淺論克氏螯蝦殼聚糖對實驗性大鼠血脂水平及動脈粥樣硬化形成的影響

淺論克氏螯蝦殼聚糖對實驗性大鼠血脂水平及動脈粥樣硬化形成的影響【摘要】目的：探討克氏螯蝦殼聚糖對實驗性高脂血癥大鼠血脂水平及動脈粥樣硬化形成的影響。方法：將40只大鼠隨機分為對照組，高脂模型組，克氏螯蝦殼聚糖低、中、高劑量組，每組8只。實驗至第9周末，檢測血清總膽固醇(totalcholesterol，TC)、三酰甘油(triglyceride，TG)、低密度脂蛋白(lowdensitylipoproteincholesterol，LDLc)、高密度脂蛋白(highdensitylipoproteincholesterol，HDLc)和丙二醛(malonaldehyde,MDA)的含量及超氧化物歧化酶(superoxidedismutase，SOD)活性。同時取主動脈作病理形態(tài)學觀察。結果：與高脂模型組比較，克氏螯蝦殼聚糖組大鼠主動脈壁厚度明顯降低，泡沫細胞數(shù)量明顯減少;血清TC、TG、LDL、MDA含量明顯降低,HDL、SOD含量明顯提高()。結論：克氏螯蝦殼聚糖對實驗性高脂血癥大鼠有較好的降血脂、抗脂質過氧化損傷作用，可減緩大鼠動脈粥樣硬化的形成。

【關鍵詞】克氏螯蝦殼聚糖;大鼠;血脂;抗氧化;動脈粥樣硬化

[Abstract]Objective:ToinvestigatetheactionoftheCrayfishchitosanonbloodlipidsandatherogenesisintheexperimentalhyperlipidemiarats.Methods:Fortyratswererandomlydividedintocontrolgroup,highfatmodelgroup,lowdoseCrayfishchitosangroup,mediumdoseCrayfishchitosangroupandhighdoseCrayfishchitosangroup,everygrouphadeightrats.Bytheninthweekend,theserumcholesterol(TC),triglyceride(TG),lowdensitylipoproteincholesterol(LDLc),highdensitylipoproteincholesterol(HDLc),MDAandsuperoxidedismutase(SOD)activityweredetermined.Theaortapathomorphismwasobserved.Results:Comparedwiththefatmodelgroup,theaorticwallthicknesswasdecreasedandfoamcellsreducedsignificantlyinCrayfishchitosangroup.ThecontentsofserumTC,TG,LDLc,MDAdecreasedsignificantlyandHDLc,SODwasincreasedsignificantly()inCrayfishchitosangroup.Conclusion:Crayfishchitosancanincreasebloodlipidantioxidationandreducetheatherosclerosisformationintheexperimentalhyperlipidemiarats.

[Keywords]Crayfishchitosan;rats;bloodlipid;antioxidant;atherosclerosis

克氏螯蝦殼聚糖(Crayfishchitosan)是本課題組從克氏螯蝦的外殼中提取、制備的一種堿性氨基多糖，是自然界唯一帶有陽離子的可食用堿性多糖[1]。研究表明克氏螯蝦殼聚糖具有抗菌、降血糖等作用，但對調血脂抗氧化，預防動脈粥樣硬化方面的研究尚未見報道。本文通過對實驗性高脂血癥模型大鼠的研究，探討克氏螯蝦殼聚糖調血脂抗氧化，預防動脈粥樣硬化形成的作用，為克氏螯蝦殼聚糖的臨床應用提供實驗依據。

1材料與方法

儀器與試劑

日本島津CL7300型全自動生化分析儀,日本Olympus顯微鏡。克氏螯蝦殼聚糖，由鎮(zhèn)江科力生物技術有限公司制備;膽固醇，上海伯奧生物科技有限公司產品;維生素D，上海通用藥業(yè)股份有限公司產品;膽酸鈉片，溫州生物化學制藥廠;丙硫氧嘧啶片，上海復星藥業(yè)有限公司;總膽固醇(totalcholesterol，TC)、三酰甘油(triglyceride，TG)、低密度脂蛋白(lowdensitylipoproteincholesterol，LDLc)、高密度脂蛋白(highdensitylipoproteincholesterol，HDLc)檢測試劑盒，由北京中生北控生物科技股份有限公司生產;超氧化物歧化酶(superoxidedismutase，SOD)和丙二醛(malonaldehyde，MDA)檢測試劑盒購于南京建成生物工程研究所。

動物與飼料

SD大鼠，雄性，40只，體質量180～205g，由江蘇大學實驗動物中心提供?；A飼料由江蘇大學實驗動物中心提供。高脂飼料，用%基礎飼料、10%豬油、3%膽固醇、%膽酸鈉、5%白糖、%丙硫氧嘧啶配制而成。

方法

動物分組與造模

用基礎飼料適應性喂養(yǎng)SD大鼠5d后，隨機分為5組：正常對照組，高脂模型組,克氏螯蝦殼聚糖低、中、高劑量組,每組8只。對照組每日以基礎飼料喂養(yǎng)，給等量%氯化鈉溶液灌胃;高脂模型組以40ml/kg劑量一次性腹腔注射維生素D后,每日以高脂飼料喂養(yǎng)，給等量%氯化鈉溶液灌胃;克氏螯蝦殼聚糖低、中、高劑量組自造模日起給高脂飼料的同時分別用克氏螯蝦殼聚糖300，600，900mg/kg灌胃，1次/d。

生化指標檢測

實驗9周后禁食不禁水12h，麻醉后眼眶后靜脈叢采血，分離血清。嚴格按照試劑盒說明書，分別以校準血清進行儀器校準,再進行室內質控血清測定,質控結果在允許范圍內,分別對血清TG、TC、HDLc、LDLc、SOD和MDA進行測定。

大鼠主動脈病理形態(tài)觀察

采完血后取主動脈約1cm，用10%甲醛溶液固定。逐級乙醇脫水,石蠟包埋切片,蘇木精伊紅(HE)染色，顯微鏡下觀察大鼠主動脈病理形態(tài)的變化。

統(tǒng)計學方法

數(shù)據以均數(shù)±標準差(x±s)表示，用Stata軟件進行單因素方差分析,表示差異有統(tǒng)計學意義。

2結果

克氏螯蝦殼聚糖對大鼠主動脈病理形態(tài)的影響

正常對照組大鼠血管內膜表面光滑而連續(xù)完整，未見細胞黏附，內膜下間隙較窄，中膜平滑肌細胞排列規(guī)整，無增生;高脂模型組大鼠血管壁增厚，內膜粗糙，內皮細胞呈連續(xù)性缺失，底層的膠原纖維顯露，大量單核細胞黏附于內皮表面或潛入內皮下，內皮下間隙增寬，內彈力板分離斷裂;克氏螯蝦殼聚糖組大鼠血管內膜光滑，低、中劑量組大鼠血管內膜局部僅有少量單核細胞黏附，偶見內皮細胞缺失，平滑肌細胞增生，但明顯好于模型組，高劑量組大鼠血管內膜與正常對照組相似，幾乎看不出區(qū)別。

克氏螯蝦殼聚糖對大鼠血脂水平的影響

給高脂飼料后，高脂模型組大鼠血清TC、TG、LDLc含量顯著升高，HDLc含量顯著降低，與正常對照組相比，差異均有統(tǒng)計學意義()，表明高脂模型造模成功。給予克氏螯蝦殼聚糖后，各劑量組TC、TG、LDLc含量均降低，HDLc含量均升高，中、高劑量組與高脂模型組比較，差異有統(tǒng)計學意義();低劑量組的LDLc含量與高脂模型組比較，差異也有統(tǒng)計學意義()。見表1。表1各組大鼠血清TC、TG、HDLc及LDLc含量比較

克氏螯蝦殼聚糖對大鼠血清SOD及MDA含量的影響

與正常對照組比較，高脂模型組大鼠血清SOD含量顯著下降()，MDA則顯著升高()，給予克氏螯蝦殼聚糖，各劑量組SOD均升高，與高脂模型組比較差異有統(tǒng)計學意義(低、中劑量組，高劑量組);殼聚糖各劑量組MDA含量有所下降，與高脂模型組比較，差異均有統(tǒng)計學意義()，見表2。表2各組大鼠血清SOD及MDA含量比較

3討論

動脈粥樣硬化(atherosclerosis，AS)是指動脈內膜的脂質、血液成分的沉積，平滑肌細胞及膠原纖維增生，伴有壞死及鈣化等不同程度病變的一類慢性進行性病理過程。AS的發(fā)展是多因素綜合作用的復雜過程，大多公認的機制是：①氧化型低密度脂蛋白膽固醇(oxLDL)損傷內皮細胞功能，釋放炎性因子和細胞因子;②巨噬細胞吞噬oxLDL形成泡沫細胞與膽固醇結晶構成脂質核心;③血管中膜的平滑肌細胞遷移至內膜轉化成分泌型的平滑肌細胞并增殖，分泌

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