超高效液色譜相法檢測(cè)雞蛋中氟喹諾酮類藥物殘留

超高效液色譜相法檢測(cè)雞蛋中氟喹諾酮類藥物殘留侯耀杰【摘要】超高效液相法檢測(cè)雞蛋中四種氟喹諾酮類藥物殘留樣品經(jīng)1%甲酸乙腈提取后,熒光檢測(cè)器檢測(cè)分析.結(jié)果表明，四種氟喹諾酮類藥物的峰面積與濃度呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)R2>0.9999.在環(huán)丙沙星、恩諾沙星、沙拉沙星添加濃度為10、100.200pg/kg和達(dá)氟沙星添加濃度為2、20.40pg/kg的情況下,四種氟喹諾酮類藥物的回收率為73.4%~99.1%,各藥物批內(nèi)、批間相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差均小于10%,適用于雞蛋中氟喹諾酮類藥物殘留的檢測(cè).％Usingthemethodtodeterminatesimultaneousfourfluoroquinolonesresiduesineggsbyultraperformanceliquidchromatography.Thesamplewasextractedwith1%formicacidacetonitrileandanalyzedonfluorescencedetector.Theresultsshowedthatthefourfluoroquinoloneshadgoodlinearrelationshipandthecorrelationcoefficientswereabove0.9999.Theaveragerecoveriesrangedfrom73.4%to99.1%atthreespikedlevelwhenciprofloxacin,enrofloxacin,sarafloxacinwas10pg/kg,100pgkg,200pg/kganddanlfloxacinwas2pg/kg,20pgkg,40pg/kg,andthevariablecoefficientsofintrabatchandinterbatchwerebothlessthan10%.Themethodwassuitablefordetectionoftheresiduesforfluoroquinolonesineggs.【期刊名稱】《家禽科學(xué)》【年(卷)，期】2018(000)001【總頁(yè)數(shù)】3頁(yè)(P11-13)【關(guān)鍵詞】超高效液相;氟喹諾酮類藥物;雞蛋;殘留檢測(cè)【作者】侯耀杰【作者單位】甘肅省獸藥飼料監(jiān)察所，甘肅蘭州730030【正文語(yǔ)種】中文【中圖分類】TS207.5氟喹諾酮類藥物是一種廣譜抗生素，具有高效、低毒等特點(diǎn)，常用于動(dòng)物飼料中，可促進(jìn)動(dòng)物生長(zhǎng)，降低動(dòng)物發(fā)病率［1］。因其在畜牧養(yǎng)殖業(yè)中廣泛應(yīng)用，容易在動(dòng)物性食品中造成藥物殘留，而長(zhǎng)期食用具有抗生素殘留的動(dòng)物性食品，容易引起許多問(wèn)題，嚴(yán)重時(shí)會(huì)對(duì)人體中樞神經(jīng)系統(tǒng)及心血管系統(tǒng)造成危害，甚至致癌［2-3］。目前，雞蛋中氟喹諾酮類藥物殘留的檢測(cè)主要通過(guò)高效液相法、液質(zhì)法等，液相法操作簡(jiǎn)便有效，但傳統(tǒng)的常規(guī)液相法通常耗時(shí)較多，工作效率低，隨著超高效液相色譜在檢測(cè)工作中的廣泛應(yīng)用，工作效率得到了極大的提高。本文中使用甲酸乙腈對(duì)樣品進(jìn)行提取，經(jīng)超高效液相法分析，對(duì)超高效液相法檢測(cè)雞蛋中氟喹諾酮類藥物殘留的結(jié)果進(jìn)行匯總分析。1儀器與試劑1.1儀器超高效液相色譜儀Agilent1290，電子天平PL402-L，電子天平AV412，高速冷凍離心機(jī)Bilgugestratos等。1.2試劑乙腈（色譜純，F(xiàn)isher），甲酸（Fisher）。1.3標(biāo)準(zhǔn)品環(huán)丙沙星（中國(guó)獸醫(yī)藥品監(jiān)察所，99.8%），恩諾沙星（中國(guó)獸醫(yī)藥品監(jiān)察所，99.9%），沙拉沙星（中國(guó)獸醫(yī)藥品監(jiān)察所，99.6%），達(dá)氟沙星（QCC，99.6%）。2方法2.1色譜條件流動(dòng)相：0.1%甲酸溶液：乙腈（V/V）=82:18;柱溫：30°C;檢測(cè)波長(zhǎng)：激發(fā)波長(zhǎng)280nm,發(fā)射波長(zhǎng)450nm;流速：0.3ml/min;進(jìn)樣體積：5口1；色譜柱型號(hào)：AgilentEclipsePlusC18RRHD色譜柱,1.8pm/2.1x150mmo2.2提取取雞蛋，打碎去殼攪勻，稱取2.00g，置于50ml離心管中，加入8ml1%甲酸乙月青溶液，渦旋混勻，振蕩5min,10000r/min離心5min,將上清液轉(zhuǎn)移入50ml離心管中。樣品殘?jiān)屑?ml1%甲酸乙青溶液，重復(fù)提取一次，合并兩次提取液。提取液于40C水浴中氮?dú)獯蹈桑x心管中加4ml流動(dòng)相，渦旋溶解，溶液轉(zhuǎn)入15ml離心管中，12000r/min離心5min，取上清液，過(guò)0.2頃微孔濾膜，供超高效液相色譜檢測(cè)分析。2.3標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制稱取環(huán)丙沙星、恩諾沙星、達(dá)氟沙星、沙拉沙星標(biāo)準(zhǔn)品，用0.03mol/L氫氧化鈉溶液溶解配制成1mg/ml的儲(chǔ)備液，量取適當(dāng)儲(chǔ)備液，以流動(dòng)相稀釋成含有環(huán)丙沙星、恩諾沙星、沙拉沙星1pg/ml和達(dá)氟沙星0.2pg/ml的混合標(biāo)準(zhǔn)工作液。適當(dāng)量取混合標(biāo)準(zhǔn)工作液，用流動(dòng)相分別稀釋成含有環(huán)丙沙星、恩諾沙星、沙拉沙星（5、25、50、100、500ng/ml）和含有達(dá)氟沙星（1、5、10、20、100ng/ml）的系列標(biāo)準(zhǔn)工作液，上機(jī)測(cè)定后以標(biāo)準(zhǔn)液濃度為橫坐標(biāo)，以標(biāo)準(zhǔn)液中各組分的色譜峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到回歸方程和相關(guān)系數(shù)。2.4準(zhǔn)確度和精密度在空白雞蛋樣品中添加不同濃度的氟喹諾酮類標(biāo)準(zhǔn)溶液，做添加回收實(shí)驗(yàn)，添加濃度為10（達(dá)氟沙星2四/kg）、100（達(dá)氟沙星20Mg/kg）s200pg/kg（達(dá)氟沙星40pg/kg），每個(gè)濃度做五個(gè)平行樣品，重復(fù)三次，計(jì)算回收率和批內(nèi)、批間相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差。3結(jié)果與討論3.1氟喹諾酮類藥物殘留檢測(cè)，常規(guī)高效液相法使用250nmx4.6nm的C18色譜柱，流動(dòng)相使用磷酸三乙胺-乙腈，但由于超高效液相的色譜柱短，粒徑細(xì)，且氟喹諾酮類藥物屬于兩性化合物，結(jié)構(gòu)中同時(shí)含有羧基和可質(zhì)子化的氮，因此在使用相同的流動(dòng)相時(shí)，四種不同的藥物不能夠得到有效分離。后使用0.1%甲酸溶液-乙腈作為流動(dòng)相，四種藥物得到分離并且峰形良好。高效液相法檢測(cè)雞蛋中氟喹諾酮類藥物大約需要20min，而超高效液相在6.5min之內(nèi)就能夠完成分析，很大程度上節(jié)省了時(shí)間，提高了工作效率。超高效液相法檢測(cè)雞蛋中氟喹諾酮類藥物的標(biāo)準(zhǔn)液圖譜和陽(yáng)性添加圖譜見(jiàn)圖1、圖2。圖1氟喹諾酮類藥物的標(biāo)準(zhǔn)液圖譜圖2氟喹諾硐類藥物的陽(yáng)性添加圖譜3.2實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明在1~500ng/ml范圍內(nèi)，環(huán)丙沙星、恩諾沙星、達(dá)氟沙星和沙拉沙星各自的峰面積與濃度呈良好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)大于0.9999。標(biāo)準(zhǔn)曲線結(jié)果見(jiàn)圖3。圖3氟喹諾酮類藥物標(biāo)準(zhǔn)曲線3.3在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，依照農(nóng)業(yè)部781號(hào)公告-6-2006方法檢測(cè)雞蛋中氟喹諾酮類藥物殘留，四種氟喹諾酮類藥物的回收率不夠理想，使用1%的甲酸乙腈溶液提取，在空白試料中添加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)液，環(huán)丙沙星回收率范圍是76.5%~99.1%,恩諾沙星回收率范圍是73.4%~96.7%，達(dá)氟沙星回收率范圍是79.5%~97.4%,沙拉沙星回收率范圍是77.5%~98.9%，批內(nèi)、批間RSD均小于10.0%，符合檢測(cè)要求。結(jié)果見(jiàn)表1。表1雞蛋中氟喹諾酮類藥物添加回收結(jié)果統(tǒng)計(jì)藥物名稱批次添加濃度10pg/kg（達(dá)氟2pg/kg）100pg/kg（達(dá)氟20pg/kg）200pg/kg（達(dá)氟40pg/kg）批間RSD（%）批間RSD（%）1.6環(huán)丙沙星0.30.4恩諾沙星1.21231231231230.10.20.2達(dá)氟沙星0.1批內(nèi)RSD（%）6.37.16.42.52.42.44.95.45.56.55.25.0沙拉沙星平均回收率（%）89.687.286.783.083.282.989.187.088.892.494.294.6批間RSD(%)1.31.3平均回收率(%)95.094.489.689.889.790.991.190.787.187.387.6批內(nèi)RSD(%)3.83.95.37.37.57.56.76.97.58.68.67.60.3平均回收率(%)82.082.577.877.978.082.182.282.381.982.382.1批內(nèi)RSD(%)5.45.05.24.14.03.72.01.92.15.65.04.90.34結(jié)論超高效液相法檢測(cè)雞蛋中氟喹諾酮類藥物殘留，較普通高效液相法檢測(cè)方法更為簡(jiǎn)便快捷。以此方法檢測(cè)雞蛋中氟喹諾酮類藥物，前處理過(guò)程簡(jiǎn)單，使用試劑較少，且超高效液相檢測(cè)靈敏度更高，分析時(shí)間較短，同時(shí)，結(jié)果穩(wěn)定，重現(xiàn)性好，因此，該方法適用于雞蛋中氟喹諾酮類