細菌培養(yǎng)技術

1/9其次節(jié)細菌培育檢測技術節(jié)概述細菌的培育技術是微生物試驗中根本技術之一。大多數細菌均可用人工方法培育，只有將細菌培育出來才能對它進展爭論和鑒定學問點導航—.培育基的種類培育基〔culturemedium〕適宜的培育基養(yǎng)分培育基、選擇培育基、鑒別培育基、厭氧菌用培育基和特別培育基?！惨弧掣着嘤Ｒ姷挠腥鉁嘤傊嘤??！捕仇B(yǎng)分培育基在根底培育基中參加葡萄糖、血液、血清、腹水或酵母浸膏等有機物，可供養(yǎng)分要求較高的細菌生長需要或增菌用。如結核分枝桿菌培育基中添加雞蛋、馬鈴薯、甘油等?！踩尺x擇培育基利用不同種類細菌對化學物質的敏感性不同而制成，使分別菌大量生殖而抑制其它細菌生長的培育基。培育基中含有的抑制劑能抑制非目的菌生長或使其生長不佳，有利于目的菌的檢出和識別。選擇培育基多為固體平板，用于從標本中分別某些特定的細菌?！菜摹宠b別培育基培育基中加有某些特定成分，如糖、醇類和指示劑等，用于檢查細菌的各種生化反響，以資鑒別和鑒定細菌。〔五〕厭氧菌用培育基專性厭氧菌須在無氧條件下才能生長，故需在培育基中參加半胱氨酸、硫乙醇酸鈉等復原劑，降低培育基中氧化復原電勢，并應與外界空氣隔絕，使培育根本身為無氧的環(huán)境?！擦程貏e培育基為某些需要在特別條件下才能生長的細菌培育之用。如高滲鹽增菌培育基、咼滲糖增菌培育基、改進Kagan氏培育基等。二.培育基的制備制備一般培育基的主要過程根本相像，包括調配、溶化、調整分裝、滅菌及檢定和保存。三.細菌檢驗室的留意事項及無菌技術

pH、過濾、細菌培育必需隨時為防止污染和病原菌的集中而進展操作，即無菌操作。細菌檢驗室的留意事項如下：細菌的培育應在接種罩或無菌室內進展。有條件的試驗室可在超凈工作臺內進展。用接種環(huán)分別和移種細菌時，用前用后均需滅菌處理?！愠惺芑鹧鏈缇ā呐嘤炕蛟嚬芘嘤镏腥吮净蛞品N時，在翻開瓶口、管口或關閉前，均要在火焰上通過23次。切不行將含菌材料污染臺面和其他物體。4．如不慎將試管等打破造成菌液污染時，不要慌張，應馬上報告負責人，然后用3％來蘇或5％石炭酸處理污染臺面或地面，至少浸泡30分種。5．工作完畢后，用紫外光燈照耀30分鐘，或用3％來蘇擦拭臺面，并清洗雙手。四、接種環(huán)和接種針使用接種環(huán)和接種針由三局部組成，即環(huán)〔針〕局部、金屬柄局部和絕熱柄局部。接種環(huán)和接種針通常選用電熱〔鎳〕絲，環(huán)的直徑隨使用目的而不同，一般多為24mm4050mm。接種環(huán)〔針〕使用前后均應進展滅菌處理，將接種環(huán)〔針〕末端直立火焰中，燒紅鎳絲局部，再使接種環(huán)〔針〕金屬柄旋轉通過火焰3次滅菌，冷卻后用以取菌或待試標本。使用接種環(huán)〔針〕完畢后馬上將染菌的鎳絲局部于復原焰〔內焰〕中加熱，烤干環(huán)〔針〕端附著的細菌或標本，以免環(huán)〔針然后再移于氧化焰〔外焰〕中燒紅滅菌，最終將金屬柄局部往復在火焰中通過3次。用完后的接種環(huán)〔針〕，應馬上擱置于架上，切勿順手棄置，以免灼焦臺面或其他物件。五、接種操作區(qū)為避開在接種過程中污染環(huán)境以及空氣中的細菌污染培育物，接種均應在接種罩或無菌室內進行，此外細菌學試驗室所必需的設備還包括無菌工作臺、生物安全柜和生物安全試驗室。〔一〕接種罩接種罩的式樣很多，可用木框和玻璃制成，亦有用有機玻璃制成。接種罩在用3證罩內無塵埃和細菌。操作完畢后，應馬上清理內部，并作罩內消毒處理。層流的氣流形式。通過變速離心風機將負壓箱內經過預濾器過濾的空氣壓入靜壓箱，再經高效過濾器進展二級過濾，從出風面吹出的干凈氣流，以肯定的和均勻的斷面風速通過工作區(qū)時，將塵埃顆粒和微生物顆粒帶走，從而形成無塵無菌的工作環(huán)境。使用時應提前殺菌燈，30分鐘后關閉并

50分鐘翻開紫外線啟動送風機。凈化區(qū)內嚴禁存放不必要的物件，以保持干凈氣流型不受干擾。無菌操作的小室。室內應有空氣過濾裝置、紫外線殺菌燈等?！菜摹成锇踩瘛瞓iologicalsafetycabinet,BSC目前微生物試驗中多采用生物安全柜，是為操作原代培育物、菌〔毒〕株以及診斷性標本等具有感染性的試驗材料時,用來保護操作者本人、試驗室環(huán)境以及試驗材料,使其避開暴露于上述操作過程中可能產生的感染性氣溶膠和濺出物而設計的負壓過濾排風柜?！参濉成锇踩囼炇摇睟iosafetyLaboratory〕BS過標準的試驗設計、試驗設備的配置、個人防護裝備的使用等建筑的試驗室。在構造上由一級防護屏障〔安全設備〕和二級防護屏障〔設施〕構成,試驗室生物安全防護的安全設備和設施的不同組合,構成了四級生物安全防護水平,一級為最低。方法。常用的有平板劃線分別培育法、斜面接種法、液體接種法和穿刺接種法。〔一〕多種細菌在培育基外表逐一分散生長,各自形成菌落,以便依據菌落形態(tài)及特征,選擇單個菌落,經過移種而獲得純種細菌〔純培育〕。分別細菌最常用的為平板劃線分別法。1．將接種環(huán)火焰滅菌,待冷卻后取標本或混合菌液。用左手持起平板,使平皿蓋向上放于臺面上或翻開平皿蓋。左手斜持〔45C 角〕平板，右手持已取材的接種環(huán)，在酒精燈上方 56cm處作連續(xù)劃線法分離細菌。劃線時，接種環(huán)與平板呈30 40°角，輕輕接觸平板，以腕力平行滑動接種環(huán)。應避開將瓊脂劃破。先在平板上l／5處輕輕涂布，然后即可左右來回以作連續(xù)劃線接種，線與線間留有適當距離，做到線密而不重復，將整個平板外表布滿劃線。假設菌量較大可承受分區(qū)劃線法?？蓪⑵矫蠓譃榧僭O干個區(qū)〔一般為5個區(qū)〕。先在平板上l區(qū)輕輕涂布，再在2,3… 區(qū)劃線。每劃完一個區(qū)域，均將接種環(huán)滅菌一次，冷后再化下一個區(qū)域。每I2菌落〔見圖20-1〕。圖20-1細菌分別接種法4.做好標記將平皿倒置，置觀看結果?！捕承泵娼臃N法

劃線完畢，蓋好皿蓋，主要用于劃線分別培育所獲得的單個菌落的移種，以得到純種細菌和保存菌種，以及觀看細菌的某些培育特性。1.取菌種管置左手食指、中指、無名指之間，拇指壓住管底部上側面。2.火焰滅菌接種環(huán)。3．以右手小指與手掌拔取棉塞〔如同時持有兩管，可用小指與無名指拔取另一棉塞〕，將管口快速通過火焰1~2次。4．將已滅菌的接種環(huán)伸入菌種管中，從斜面上取少許菌，快速伸入待接種的培養(yǎng)基管中，在斜37C孵箱中培育18~24小時即可觀看結果?！踩骋后w接種法肉湯、胨水、發(fā)酵管等均系液體培育基。用于增菌，觀看細菌生長現象和檢測細菌的生化反響等。1．持好菌種管及培育基管。2．滅菌接種環(huán)，由菌種管取菌，伸入培育基管中，在接近液面的管壁上方輕輕研磨，并沾取少許培育基液體調和，使接種物充分混合于培育基的液體中。3．液體培育一般以18~24小時觀看生長特征為好?！菜摹炒┐探臃N法亦可用于觀察細菌的某些生化反響。1．持好菌種管和培育基管。以滅菌接種針從菌種管取菌。接種針直刺入培育基的中心〔半固體或—般瓊脂高層〕直達管底部〔深入培育基3/4處〕或沿管壁刺入〔醋酸鉛高層〕，接種后接種針應沿原路退出。經培育后即可觀看結果。沿穿刺線生長，線外的培育基清亮者表示細菌無動力；穿刺線模糊不清，或沿穿刺線向外集中生長，或整個培育基混濁者表示細菌有動力。七、培育法依據培育目的和細菌的種類選用最適宜的培育方法。常用的有一般培育法、二氧化碳培育法和厭氧培育法?！惨弧骋话闩嘤ㄒ话闩嘤ㄏ抵感柩蹙蚣嫘詤捬蹙仍谛柩鯒l件下的培育方法，故又稱需氧培育法。將已接種好的置37C孵箱中培育1824〔結核分技桿菌〕需培育3 7天甚至l個月才能生長?！捕扯趸寂嘤?10%氧化碳孵箱，它能自動調整二氧化碳的濃度和溫度，使用極