個以上聚集或2個以上偽足為+++(取10個視野的平均值）。同時，用微機圖像處理系統(tǒng)也可以測定白細胞的主動運動速度。

血小板流變學指標血小板聚集率：在5000倍相差視野下觀察100個血小板，計算聚集的血小板占血小板總數(shù)的百分比，即為血小板聚集率。血小板活化率：血小板聚集或失去正常血小板的盤狀呈棘狀或針狀稱為活化。在5000倍相差視野下觀察100個血小板，計算活化的血小板占血小板總數(shù)的百分比，即為血小板活化率。血小板聚集或活化性：無聚集或活化為－，2～4個聚集或活化為+,5～9個聚集或活化為++，10個及以上聚集或針狀體形成為+++(取10個視野的平均值）。

內(nèi)皮細胞斑塊或管型為巨噬細胞吞噬經(jīng)氧化修飾的脂質(zhì)、膽固醇沉積或附著于內(nèi)皮細胞，成為泡沫細胞——管壁透明變性，脫落于血液循環(huán)中。在5000倍暗視野下隨機數(shù)10個視野進行平均計數(shù)：無為－,1個為+,2個為++，≥3個為+++。記數(shù)板計算斑塊數(shù)量（個·mm－3),計算機測定斑塊面積（μm-2)。

統(tǒng)計學處理

所有資料均用χ2檢驗。

2結(jié)果

患者紅細胞流變形為的改變

患者紅細胞聚集率、聚集性、變形性的改變與對照組比較有顯著或極顯著差異(P＜或P＜）,見表1、圖1。

患者白細胞流變形為的改變

患者白細胞聚集率、活化率、聚集或活化性的改變與對照組比較有顯著或極顯著差異(P＜或P＜)，見表2、圖2。表1冠心病組與對照組紅細胞聚集率、聚集性、變形性的比較表2冠心病組與對照組白細胞聚集率、活化率、聚集或活化性的比較患者血小板聚集率、活化率、聚集或活化性改變與對照組比較有顯著或極顯著差異(P＜或P＜），見表3、圖3。

患者循環(huán)內(nèi)皮細胞斑塊數(shù)量和大小

患者循環(huán)內(nèi)皮細胞斑塊數(shù)量、面積改變與對照組比較有顯著或極顯著差異(P＜或P＜），見表4、圖4。表3冠心病組與對照組血小板聚集率、活化率、聚集或活化性的比較表4冠心病組與對照組循環(huán)內(nèi)皮細胞斑塊數(shù)量、面積的比較

3討論

細胞流變學是研究血細胞流動變形的科學,目前的研究方法多不能直接觀察細胞水平的動態(tài)變化。高放大多投射顯微診斷儀是集現(xiàn)代光學、光電學、電子學、醫(yī)學影象學和多媒體計算機技術(shù)于一體的新型顯微診斷設(shè)備。其主機部分BVPM是美國20世紀90年代研制生產(chǎn)的新型產(chǎn)品，可放大15000倍，分辨率高，并具備40～15000倍范圍內(nèi)的連續(xù)無級共軛變倍，集相差、微分干涉、明視野、暗視野等功能為一體，同時配有優(yōu)良的圖像處理系統(tǒng)、高清晰度彩色激光打印機和錄像機，實現(xiàn)資料、圖像存儲處理和同步視頻打印，是最新一代光電一體化多功能顯微診斷系統(tǒng)。我們采用BVPM結(jié)合圖像處理方法，在高放大倍數(shù)下直接觀察紅細胞、白細胞、血小板等的流變行為，為細胞流變學的研究和應(yīng)用提供了新方法。

Dintenfass［1］在20世紀60年代初期就發(fā)現(xiàn)AMI患者血液黏度增高，很多學者的工作也證實這些發(fā)現(xiàn)。為了探討心肌缺血對血液流變學改變的影響，吳良金等［2］對20條犬進行急性心肌缺血實驗，于缺血前及缺血后1h采血測血液黏度。結(jié)果急性冠脈缺血后1h，低切變下全血黏度顯著升高，血漿黏度明顯升高，伴血細胞比容增加，變形能力降低；血小板聚集性增強；纖維連結(jié)蛋白減少；TxB2增高，TxB2/6KPGF1ａ升高。1981年吳良金觀察了150例冠心病病人，全血黏度為，高于對照組的(P＜)，血漿比黏度為,高于對照組的(P＜），紅細胞電泳時間為s，與對照的s相比明顯減慢，說明冠心病病人血黏滯性比正常人高。其中紅細胞電泳時間變慢，反映紅細胞表面電荷和靜電排斥力的減退或喪失，從而影響紅細胞聚集。1997年龍建軍等觀察了21例AMI患者尿激酶溶栓治療早期甲襞微循環(huán)的動態(tài)變化，發(fā)現(xiàn)AMI溶栓血流再通時，血流狀態(tài)惡化即血流變慢，血細胞重度聚集，白細胞增多、體積增大，白微栓大量形成。2004年龍建軍等應(yīng)用BVPM觀察了39例高血壓病伴胰島素抵抗的患者,其中13例血液呈高凝狀態(tài)并出現(xiàn)微血栓,不伴胰島素抵抗者無一例出現(xiàn)微血栓,據(jù)此認為,BVPM下觀察到微血栓可以作為高血壓病血液高凝的一個重要標志,BVPM下活血分析可以作為臨床疾病觀測血液呈高凝狀態(tài)的簡便、有效的方法。

我們在高放大多投射顯微鏡下直接觀察66例冠心病患者的細胞流變行為，結(jié)果發(fā)現(xiàn)冠心病患者與正常對照組比較，紅細胞聚集率、血小板聚集率和活化率、白細胞聚集率和活化率、循環(huán)內(nèi)皮斑塊數(shù)量和面積均有顯著差異(P＜或P＜）。由此推斷，冠心病患者紅細胞、白細胞、血小板的聚集性增高，紅細胞的變形性降低，白細胞、血小板的活化性升高，即血細胞黏度增高，是血液黏度增高的最重要因素；內(nèi)皮細胞斑塊明顯增多、增大，即血管損傷明顯加重。這與以往結(jié)果相似。

總之，冠心病心肌缺血時，血腎素、血管緊張素活性增加，兒茶酚胺釋放增加，微血管痙攣、血管內(nèi)皮損傷，加速內(nèi)皮細胞凋亡、循環(huán)內(nèi)皮斑塊增多，TXB2、ET合成增加，PGI2、NO合成減少，相應(yīng)血小板聚集；血液中大分子物質(zhì)如纖維蛋白原增多，并吸附在紅細胞表面；血小板激活，釋放VWF聚合體增多；紅細胞膜脂質(zhì)過氧化，紅細胞聚集；非炎性介質(zhì)刺激白細胞增多并活化、黏附聚集于受損血管內(nèi)皮表面，加之變形能力下降，使血黏度增加。故治療冠心病在擴張冠脈、抗凝的基礎(chǔ)上活血化瘀、改善血細胞流變行為、保護內(nèi)皮細胞是