640040葉綠素?zé)晒馐褂檬謨?cè)

6400-40葉綠素?zé)晒馊~室簡(jiǎn)易使用手冊(cè)（基因有限企業(yè)農(nóng)業(yè)環(huán)境科學(xué)部，北京）本手冊(cè)是在總結(jié)了美國(guó)LI-COR企業(yè)6400-40使用手冊(cè)基礎(chǔ)上，簡(jiǎn)明扼要地闡述了熒光葉室使用方法，僅供參考。限于作者理論水平和應(yīng)用經(jīng)驗(yàn)，本文還存在許多不足之處，詳細(xì)使用請(qǐng)參見廠家原版英文說明書，本人及本企業(yè)不負(fù)擔(dān)由本手冊(cè)引發(fā)任何責(zé)任。另外需要提醒您是，請(qǐng)?jiān)谑褂帽緝x器和閱讀本手冊(cè)之前閱讀我們?yōu)槟鷾?zhǔn)備葉綠素?zé)晒鉁y(cè)量技術(shù)背景知識(shí)綜述，這對(duì)您最終了解我們儀器使用和準(zhǔn)備試驗(yàn)設(shè)計(jì)來說是必須。1.序言：植物葉片所吸收光能量有三個(gè)走向：光合驅(qū)動(dòng)、熱能、葉綠素?zé)晒?。三個(gè)過程之間存在競(jìng)爭(zhēng)，任一效率增加都將造成另外兩個(gè)產(chǎn)量下降。所以，測(cè)量葉綠素?zé)晒猱a(chǎn)量，我們能夠取得光化學(xué)過程與熱耗散效率改變信息。需要注意是，這種測(cè)量永遠(yuǎn)是相正確，因?yàn)楣饩€不可防止會(huì)有損失。所以，全部分析必須把數(shù)據(jù)進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化處理，包含其深入計(jì)算許多參數(shù)也是如此。調(diào)制熒光儀出現(xiàn)是熒光研究技術(shù)創(chuàng)新。在這類儀器中，測(cè)量光源是調(diào)制（高頻率開關(guān)），其檢測(cè)器也被調(diào)諧來僅僅檢測(cè)被測(cè)量光激發(fā)熒光。所以，相正確熒光產(chǎn)量能夠在背景光線（主要是指野外全光照條件下）存在條件下進(jìn)行測(cè)量?，F(xiàn)在絕大多數(shù)熒光儀采取了調(diào)制系統(tǒng)，同時(shí)也強(qiáng)烈提議您選擇調(diào)制熒光儀。葉綠素?zé)晒饽軌蛘f明光系統(tǒng)II利用葉綠素吸收能量程度和過量光線破壞程度。光系統(tǒng)II電子流動(dòng)能夠表現(xiàn)總體光合速率特征。它提供我們?cè)谄溆喾椒o法實(shí)現(xiàn)情況下，快速估量植物光合能力潛在能力。光系統(tǒng)II也被認(rèn)為是光合機(jī)構(gòu)中對(duì)光誘導(dǎo)破壞反應(yīng)最為靈敏和最為脆弱組分，光系統(tǒng)II破壞是植物葉片脅迫最早表現(xiàn)。當(dāng)然，熒光技術(shù)本身也不是沒有局限，熒光最強(qiáng)有力應(yīng)用不是單獨(dú)使用這一技術(shù)本身，而是結(jié)合其余技術(shù)，尤其是氣體交換從而取得植物對(duì)環(huán)境響應(yīng)完整解釋。6400-40就是在這一應(yīng)用需求背景下推出，是現(xiàn)在唯一能夠同時(shí)同時(shí)測(cè)量葉綠素?zé)晒馀c氣體交換儀器。2.儀器硬件組成與功效6400-40全部硬件組分是在6400光合儀基礎(chǔ)上填加設(shè)備。全部6400-40放置在標(biāo)識(shí)為6400-40FluorescenceChamber紙箱內(nèi)。主要包含以下組分：熒光葉室上部：全部光源與檢測(cè)器在此部分。包含活化光光源、閃光、遠(yuǎn)紅外光和檢測(cè)光及其檢測(cè)器和光強(qiáng)檢測(cè)器。熒光葉室下部：葉溫?zé)犭娕迹簻y(cè)量闊葉葉片溫度。LCF連接線：用于連接葉室和主機(jī)輔助線。3.儀器連接（英文手冊(cè)中有圖示說明，請(qǐng)參考之）在該過程中，應(yīng)該關(guān)閉LI-6400或使LI-6400處于休眠狀態(tài)。3.1在bundle中安裝cable有兩種方法，一個(gè)是利用LCF配件包中velcroties將LCF電纜和LI-6400電纜捆綁在一起。假如將長(zhǎng)久利用LCF，最好將LCFcable插入到bundle中。后一個(gè)花費(fèi)時(shí)間較長(zhǎng)。但當(dāng)長(zhǎng)久應(yīng)用LCF時(shí)非常有意義。3.2去除IRGA分析器頭部上部和下部葉室利用LI-6400和LCF工具包中3/32六角扳手將固定上部和下部葉室長(zhǎng)螺絲拆除。不再連接葉室上部和葉室下部葉片溫度探頭（圖27-6）。3.3連接LCF葉室下面部分葉室底部3個(gè)O形圈一定要放置好，而且將其連接到IRGA分析器頭部，接著安裝葉片溫度探頭。3.4連接LCF上面部分確認(rèn)O形圈放置在應(yīng)有位置，而且連接LCF主體部分。3.5連接cables在IRGA分析器頭部插入小4針連接器，而且將15針LCF連接器與它c(diǎn)able相連接，將這個(gè)cable另一端37針連接器插入到LI-6400操作平臺(tái)上輔助接口上。3.6光合儀其余組分連接不變4.手動(dòng)測(cè)量包含熒光基本測(cè)量參數(shù)測(cè)量，共有三種試驗(yàn)測(cè)量方法。4.1光化學(xué)效率測(cè)量Fv/Fm研究意義：Fv/Fm對(duì)于大多數(shù)植物而言，LI-COR認(rèn)為，改變范圍在0.75-0.85之間，有研究認(rèn)為實(shí)際生長(zhǎng)正常植物大致在0.83左右。假如我們測(cè)量得到數(shù)值不在此正常范圍，則首先我們應(yīng)該確認(rèn)我們?cè)O(shè)置是否正確（常規(guī)設(shè)置我們接下來將介紹），暗適應(yīng)是否不足。假如設(shè)置和處理正確，那么我們就能夠結(jié)合其余數(shù)據(jù)，如氣體交換得到光合、蒸騰等指標(biāo)來研究此植物是否處于某種環(huán)境條件脅迫或某特定生長(zhǎng)久（如作物堅(jiān)固之后枯黃階段等）。也就是說，本測(cè)量值假如不在正常范圍，那么我們能夠說此植物葉片不處于其正常生長(zhǎng)情況，不過原因還需深入試驗(yàn)來探究。試驗(yàn)準(zhǔn)備：此試驗(yàn)關(guān)鍵之處于于Fo點(diǎn)準(zhǔn)確測(cè)量，這需要植物葉片完全暗適應(yīng)。通常而言，20分鐘左右遮光處理（傳統(tǒng)方法通常采取錫紙來包裹植物葉片）是足夠，不過最好情況是二十四小時(shí)暗適應(yīng)或一個(gè)晚上，在凌晨破曉前測(cè)量（在試驗(yàn)室內(nèi)條件輕易控制，而在野外不是很方便）?，F(xiàn)在通常采取暗適應(yīng)夾子來處理，不過通常熒光儀暗適應(yīng)夾子因?yàn)槭枪饫w測(cè)量，遮光面積太小，而常識(shí)告訴我們，小面積遮光對(duì)于整個(gè)植物葉片而言是不足，LI-COR暗適應(yīng)夾子（請(qǐng)單獨(dú)購(gòu)置，200美元一套。每套10個(gè)）大到足以覆蓋整個(gè)葉片（即使在測(cè)量時(shí)，非測(cè)量部位也是遮光），這一點(diǎn)是其優(yōu)點(diǎn)。測(cè)量過程：硬件連接好后開機(jī)，選擇“Defaultfluorometer”葉室配置文件，回車開啟系統(tǒng)。把葉片夾入葉室，關(guān)閉。其余設(shè)置如光合測(cè)量一樣，比如過濾管打到完全“Bypass”。熒光參數(shù)設(shè)置：進(jìn)入測(cè)量菜單，按“F1”來其文件名。按數(shù)字8，進(jìn)入第8行菜單。按F2進(jìn)入FlrEditor菜單界面。設(shè)置以下表：MearsurementsIntensity強(qiáng)度設(shè)定1Modulation調(diào)制頻率設(shè)定0.25KHzFilter信號(hào)平均頻率1Gain放大倍數(shù)10FalshDuration閃光連續(xù)時(shí)間0.8秒Intensity強(qiáng)度設(shè)定7，相當(dāng)于6000umol/s-1m-2左右BlueNochangeModulation調(diào)制頻率設(shè)定20KHzFilter信號(hào)平均頻率50KHzDark（此設(shè)置在本試驗(yàn)中無用，但為以后試驗(yàn)設(shè)置方便起見，一并設(shè)好）Duration遠(yuǎn)紅外光連續(xù)時(shí)間6秒FarRedIntensity強(qiáng)度設(shè)定8（相當(dāng)于6-7umol/s-1m-2左右）FarRedPreTime1秒FarRedPostTime1秒Modulation調(diào)制頻率設(shè)定0.25KHzFilter信號(hào)平均頻率1Hz以上設(shè)置好后，按F5，OK后彈出對(duì)話框“StoreChanges”，按Y后存成自己起固定設(shè)置文件名，如“LI-set001”后回車即可，以后不用再設(shè)置，只需要在第8行菜單中按F1“FlrPik”選擇這一文件名后回車即可。按字母“M”，把M行變量顯示在屏幕上，等候變量dF/dT穩(wěn)定后（小于±5以內(nèi)即可）。按數(shù)字0把菜單翻到0行，按F3“DoFoFm”來測(cè)量，按字母“N”來顯示“Fo”“Fm”“Fv/Fm”實(shí)際測(cè)量值，這時(shí)測(cè)量已經(jīng)結(jié)束，數(shù)據(jù)已自動(dòng)統(tǒng)計(jì)到您起文件名中，關(guān)閉文件。接下來是重復(fù)測(cè)量和處理問題了（因?yàn)閿?shù)據(jù)在不一樣葉片不一樣植株之間存在一定差異，個(gè)別情況差異可能很大，這是自然現(xiàn)象，不是因?yàn)闄C(jī)器測(cè)量造成，重復(fù)是必須）。通常而言，一個(gè)處理按統(tǒng)計(jì)學(xué)嚴(yán)格需要30-50次重復(fù)。當(dāng)然這是常規(guī)情況，同時(shí)需要考慮您樣品多少和處理多少以及測(cè)量花費(fèi)時(shí)間，不過有一點(diǎn)能夠必定是，重復(fù)多數(shù)據(jù)代表性好，更有說服力。數(shù)據(jù)處理：全部測(cè)量數(shù)據(jù)要經(jīng)過方差分析來確定處理內(nèi)差異和處理間差異，以比較說明不一樣處理之間差異是否顯著（請(qǐng)參考生物統(tǒng)計(jì)學(xué)相關(guān)知識(shí)）。問題：脅迫增加還是降低了Fv/Fm？PSⅡ?qū)Νh(huán)境脅迫如溫度、干旱和輻射等非常敏感。脅迫將引發(fā)Fv/Fm降低。影響熒光測(cè)量結(jié)果原因主要包含葉齡、葉片健康情況和環(huán)境因子條件等。4.2研究PSⅡ效率研究意義：PhiPS2（也稱為△F/Fm1）指PSⅡ所吸收光量子中用于光化學(xué)反應(yīng)百分比，經(jīng)過對(duì)光適應(yīng)葉片（某一光照條件下完全適應(yīng)葉片）測(cè)量而得到。在低光照條件下，PSⅡ量子產(chǎn)量通常較高，因?yàn)槿~片所吸收光能中有較大百分比被用于光化學(xué)反應(yīng)中；而在高光照強(qiáng)度條件下，因?yàn)槿~片所吸收能量中很大百分比經(jīng)過非光化學(xué)過程而散失，所以經(jīng)過高光照強(qiáng)度光適應(yīng)葉片△F/Fm1較低。此數(shù)值也可深入計(jì)算出電子傳遞速率（ETR），這一數(shù)值與植物光合速率有很強(qiáng)線性關(guān)系，是又一個(gè)表征植物光合作用能力高低變量。本試驗(yàn)通慣用來研究植物在不一樣光強(qiáng)下光能利用能力。試驗(yàn)準(zhǔn)備：已經(jīng)光照活化植物樣品。在自然光條件下（放入葉室后，需要把活化光強(qiáng)度設(shè)置成與外界條件相同），測(cè)量不一樣植物種類樣品，來比較其差異。假如我們想控制和改變光線條件，需要采取能夠控制光強(qiáng)鹵素?zé)魜碚丈渲参飿悠贰Ｔ谝巴鈼l件不具備情況下，能夠采取6400-40活化光來照射，不過需要時(shí)間比較長(zhǎng)，這取決于植物情況（20-60分鐘都是有可能）。測(cè)量過程：硬件連接好后開機(jī)，選擇“Defaultfluorometer”葉室配置文件，回車開啟系統(tǒng)。把葉片夾入葉室，關(guān)閉。按數(shù)字2來進(jìn)入第2行子菜單，按“F5”來設(shè)置光強(qiáng)和外界實(shí)際光強(qiáng)一致或您想要模擬光強(qiáng)值。其余設(shè)置如光合測(cè)量一樣，比如過濾管全打到完全“Bypass”。熒光參數(shù)設(shè)置：進(jìn)入測(cè)量菜單，按“F1”來起文件名。按數(shù)字8，進(jìn)入第8行菜單。按F2進(jìn)入FlrEditor菜單界面。設(shè)置以下表（只有三項(xiàng)有所改變）：MearsurementsIntensity強(qiáng)度設(shè)定5Modulation調(diào)制頻率設(shè)定20KHzFilter信號(hào)平均頻率1Gain放大倍數(shù)10FalshDuration閃光連續(xù)時(shí)間0.8秒Intensity強(qiáng)度設(shè)定8BlueNochangeModulation調(diào)制頻率設(shè)定20KHzFilter信號(hào)平均頻率50KHz以上設(shè)置好后，按F5，OK后彈出對(duì)話框“StoreChanges”，按Y后存成自己起固定設(shè)置文件名，如“LI-set002”后回車即可，以后不用再設(shè)置，只需要在LEVEL8中按F1“FlrPik”選擇這一文件名后回車即可。按字母“M”，把M行變量顯示在屏幕上，等候變量dF/dT穩(wěn)定后（小于±5以內(nèi)即可，對(duì)于設(shè)置光強(qiáng)與外界條件不一致情況需要很長(zhǎng)時(shí)間）。按數(shù)字0把菜單翻到0行，按F3“DoFsFm’”來測(cè)量，按字母“P”來顯示“PhiPS2”和“ETR”實(shí)際測(cè)量值，這時(shí)測(cè)量已經(jīng)結(jié)束，數(shù)據(jù)已自動(dòng)統(tǒng)計(jì)到您起文件名中，關(guān)閉文件。接下來是重復(fù)測(cè)量和處理問題了（因?yàn)閿?shù)據(jù)在不一樣葉片不一樣植株之間存在一定差異，個(gè)別情況差異可能很大，這是自然現(xiàn)象，不是因?yàn)闄C(jī)器測(cè)量造成，重復(fù)是必須）。通常而言，一個(gè)處理按統(tǒng)計(jì)學(xué)嚴(yán)格需要30-50次重復(fù)。當(dāng)然這是常規(guī)情況，同時(shí)需要考慮您樣品多少和處理多少以及測(cè)量花費(fèi)時(shí)間，不過有一點(diǎn)能夠必定是，重復(fù)多數(shù)據(jù)代表性好，更有說服力。數(shù)據(jù)處理：全部測(cè)量數(shù)據(jù)要經(jīng)過方差分析來確定處理內(nèi)差異和處理間差異，以比較說明不一樣處理之間差異是否顯著（請(qǐng)參考生物統(tǒng)計(jì)學(xué)相關(guān)知識(shí)）。4.3淬滅測(cè)量研究意義：當(dāng)葉片從黑暗條件轉(zhuǎn)入光下，PSII（光系統(tǒng)2）反應(yīng)中心逐步關(guān)閉，這造成了葉綠素?zé)晒猱a(chǎn)量（1秒鐘之內(nèi)）上升，在此之后，熒光產(chǎn)量開始下降，連續(xù)大約幾分鐘或幾十分鐘，這種現(xiàn)象，被稱為熒光淬滅。首先，電子被從PSII傳遞走速率開始上升，這是因?yàn)楣庹T導(dǎo)對(duì)C代謝酶活化和氣孔開放活化，這種淬滅被稱為光化學(xué)淬滅。同時(shí)，能量轉(zhuǎn)化為熱能效率也提升了，這種過程被稱為“非光化學(xué)淬滅”（NPQ）。經(jīng)典植物中，這兩個(gè)過程改變將在15-20分鐘內(nèi)完成并達(dá)成穩(wěn)定狀態(tài)。當(dāng)然這個(gè)活化時(shí)間在不一樣植物種類之間差異顯著。本試驗(yàn)我們測(cè)定指標(biāo)包含：“Fv’/Fm’”（光照條件下開放PSⅡ反應(yīng)中心能量捕捉效率）、“qP”（光化學(xué)淬滅，因?yàn)楣饣瘜W(xué)作用造成光系統(tǒng)II效率下降百分比）、“qN”（非光化淬滅，因?yàn)闊岷纳⒃斐晒庀到y(tǒng)II效率下降百分比）、“NPQ”（非光化學(xué)淬滅，同于qN，現(xiàn)在大多數(shù)研究采取這一指標(biāo)，因?yàn)槠浔萹N更靈敏）。試驗(yàn)準(zhǔn)備：暗適應(yīng)植物葉片同4.1，因?yàn)槲覀冃枰獪y(cè)量基本參數(shù)：Fo、Fm、Fv/Fm、Fs、Fm’、Fo’、Fv’/Fm’等。測(cè)量完Fo、Fm和Fv/Fm后，需要打開活化光對(duì)同一葉片進(jìn)行光活化，再測(cè)量Fs、Fm’、Fo’、Fv’/Fm’。6400將深入完成qP、qN和NPQ計(jì)算。不過缺點(diǎn)是活化需要較長(zhǎng)時(shí)間。假如我們測(cè)量樣品很多，這一過程需要我們花費(fèi)大量時(shí)間。處理方法是對(duì)我們需要測(cè)量樣品（全部做標(biāo)識(shí)）一起暗適應(yīng)后測(cè)量Fo、Fm和Fv/Fm后，統(tǒng)計(jì)其值（用筆記本或其余方式）。把全部葉片放在自然光或鹵素?zé)粝禄罨?，再逐一測(cè)量其Fs、Fm’、Fo’、Fv’/Fm’值并做統(tǒng)計(jì)，再依照我們提供背景知識(shí)材料中提供公式來深入計(jì)算qP、qN、NPQ（此處為作者自己了解，請(qǐng)慎重參考）。圖1淬滅參數(shù)測(cè)量過程（上圖非6400真實(shí)顯示，僅為示意圖）測(cè)量過程：硬件連接好后開機(jī)，選擇“Defaultfluorometer”葉室配置文件，回車開啟系統(tǒng)。把葉片夾入葉室，關(guān)閉。其余設(shè)置如光合測(cè)量一樣，比如過濾管全打到完全“Bypass”。熒光參數(shù)設(shè)置：進(jìn)入測(cè)量菜單，按“F1”來其文件名。按數(shù)字8，進(jìn)入第8行菜單。按F2進(jìn)入FlrEditor菜單界面。設(shè)置如4.1。或直接按F1調(diào)用已經(jīng)保留好配置文件“LI-set001”。按字母“M”，把M行變量顯示在屏幕上，等候變量dF/dT穩(wěn)定后（小于±5以內(nèi)即可）。按數(shù)字0把菜單翻到0行，按F3“DoFoFm”來測(cè)量，按字母“N”來顯示“Fo”“Fm”“Fv/Fm”實(shí)際測(cè)量值。按數(shù)字“2”，按‘F5’選擇“PQuantum”把活化光設(shè)置為您期望研究光強(qiáng)水平或現(xiàn)在外界實(shí)際光強(qiáng)進(jìn)行活化。等候M行中dF/dT顯示穩(wěn)定后（20分鐘以上，小于±5），按數(shù)字“0”按“F4”-“DoFsFm’Fo’”來測(cè)量。這時(shí)能夠按字母“P”來查看“qP”、“qN”（數(shù)值范圍在0-1之間，0最小，1最大）值了。這里我們可能看不到“NPQ”，因?yàn)槲覀兡J(rèn)顯示器可能沒有設(shè)置它，能夠按數(shù)字6來進(jìn)入屏幕編輯器菜單。按“F4”后按“F2”移動(dòng)上下箭頭鍵來尋找“NPQ”并選中它后按回車。按“OK”后彈出對(duì)話框“StoreChanges”，按字母“Y”來保留，跳出文件名對(duì)話框，繼續(xù)按回車鍵。按字母“U”，這時(shí)我們能夠看到“NPQ”了。當(dāng)然，不論顯示有沒有，NPQ在我們保留數(shù)據(jù)文件中都是有。接下來是重復(fù)測(cè)量和處理問題了（因?yàn)閿?shù)據(jù)在不一樣葉片不一樣植株之間存在一定差異，個(gè)別情況差異可能很大，這是自然現(xiàn)象，不是因?yàn)闄C(jī)器測(cè)量造成，重復(fù)是必須）。通常而言，一個(gè)處理按統(tǒng)計(jì)學(xué)嚴(yán)格需要30-50次重復(fù)。當(dāng)然這是常規(guī)情況，同時(shí)需要考慮您樣品多少和處理多少以及測(cè)量花費(fèi)時(shí)間，不過有一點(diǎn)能夠必定是，重復(fù)多數(shù)據(jù)代表性好，更有說服力。數(shù)據(jù)處理：全部測(cè)量數(shù)據(jù)要經(jīng)過方差分析來確定處理內(nèi)差異和處理間差異，以比較說明不一樣處理之間差異是否顯著（請(qǐng)參考生物統(tǒng)計(jì)學(xué)相關(guān)知識(shí)）。5.自動(dòng)測(cè)量以上介紹手動(dòng)測(cè)量盡管意義重大。不過實(shí)際上，我們研究最需要是全過程測(cè)量，而非某一點(diǎn)測(cè)量，這兩種工作意義差異不言自明。不過問題是連續(xù)測(cè)量花費(fèi)時(shí)間往往很長(zhǎng)，通常在30-60分鐘左右。其中有很多時(shí)間僅僅是無意義等候。所以，為更有效地管理時(shí)間，我們能夠采取自動(dòng)測(cè)量方式。試驗(yàn)準(zhǔn)備：需要準(zhǔn)備攝影機(jī)用三腳架（6400備件箱中有三腳架接口，能夠把分析儀和葉室架在三腳架上，因?yàn)槭殖謺r(shí)間太長(zhǎng)是無法忍受）。把主機(jī)野外支架架起來。電池狀態(tài)請(qǐng)確定保持良好（不然中途斷電將使測(cè)量終止）。進(jìn)氣管連接好緩沖瓶并系在一牢靠固定竹竿上，確認(rèn)人呼吸干擾不引發(fā)大誤差。儀器校準(zhǔn)調(diào)零。CO2鋼瓶安放并進(jìn)行注入系統(tǒng)校準(zhǔn)。確認(rèn)H2O過濾管打到全旁路狀態(tài)（Bypass）和CO2過濾管打到全吸收狀態(tài)（Scrub）。CO2濃度設(shè)定為空氣CO2濃度，通常在370-390ppm左右（溫室內(nèi)濃度要高一些，室內(nèi)濃度有時(shí)能夠達(dá)成1000ppm左右，本文是指室外）?？刂艭O2濃度目標(biāo)在于CO2濃度改變對(duì)于熒光測(cè)量影響和其對(duì)光合測(cè)量影響一樣巨大。匹配：參比室和樣品室匹配。因?yàn)椴糠肿詣?dòng)測(cè)量同時(shí)需要配合氣體交換準(zhǔn)確測(cè)量。5.1熒光動(dòng)力學(xué)曲線研究意義：主要目標(biāo)是探究植物葉片從黑暗條件下轉(zhuǎn)入光下活化過程中各參數(shù)改變。在測(cè)量完FoFm之后打開活化光（此處通常設(shè)定為此種植物葉片飽和光強(qiáng)，所以，在此試驗(yàn)之前請(qǐng)先做光響應(yīng)曲線確定其光飽和點(diǎn)范圍。）照射，并按一定間隔打出強(qiáng)閃光，測(cè)定各指標(biāo)，包含PhiPS2、ETR、qP、qN、NPQ等，并深入分析其改變趨勢(shì)。通常而言，暗適應(yīng)植物葉片突然照光后，熒光上升，不過光合速率等指標(biāo)并沒有顯著改變，沒有伴隨高光強(qiáng)而表現(xiàn)出高光合速率，這是因?yàn)閮煞矫鏃l件限制：酶活性激活和氣孔誘導(dǎo)開放。這時(shí)我們往往注意到氣孔導(dǎo)度很低。伴隨光照時(shí)間加大，光合速率逐步上升并達(dá)成穩(wěn)定，而這時(shí)熒光參數(shù)是怎樣改變呢？是否與光合穩(wěn)定同時(shí)呢？熒光產(chǎn)量怎樣下降，其中光化學(xué)淬滅和非光化學(xué)淬滅分別是怎樣改變？這是我們這個(gè)研究主要意義。試驗(yàn)準(zhǔn)備：如4.1一樣暗適應(yīng)。測(cè)量過程：進(jìn)入測(cè)量菜單，按數(shù)字8，按F1設(shè)置參數(shù)如4.1一樣。按數(shù)字8，按F3“DefineActinic”來選擇“PQuantum”設(shè)置光強(qiáng)為飽和光強(qiáng)。不過此時(shí)不要打開活化光。按數(shù)字1，按F1打開文件，起文件名。夾入葉片，等候M行中dF/dT穩(wěn)定后，按數(shù)字0，按F3測(cè)定Fo、Fm、Fv/Fm。按數(shù)字5，按F1“AutoProg”進(jìn)入自動(dòng)測(cè)量程序。選擇“FlrKinetic”（熒光誘導(dǎo)動(dòng)力學(xué)曲線），回車。DarkAdaptBeforeStarting?按N輸入提前測(cè)量好Fo、Fm和暗光合速率（黑暗條件下呼吸速率，但符號(hào)相反為正值）。MeasureFo’withFsFm’?輸入YEnableFlrrecordingBeforeFo?輸入NLoopNTimes輸入10（次）

TimebetweenFlashes輸入3（分鐘）Matchif△CO2lessthan:輸入0（不匹配，此時(shí)假如需要光合數(shù)據(jù)應(yīng)該提前匹配好）此時(shí)測(cè)量已自動(dòng)開始。按9，按F4打開活化光。測(cè)量結(jié)束后菜單左邊*將消失。每次循環(huán)統(tǒng)計(jì)時(shí)會(huì)有響聲來提醒您一次循環(huán)完成。圖2熒光動(dòng)力學(xué)曲線中電子傳遞速率改變（僅作為舉例，光強(qiáng)為500umolm-2s-1）5.2淬滅分析（三相分離）研究意義：非光化學(xué)淬滅NPQ和熱耗散線性相關(guān)，其范圍大致在0-詳細(xì)數(shù)字。在一個(gè)經(jīng)典植物中，在飽和光強(qiáng)下大致在0.5-3.5之間。qN是非光化學(xué)淬滅比較傳統(tǒng)術(shù)語，有時(shí)候也會(huì)用到。它范圍在0-1之間，所以在淬滅較高時(shí)不很敏感。一樣淬滅在較高時(shí)可能會(huì)表現(xiàn)為很小上升，所以qN直接比較不很顯著。通常，假如暗適應(yīng)Fv/Fm顯著不一樣，那么NPQ也不能直接進(jìn)行比較。通常而言，非光化學(xué)淬滅增加可能是因?yàn)槿~片為免受光破壞保護(hù)機(jī)制。研究此過程一個(gè)方法是照光后弛豫速率（即對(duì)光適應(yīng)葉片轉(zhuǎn)入黑暗下之后一個(gè)小時(shí)之內(nèi)各種熒光參數(shù)包含F(xiàn)m’和淬滅系數(shù)改變動(dòng)態(tài)）。不一樣過程有不一樣弛豫速率。其時(shí)間范圍從幾分鐘到幾個(gè)小時(shí)。這些不一樣過程弛豫（Relaxation）動(dòng)力學(xué)用于區(qū)分他們，有些人也稱此過程為“三相分離”。通常來說，包含快速淬滅、中速淬滅和慢速淬滅三個(gè)組分。試驗(yàn)準(zhǔn)備：首先要準(zhǔn)確地測(cè)量Foo和Fmo（最好是植物葉片暗適應(yīng)一個(gè)晚上，在凌晨之前測(cè)量得到Fm值）。然后等候光活化好，植物已經(jīng)完全適應(yīng)后即可開始測(cè)量了。測(cè)量過程：大部分過程和誘導(dǎo)動(dòng)力學(xué)曲線設(shè)置相同，區(qū)分是關(guān)閉活化光。循環(huán)次數(shù)增加到20次。數(shù)據(jù)分析：Fmr稱為可恢復(fù)最大熒光產(chǎn)量。它取得是在活化光誘導(dǎo)達(dá)成光下最大熒光平穩(wěn)時(shí)，關(guān)閉活化光，測(cè)量Fo’后，把飽和光閃光間隔延長(zhǎng)到180秒/次。得到一組逐步增大最大熒光產(chǎn)量，將該組最大熒光產(chǎn)量放在半對(duì)數(shù)坐標(biāo)系中即成直線，該直線在Y軸上截距即為Fmr。然后繼續(xù)按照以下公式計(jì)算NPQ快速和慢速組分（中速組分所占百分比較小，此處沒有計(jì)算，感興趣請(qǐng)參考國(guó)外文件）：NPQs=(Fmo-Fmr)/FmrNPQF=(Fmo/Fm’)-(Fmo/Fmr)圖3弛豫過程中參數(shù)改變（橫坐標(biāo)為時(shí)間）圖4弛豫過程中Fmr計(jì)算（Fm’半對(duì)數(shù)模擬）5.3熒光光曲線研究意義：作光響應(yīng)曲線目標(biāo)很多。本試驗(yàn)將主要集中在PhiPS2和PhiCO2兩個(gè)參數(shù)。PhiPS2指經(jīng)過熒光計(jì)算PSⅡ量子產(chǎn)量，而PhiCO2則是經(jīng)過CO2同化作用計(jì)算量子產(chǎn)量。為了計(jì)算，需要知道植物葉片總同化速率（經(jīng)過測(cè)量光下凈CO2同化和消耗或者測(cè)量黑暗條件下葉片同化速率），同時(shí)需要知道葉片吸收光合有效輻射，包含瞬時(shí)光合有效輻射和葉片吸收系數(shù)。在這個(gè)試驗(yàn)中，將從一個(gè)光適應(yīng)植物開始，經(jīng)過降低瞬時(shí)光照強(qiáng)度，目標(biāo)是為了逐步得到更高量子效率和量子產(chǎn)量。為完成這項(xiàng)工作，用戶將利用到AutoProgram中“FlrlightCurve”。試驗(yàn)準(zhǔn)備：假如試驗(yàn)中用是C3植物，最好在非光呼吸條件，也就是低氧條件下進(jìn)行試驗(yàn)。能夠在LI-6400進(jìn)氣口連接2%或更低氧氣。利用適宜調(diào)整器、“T”形裝置和流量計(jì)，方便為L(zhǎng)I-6400氣體泵提供足夠流量并配置使氣體容器中過多流量流出設(shè)施。假如用戶沒有做這些工作，測(cè)量結(jié)果中ΦPSⅡ和ΦCO2關(guān)系可能不是線性相關(guān)，假如用C4植物進(jìn)行試驗(yàn)則能夠防止以上這些問題。注意這時(shí)需要是光適應(yīng)好（飽和光強(qiáng)下）植物葉片。操作過程：進(jìn)入測(cè)量菜單，按數(shù)字8，按F1設(shè)置參數(shù)如4.1一樣。將葉片夾入葉室，擰緊固定螺絲。打開文件并起文件名。按數(shù)字5，按F5進(jìn)入“AutoProg”，選擇“FlrLightcurve”，回車。DarkAdaptBeforeStarting?按N輸入提前測(cè)量好Fo、Fm和暗光合速率（黑暗條件下呼吸速率，但符號(hào)相反為正值）。MeasureFo’withFsFm’?輸入YEnabl