福建省三明市第一中學(xué)高中生物選修一專題5實(shí)驗(yàn)DNA的粗提取與鑒定

【試驗(yàn)】DNA的粗提取與鑒定一、試驗(yàn)原理1.DNA在NaCl溶液中的溶解度隨NaCl濃度的不同而不同。當(dāng)NaCl的濃度為0．14mol/L時(shí)，DNA的溶解度最低。利用這一原理，可使溶解在NaCl溶液中的DNA析出。2.DNA不溶于酒精溶液，但是細(xì)胞中的其他很多物質(zhì)溶于酒精溶液。利用這一原理，可以進(jìn)一步提取含雜質(zhì)較少的DNA。3.DNA遇二苯胺〔沸水浴〕會(huì)染成藍(lán)色；DNA還有遇甲基綠溶液被染成藍(lán)綠色的特性。上述兩種方法均可用于鑒定DNA的存在。二、材料用具雞血細(xì)胞液；鐵架臺(tái)，鐵環(huán)，鑷子，三腳架，酒精燈，石棉網(wǎng)，載玻片，玻璃棒，濾紙，滴管，量筒〔100mL，1個(gè)〕，燒杯〔100mL，1個(gè)，50mL、500mL各2個(gè)〕，試管〔20mL，2個(gè)〕，漏斗，試管夾，紗布；體積分?jǐn)?shù)為95%的酒精溶液〔試驗(yàn)前置于冰箱內(nèi)24h〕，蒸餾水，質(zhì)量濃度為/mL的檸檬酸鈉溶液，物質(zhì)的量濃度分別為2mol/L和0.015mol/L的氯化鈉溶液，二苯胺試劑三、方法步驟步驟操作方法原理制備雞血細(xì)胞液↓取0.1g防止血液凝固，使血細(xì)胞與血漿別離提取細(xì)胞核物質(zhì)↓取20mL蒸餾水與約5～10mL的雞血細(xì)胞液混合并充分?jǐn)嚢?，然后用單層紗布過(guò)濾，取濾液于燒杯中使細(xì)胞過(guò)度吸水而裂開(kāi)溶解DNA↓取2mol/L的NaCl溶液40mL與上述濾液混合后，用玻璃棒沿一個(gè)方向攪拌1minDNA在高濃度氯化鈉溶液中溶解度最大析出DNA并濾取↓沿?zé)瓋?nèi)壁漸漸參加蒸餾水并輕輕攪拌，至白色絲狀粘稠物不再增加時(shí)停止加水，然后用多層紗布過(guò)濾，取紗布上的粘稠物DNA的溶解度隨氯化鈉溶液濃度的降低而降低DNA的再溶解↓用鑷子夾取紗布上的粘稠物放入20mL濃度為2mol/L氯化鈉溶液中，攪拌至完全溶解，然后用兩層紗布過(guò)濾，取其濾液放入小燒杯中DNA在高濃度氯化鈉溶液中溶解度最大提取較純潔的DNA↓取95%的、冷卻的酒精50mL與濾液混合攪拌，待消失絲狀物時(shí)用玻璃棒將其卷起DNA不溶于酒精，消失沉淀DNA的鑒定取兩支20mL的試管，各參加物質(zhì)的量濃度為0．015mol／L的NaCl溶液5mL，將絲狀物溶解。然后放入其中一支試管中，用玻璃棒攪拌，使絲狀物溶解。然后，向兩支試管中各參加4mL的二苯胺試劑?；旌蟿蚍Q后，將試管置于沸水中加熱5min，等試管冷卻后，觀看并且比擬兩支試管中溶液顏色的變化。DNA遇二苯胺〔沸水浴〕會(huì)染成藍(lán)色四、常見(jiàn)問(wèn)題分析

1.從雞血細(xì)胞核中提取的物質(zhì)是DNA嗎？在雞血細(xì)胞中參加蒸餾水，并且攪拌，利用滲透作用原理使雞血細(xì)胞裂開(kāi)，攪拌進(jìn)一步促進(jìn)了雞血細(xì)胞的裂開(kāi)，于是釋放出其中的DNA，當(dāng)然也有少量的RNA，還的蛋白質(zhì)。因此，釋放出的物質(zhì)是DNA、RNA和蛋白質(zhì)的混合物，不僅僅只有DNA。2.怎樣提高血細(xì)胞因低滲而裂開(kāi)的效率？血細(xì)胞的細(xì)胞膜對(duì)低滲溶液有肯定的反抗力量，這稱為滲透脆性。一般而言，血細(xì)胞與蒸餾水相混合而使血細(xì)胞處于極度的低滲環(huán)境之中，細(xì)胞因大量失水而致最終裂開(kāi)并釋放出胞內(nèi)物〔包括細(xì)胞核〕。為促進(jìn)細(xì)胞在低滲條件下裂開(kāi)，可以輔以快速而有力的攪拌，使之受機(jī)械震蕩而更易裂開(kāi)。3.怎樣才能把血細(xì)胞釋放的DNA濾入收集的濾液中？這一步較難處理，在過(guò)濾過(guò)程中經(jīng)常發(fā)生因粘稠的果胨樣物質(zhì)堵塞過(guò)濾紗布的網(wǎng)眼而使后續(xù)的過(guò)濾難以完成，很多DNA沒(méi)能濾入濾液中，這是造成失敗的主要緣由之一。解決的方法有：過(guò)濾時(shí)待過(guò)濾溶液倒入漏斗的速度應(yīng)緩慢，以免沉積于溶液中層的膠狀物一下就把紗布堵住，使過(guò)濾不能完成；一旦消失大量膠狀物使過(guò)濾不能進(jìn)行下去，切忌用力擠壓而使膠狀物也濾入濾液之中，可以把膠狀物重新用適量的2molNaCl溶液進(jìn)行攪拌，使其中的DNA得到溶解，然后再進(jìn)行過(guò)濾。4.試驗(yàn)中看到的絲狀物的粗細(xì)是不是DNA分子的直徑呢？不是。由于DNA分子直徑只有2nm。絲狀物是多個(gè)DNA分子聚在一起形成的。5.盛放雞血細(xì)胞液的容器,最好是塑料容器。雞血細(xì)胞裂開(kāi)以后釋放出的DNA,簡(jiǎn)單被玻璃容器吸附,由于細(xì)胞內(nèi)DNA的含量原來(lái)就比擬少,再被玻璃容器吸附去一局部,提取到的DNA就會(huì)更少。因此,試驗(yàn)過(guò)程中最好使用塑料的燒杯和試管,這樣可以削減提取過(guò)程中DNA的損失。同理，玻璃棒有吸附DNA的作用，可通過(guò)緩緩旋轉(zhuǎn)玻璃棒的方法卷起濃縮后的DNA絲狀物。6.利用DNA在濃度較低的氯化鈉溶液中溶解度小的原理,向含有DNA的濃度較高的氯化鈉溶液中參