豬偽狂犬病防控探討臨床篇

豬偽狂犬病防控探討

---臨床應(yīng)用篇陳家锃博士/主任150662538122017年8月22日當(dāng)前第1頁\共有43頁\編于星期四\9點個人介紹1、預(yù)防獸醫(yī)學(xué)博士，師從童光志所長、李一經(jīng)院長和田志軍研究員；2、從事高致病性藍耳病HuN4-F112的研制及大量的臨床試驗工作；3、參加國家中長期項目（2008-2020），豬瘟和偽狂犬凈化工作；當(dāng)前第2頁\共有43頁\編于星期四\9點2011年所在團隊最早發(fā)現(xiàn)了豬偽狂犬變異株，并開展疫苗的研制和偽狂犬疾病的防控工作國際首次報道IF7.327國內(nèi)首次報道VirulentPseudorabiesvirus(vPRV)（超強毒）PseudorabiesVirusVariant（變異株）當(dāng)前第3頁\共有43頁\編于星期四\9點目前主要從事豬病的臨床防控及實驗室診斷工作擅長的領(lǐng)域：豬場的免疫程序評估及調(diào)整豬疫苗評估的動物實驗設(shè)計病毒性疾病診斷及綜合防控當(dāng)前第4頁\共有43頁\編于星期四\9點每個豬場都面臨偽狂犬感染的威脅不同豬場和感染的不同階段的表現(xiàn)如何通過實驗室確診和防控偽狂犬如何科學(xué)地發(fā)揮偽狂犬疫苗的作用偽狂犬“五步法轉(zhuǎn)陰”及注意事項主要內(nèi)容當(dāng)前第5頁\共有43頁\編于星期四\9點一、每個豬場都面臨偽狂犬感染的威脅偽狂犬病毒的特性：1、病毒對外界的抵抗力強從發(fā)病豬排泄的病毒，37℃10天，25℃40天，15℃120天仍存活；2、偽狂犬的中間宿主多，散毒方式多樣豬最具耐受性，是自然界病毒唯一的貯存宿主。此外，牛、羊、馬、狗、貓、鼠等都能被偽狂犬病毒感染并散毒體內(nèi)可在多個臟器內(nèi)繁殖，繁殖快。散毒途徑多樣，可通過唾液、精液等方式散毒當(dāng)前第6頁\共有43頁\編于星期四\9點自然感染的途徑：經(jīng)鼻感染和經(jīng)口感染空氣傳播老鼠的傳播蒼蠅的傳播虱子傳播妊娠豬感染給胎兒的途徑：交配時感染病毒的持續(xù)感染通過白血球傳送病毒（病毒血癥時間短，很難檢測到）通過神經(jīng)節(jié)傳播，很難防控病毒在初感染部位的鼻粘膜，咽喉頭粘膜，扁桃繁殖，其次在其附近的淋巴結(jié)繁殖。在上部呼吸道繁殖的病毒借助三叉神經(jīng)，嗅覺神經(jīng)，舌咽神經(jīng)到達中樞神經(jīng)，引起腦炎。增殖的病毒如果到達肺部，在肺部迅速繁殖，引起肺炎。當(dāng)前第7頁\共有43頁\編于星期四\9點少量的病毒即可感染大量排毒潛伏感染隱性感染3、病毒在豬體內(nèi)的特征：當(dāng)前第8頁\共有43頁\編于星期四\9點接種病毒量和感染成立（島田，2006）接種量豬頭數(shù)發(fā)熱（日數(shù)）ELISA抗體價1.1Log105-0.0082.1Log104+（3）0.5264.1Log104+（5.5）0.6946.1Log104+（7.3）0.8188.1Log103+（5.3）0.784偽狂犬病毒的最低感染劑量只有豬藍耳的1/30注：任何疾病都有感染的最小劑量，低于最小劑量后豬不會感染，更不會發(fā)病；當(dāng)前第9頁\共有43頁\編于星期四\9點仔豬感染后短時間內(nèi)會呈百萬倍地排毒PRV接種后病毒分離陽性率及病毒排泄量（島田，2006）

接毒后天數(shù)陽性率（%）12345678910NIA-2株鼻腔5/55/55/55/53/34/42/23/32/22/397口腔5/55/55/54/53/33/42/23/32/23/383直腸2/52/51/51/50/31/40/21/30/21/321膣/包皮1/53/52/53/50/31/40/21/30/21/332感染3-5天的口腔試子和鼻腔試子排毒量4.0-8.0Log10TCID50，感染8-17天的口腔試子排毒量5.9-8.3Log10TCID50，感染18-25天的口腔試子排毒量6.0Log10TCID50，高峰時空氣中的病毒量為5.3Log10TCID50按照極致計算，一頭豬感染后的3-5天的排毒量可以感染100萬頭生豬當(dāng)前第10頁\共有43頁\編于星期四\9點被感染豬不表現(xiàn)臨床癥狀，病毒粒子本身檢測不到，但感染豬終生帶毒。病毒的遺傳子潛伏在神經(jīng)細胞內(nèi)，當(dāng)免疫低下時，遺傳子再活性化引起在感染。被感染豬表現(xiàn)亞臨床癥狀，這種帶毒豬可持續(xù)一年以上排毒。

潛伏感染豬和隱性感染豬成為污染源當(dāng)前第11頁\共有43頁\編于星期四\9點侵入途徑1989年1-3月1989年4-6月合計（%）肥育豬的引進1736539.8繁殖豬的引進1041519.4豬的分群639458.3地域內(nèi)傳播777715428.4野生豬1891.7機械的傳播1010.2豬的死體0440.7不明10112222341.1其他0220.4PRV的侵入途徑---種豬引進和育肥豬散毒是已知的主要傳染源（美國農(nóng)務(wù)省的調(diào)查結(jié)果）一點式飼養(yǎng)散毒風(fēng)險大,偽狂犬陰性場引進后備必須經(jīng)過檢測確定為偽狂犬陰性!當(dāng)前第12頁\共有43頁\編于星期四\9點綜上所述，大多數(shù)豬場都存在偽狂犬發(fā)病的風(fēng)險；中小規(guī)模豬場的風(fēng)險尤為突出；小結(jié)偽狂犬病毒感染劑量低，中間宿主多，豬感染后排毒量巨大，進入豬場途徑多，豬場內(nèi)傳播快，公豬傳播途徑容易被忽視；當(dāng)前第13頁\共有43頁\編于星期四\9點變異株的流行導(dǎo)致發(fā)病率持續(xù)上升2011年以前，由于疫苗普遍接種（很多豬場仔豬只做一針的情況下）臨床典型病例已較少；配合鑒別診斷技術(shù)，很多豬場實現(xiàn)了偽狂犬轉(zhuǎn)陰或者凈化；當(dāng)前第14頁\共有43頁\編于星期四\9點變異株的流行導(dǎo)致發(fā)病率持續(xù)上升自2011年底自北向南豬場陸續(xù)出現(xiàn)偽狂犬；經(jīng)過鑒定不同省份分離的毒株都是高度同源的變異株；2011年底最初發(fā)生的省份至2015年偽狂犬變異株的分布當(dāng)前第15頁\共有43頁\編于星期四\9點PRVHeN1和S株對小鼠的LD50測定PRVHeN1和SC株Vero細胞培養(yǎng)液的毒價測定分別為107.6

TCID50/0.1mL;106.8TCID50/0.1mL。

將原液稀釋為106.0、105.0、104.0、103.0、102.0、101.0TCID50/0.1mL；30只5周齡BALB/c小鼠，隨機分為6組，每組5只，皮下注射各稀釋度病毒0.1mL；逐日觀察小鼠癥狀及死亡情況。

PRV-HeN1株對小鼠的LD50經(jīng)計算為102.4TCID50/只。

PRV-SC株對小鼠的LD50經(jīng)計算為103.8TCID50/只。變異株偽狂犬的致病力更強，致死劑量為國家校檢毒株SC株的1/30當(dāng)前第16頁\共有43頁\編于星期四\9點Tong,etal.,

Vet.Microbiol.181(2015)236–240.變異株對仔豬的致死率更高當(dāng)前第17頁\共有43頁\編于星期四\9點組別綿羊數(shù)疫苗株攻擊用毒株發(fā)病數(shù)死亡數(shù)保護數(shù)保護率A4免疫HeN12/42/42/450%B3未免疫HeN13/33/30/30C4免疫SC0/40/44/4100%D3未免疫SC3/33/30/30注：1、實驗設(shè)計、免疫劑量和攻毒劑量均參照BarthaK61疫苗質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)；2、綿羊?qū)慰袢腥臼侵滤佬缘?、免疫是單針肌注免疫現(xiàn)有質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的疫苗對變異株(HeN1)的攻毒保護效果欠佳當(dāng)前第18頁\共有43頁\編于星期四\9點2014年7月-2015年的檢測數(shù)據(jù)統(tǒng)計當(dāng)前第19頁\共有43頁\編于星期四\9點2016年檢測數(shù)據(jù)統(tǒng)計數(shù)據(jù)當(dāng)前第20頁\共有43頁\編于星期四\9點偽狂犬變異株的臨床癥狀變化初次感染場特別是野毒抗體陰性場，損失慘重。母豬以流產(chǎn)、死胎木乃伊胎為主；仔豬出生后3-5天神經(jīng)癥狀，腹瀉、嘔吐，死亡率100%；偽狂犬野毒抗體呈陰性豬場，迅速轉(zhuǎn)陽，一個月內(nèi)gE抗體陽率超過50%。感染后1年產(chǎn)房逐漸平穩(wěn)（但持續(xù)感染的影響在繼續(xù)）神經(jīng)癥狀比例減少，腹瀉比例增高；保育及育肥豬干咳及繼發(fā)感染嚴(yán)重；當(dāng)前第21頁\共有43頁\編于星期四\9點長期免疫抑制or傳胸混感？<1>可致死大量育肥中后期豬<2>母豬屢配不孕，返情率高<3>產(chǎn)房仔豬頑固持續(xù)性腹瀉<4>豬群精神抑郁具有攻擊性當(dāng)前第22頁\共有43頁\編于星期四\9點規(guī)?；瘓龊椭行∫?guī)模的豬場表現(xiàn)的問題不同規(guī)?；瘓鼍哂休^強的處置能力與診斷能力反復(fù)加強免疫種豬>4次/年，仔豬>3次/年加大劑量免疫種豬>3頭份/次，仔豬>2頭份/次實際效果：注射時應(yīng)激大，多次注射，操作麻煩；可控制臨床主要癥狀（如流產(chǎn)及仔豬神經(jīng)癥狀等），但偶有干咳、腹瀉等癥狀120-150日齡豬群轉(zhuǎn)陽率高居不下。當(dāng)前第23頁\共有43頁\編于星期四\9點中小規(guī)模場主要問題誤診為其他疾病呼吸道癥狀和繁殖障礙（母豬流產(chǎn)、返情）容易誤認(rèn)為是藍耳和圓環(huán)當(dāng)前第24頁\共有43頁\編于星期四\9點偽狂犬引起的腹瀉與PEDV癥狀相近，容易被經(jīng)驗所蒙蔽檢測中心二月份采集很多疑似PEDV的病料，最終檢測結(jié)果為偽狂犬引起的腹瀉當(dāng)前第25頁\共有43頁\編于星期四\9點近年來偽狂犬發(fā)病率高，帶毒率高，已成為危害我國生豬養(yǎng)殖的最重大疫病之一；偽狂犬病在呼吸道、消化道、繁殖障礙類疾病中的病原檢出率較高，部分癥狀與藍耳和PEDV類似；偽狂犬變異株發(fā)病重要的特點：必然的幾個階段：流產(chǎn)-木乃伊和神經(jīng)癥狀-頑固性腹瀉和育肥干咳-長期感染散毒導(dǎo)致育肥期豬群的死亡；感染后的豬場呈亞臨床發(fā)病，主要問題是仔豬頑固性腹瀉和保育及育肥豬干咳。小結(jié)當(dāng)前第26頁\共有43頁\編于星期四\9點三、如何利用實驗室檢測防控偽狂犬常用的偽狂犬檢測方法：ELISA：gB抗體，gE抗體中和抗體檢測病原檢測：普通PCR與熒光定量PCR病理切片當(dāng)前第27頁\共有43頁\編于星期四\9點三、如何利用實驗室檢測防控偽狂犬偽狂犬疫苗是少有的可通過抗體檢測區(qū)分野毒和疫苗毒的疫苗目前大多數(shù)偽狂犬疫苗是缺失gE基因的，因此疫苗免疫不會產(chǎn)生針對gE基因的抗體，因此可以通過鑒別診斷技術(shù)確定豬場的感染情況。那么檢出野毒抗體意味著什么？是不是豬群在發(fā)病或者仔豬感染？當(dāng)前第28頁\共有43頁\編于星期四\9點野毒抗體檢測的誤區(qū)陽性豬場檢母豬的抗體偽狂犬一旦感染終生帶毒，野毒抗體持續(xù)為陽性母豬，不可能通過免疫將野毒陽性的母豬轉(zhuǎn)陰，更不能因為母豬野毒抗體是陽性就判斷豬場有問題；陽性場90日齡之前的仔豬判斷為偽狂犬感染偽狂犬的母源抗體持續(xù)期長，母豬野毒抗體陽性仔豬必為陽性，但不能確診為野毒感染；當(dāng)前第29頁\共有43頁\編于星期四\9點野毒抗體檢測的應(yīng)用范圍接種PRVHeN1后，第5天部分豬PRVgE抗體開始陽轉(zhuǎn)，第7天全部陽轉(zhuǎn)。豬場檢測PRV野毒是否正在流行應(yīng)以檢測后備豬(14-18周)gE抗體為主，超過15%為正在流行。陽性的母豬可產(chǎn)出陰性的后備，通過這一指標(biāo)可評價疫苗的保護效果陽性場當(dāng)前第30頁\共有43頁\編于星期四\9點野毒抗體檢測的應(yīng)用范圍野毒陰性場可用于監(jiān)測新引進種豬：凡陽性必淘汰，剩余公豬可反復(fù)間隔2周檢測，均為陰性可用；仔豬按日齡采血，確定豬場的感染階段，采取針對性措施；當(dāng)前第31頁\共有43頁\編于星期四\9點普通PCR和熒光定量PCR樣品：扁桃體（持續(xù)帶毒），肺臟（呼吸道癥狀），腦組織（神經(jīng)癥狀），鼻腔試子（育肥期檢測），精液（如血清抗體gE陽性，必檢）感染壓力評估時用熒光定量PCR誤區(qū)：偽狂犬的病毒血癥期極短，血清樣本往往檢測不到病原；公豬精液的病原檢測容易被忽視病原檢測是測序的基礎(chǔ)病原檢測的誤區(qū)及應(yīng)用范圍當(dāng)前第32頁\共有43頁\編于星期四\9點四、偽狂犬疫苗的作用及正確應(yīng)用1、偽狂犬病疫苗可有效保護強毒的攻擊而免于臨床發(fā)病。2、弱毒疫苗的保護效果比滅活苗好且免疫持續(xù)期長3、偽狂犬活苗注射免疫會受到母源抗體的干擾，滴鼻免疫是有效的免疫途徑（1）不受母源抗體干擾；（2）建立黏膜免疫阻止病原經(jīng)過呼吸道傳播途徑；4、偽狂犬的母源抗體持續(xù)期特別長，在感染壓力比較大的場，為盡早肌注免疫，建議在妊娠中后期母豬不要免疫偽狂犬疫苗；5、偽狂犬是少有的幾個可以做緊急免疫的疫苗，斷奶后仔豬出現(xiàn)偽狂犬引起的干咳及腹瀉癥狀或瘙癢癥狀，緊急注射偽狂犬可有效縮短病程和發(fā)病率；6、對育肥豬注射偽狂犬疫苗，特別是一點式豬場；當(dāng)前第33頁\共有43頁\編于星期四\9點五、偽狂犬“五步轉(zhuǎn)陰”法當(dāng)前第34頁\共有43頁\編于星期四\9點偽狂犬溫和凈化的關(guān)鍵點1、疫苗株要能有效壓制散毒--不擴大感染壓力2、快速產(chǎn)生主動保護----通過佐劑縮短空窗期3、陽性母豬可產(chǎn)陰性后備------陰性后備補充4、控制公豬精液傳播----預(yù)防再次感染母豬群5、按照產(chǎn)次自然淘汰----逐漸降低豬群的風(fēng)險6、生物安全滅鼠工作----------保衛(wèi)凈化成果7、配套的檢測方法--------評估豬場感染壓力當(dāng)前第35頁\共有43頁\編于星期四\9點感染壓力分析保證后備的陰性陽性母豬隨產(chǎn)次自然淘汰定期抗體監(jiān)測12345偽狂犬“五步轉(zhuǎn)陰”步驟活躍度評估壓制散毒后備凈化期穩(wěn)定自然淘汰期驗收監(jiān)測期公豬淘汰及疫苗壓制（包括育肥）、生物安全當(dāng)前第36頁\共有43頁\編于星期四\9點野毒陽性數(shù)/樣本數(shù)野毒陽性率后備母豬34/4379.07%一產(chǎn)母豬82/10478.85%二產(chǎn)母豬45/5877.58%三產(chǎn)母豬33/5164.71%四產(chǎn)母豬16/2661.54%五產(chǎn)母豬17/2568%六產(chǎn)母豬26/4755.30%七產(chǎn)母豬59/8767.80%種公豬12/2646.15%母豬合計332/44173.02%合計344/46773.66%第一次種豬偽狂犬gE抗體檢測情況當(dāng)前第37頁\共有43頁\編于星期四\9點調(diào)整免疫程序后半年后檢測數(shù)據(jù)豬的種類檢驗總數(shù)抗體陰性數(shù)抗體陽性數(shù)野毒陽性率后備母豬192（累計）19200種公豬2516936%

一產(chǎn)母豬32718114644.65%二產(chǎn)母豬1883715180.32%三產(chǎn)母豬101208180.20%四產(chǎn)以上母豬82235971.96%合計91546943647.65%當(dāng)前第38頁\共有43頁\編于星期四\9點淘汰陽性種公豬后的結(jié)果野毒陽性數(shù)/樣本數(shù)野毒陽性率與凈化前同產(chǎn)次比較第一次配種母豬3/893.37%降75.7%一產(chǎn)母豬10/1168.62%降70.23%二產(chǎn)母豬23/13217.4%降60.18%三產(chǎn)+四產(chǎn)母豬（凈化前零產(chǎn)）167/26463.3%降0.33%五產(chǎn)母豬（凈化前一產(chǎn)）54/8169.2%六產(chǎn)母豬（凈化前二產(chǎn)）45/5976.