FISH技術(shù)檢測子宮頸上皮細胞hTERC基因擴增的臨床應(yīng)用研究課件

鄭州大學(xué)一附院喬玉環(huán)

FISH技術(shù)檢測子宮頸上皮細胞hTERC基因擴增的臨床應(yīng)用研究1編輯課件宮頸癌對中國婦女的高危害度中國婦女患宮頸癌比例15/10萬，是僅次于智利的宮頸癌高發(fā)國家我國目前宮頸癌患者約40萬人，每年新增患者15萬，居女性生殖道腫瘤首位我國宮頸癌死亡率為11.34%，居女性癌癥死亡率第二位，特別在西部地區(qū)，宮頸癌居女性癌癥死亡率之首近年來性傳播疾病使其迅速增加(性傳播疾病)2編輯課件我國宮頸癌治療現(xiàn)狀缺乏早期干預(yù)、阻止發(fā)展的有效手段仍是以手術(shù)和放療為主不同期別的宮頸癌還沒有確立一個規(guī)范化的治療標(biāo)準(zhǔn)3編輯課件看看這些英年早逝的藝人，她們死于宮頸癌……4編輯課件衛(wèi)生部2007年課題（WKJ2007-3-001）5編輯課件★課題負責(zé)人：北京大學(xué)魏麗惠教授★課題參加單位：全國36家醫(yī)院★鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院首批參加的醫(yī)院之一，負責(zé)人為喬玉環(huán)教授6編輯課件★宮頸癌仍居女性生殖道惡性腫瘤之首★致病元兇是高危型人乳頭瘤病毒（HPV）

★從感染高危型HPV至宮頸癌的發(fā)生通常需要一個相對較長的時間研究背景7編輯課件持續(xù)性HPV感染細胞分化失調(diào)控宮頸上皮內(nèi)瘤變CINCIN1CIN2CIN3宮頸癌

Normal宮頸癌篩查和預(yù)防的前提和基礎(chǔ)

8編輯課件65%自行消退20%持續(xù)存在15%進展CINⅠ的轉(zhuǎn)歸？？9編輯課件1宮頸癌前病變和早期宮頸癌的有效篩查2尋找能預(yù)測CIN“逆轉(zhuǎn)”或持續(xù)進展為宮頸癌的可靠指標(biāo)本領(lǐng)域的研究熱點

10編輯課件宮頸病變篩查技術(shù)

–最佳方案

液基細胞學(xué)檢查（TCT）宮頸病變篩查方案

高危型HPV-DNA檢測11編輯課件TCT敏感性低（55%-75%）重復(fù)性差

HPV敏感度高陽性預(yù)測值低，大多HPV陽性患者自然轉(zhuǎn)陰

宮頸病變篩查技術(shù)的不足

需要尋找新的有效檢測指標(biāo)或手段

12編輯課件人類染色體末端酶（hTERC）基因1995年由Feng等首次從腎癌293細胞系cDNA文庫中篩選出，定位于3q26.3hTERC基因擴增可使細胞永生化，導(dǎo)致腫瘤產(chǎn)生宮頸細胞由非典型性增生向?qū)m頸癌轉(zhuǎn)變的過程中幾乎都伴有3號染色體長臂（3q）的擴增對宮頸癌染色體不穩(wěn)定的研究也顯示，常見染色體3q的增加，其中，涉及到的最重要的基因hTERC基因13編輯課件hTERC基因擴增是宮頸癌變過程中的早期事件學(xué)者Heselmeyer等首次檢測宮頸細胞涂片中的hTERC基因，發(fā)現(xiàn)hTERC基因擴增隨細胞學(xué)病變的嚴(yán)重程度而增加，可作為預(yù)測宮頸高度病變的獨立指標(biāo)。我們研究組的初步研究結(jié)果表明，hTERC的擴增率與宮頸病變嚴(yán)重程度密切相關(guān)，在宮頸癌篩查中，可彌補TCT和HC2檢測HPVDNA的不足

。cc.ppt14編輯課件資料與方法15編輯課件研究對象

2007.09～2008.11宮頸病變120例120.ppt慢性宮頸炎33例CIN70例cin.ppt宮頸癌17例

年齡18～56歲，平均年齡37.4±7.3歲16編輯課件研究方法

熒光原位雜交（fluorescenceinsituhybridization，F(xiàn)ISH）GLPTERC/CSP3探針由北京金菩嘉醫(yī)療科技有限公司提供，按探針試劑盒說明進行操作

17編輯課件結(jié)果分析hTERC探針：GLP探針，標(biāo)記紅色熒光對照探針：CSP3探針，標(biāo)記綠色熒光正常細胞判斷：單個間期細胞紅色及綠色信號各2個異常細胞判斷：紅色信號大于2個，且綠色信號不少于2個為hTERC基因擴增異常細胞18編輯課件結(jié)果判定閾值建立：采集20例正常宮頸細胞，使用上述方法進行FISH實驗，每例至少分析100個細胞，統(tǒng)計出現(xiàn)hTERC基因異常擴增細胞數(shù)目的百分比。

閾值=平均數(shù)（M）+3×標(biāo)準(zhǔn)差（SD）本研究閾值為7.1%

陽性結(jié)果判定每例樣本隨機計數(shù)100個細胞，計算其中hTERC基因異常擴增細胞的百分比，如果百分比大于閾值，判定為陽性結(jié)果；如果小于閾值，判定為陰性結(jié)果；如果等于閾值，加大觀測樣本細胞數(shù)目。19編輯課件統(tǒng)計方法

采用SPSS13.0統(tǒng)計軟件包，各組計數(shù)資料結(jié)果采用χ2檢驗及Fisher確切概率法。檢驗水準(zhǔn)α=0.05。20編輯課件結(jié)果21編輯課件一、各組宮頸病變中hTERC基因擴增陽性率比較22編輯課件病變病理例數(shù)(n)hTERC基因擴增結(jié)果統(tǒng)計量值及P值陽性數(shù)陽性百分比慢性宮頸炎33618.19%χ2=41.415P=0.000CIN114214.29%CIN217635.29%CIN3392871.79%宮頸癌171694.12%表1各組宮頸病變患者宮頸脫落細胞中hTERC基因擴增陽性率比較23編輯課件

二、TCT和檢測hTERC基因擴增診斷宮頸高度病變的比較

24編輯課件組織學(xué)確診為宮頸高度病變73例（17例CIN2，39例CIN3和17例宮頸癌），其中，TCT結(jié)果≥ASCUS者46例，而TCT結(jié)果≥ASCUS者共62例中，有46例患者組織學(xué)確診為宮頸高度病變因此，TCT診斷宮頸高度病變的敏感性為63.01%（46/73），特異性為75.81%（46/62）

TCT25編輯課件73例組織學(xué)確診為宮頸高度病變患者中，宮頸脫落細胞中hTERC基因擴增50例

，而hTERC基因擴增的58例患者中，50例確診為宮頸高度病變，

因此，hTERC基因擴增診斷宮頸高度病變的敏感性為68.49%（50/73）

，特異性為86.20%（50/58）。

hTERC基因擴增26編輯課件三、高危型HPV-DNA檢測和hTERC基因擴增診斷宮頸高度病變的比較27編輯課件高危型HPV-DNA檢測組織學(xué)確診為宮頸高度病變的73例患者中，高危型HPVDNA陽性患者66例，而HPVDNA陽性者共106例中，有66例患者組織學(xué)確診為宮頸高度病變，因此，高危型HPV-DNA檢測診斷宮頸高度病變的敏感性為90.41%（66/73），特異性為62.26%（66/106）。

前已述及，hTERC基因擴增診斷宮頸高度病變的敏感性為68.49%

，特異性為86.20%。

28編輯課件圖1：慢性宮頸炎細胞hTERC基因的表達，可見2個紅色信號紅色信號：GLPhTERC；綠色信號：CSP3(FISH法100倍)

29編輯課件圖3宮頸癌細胞hTERC基因的異常擴增可見4個紅色信號紅色信號：GLPhTERC；綠色信號：CSP3(FISH法100倍)30編輯課件1hTERC基因擴增在宮頸癌的發(fā)生發(fā)展中起重要作用，在一定程度上可反映宮頸病變的惡性程度2FISH檢測宮頸脫落細胞hTERC基因擴增對診斷宮頸高度病變具有較高的敏感度和特異度，可彌補目前宮頸癌篩查中的不足結(jié)論31編輯課件國內(nèi)外學(xué)者也取得了相似的結(jié)論32編輯課件國外

HeselmeyerHaddad等首次應(yīng)用FISH技術(shù)檢測宮頸脫落細胞hTERC基因擴增，發(fā)現(xiàn)低度病變（LSIL）中hTERC陽性率為7%，高度病變（HSIL）為76%，四倍體細胞數(shù)和hTERC表達水平隨病變的嚴(yán)重程度而增加，認為hTERC檢測可作為篩查HSIL的獨立指標(biāo)。對這些病例隨訪發(fā)現(xiàn)，所有進展為CIN3或?qū)m頸癌的CIN1/2患者都伴有hTERC擴增，而自愈的CIN1/2患者沒有發(fā)現(xiàn)hTERC擴增，表明檢測hTERC基因擴增可作為預(yù)測病情進展的指標(biāo)。AmJPathol,2003,

33編輯課件hTERC檢測臨床意義正常、ASCUS和CIN1樣本很少有TERC拷貝數(shù)的增加，63％CIN2和76％CIN3樣本顯示TERC拷貝數(shù)增加區(qū)分CIN2和CIN3與正常、ASCUS,及CIN1的靈敏度和特異性超過90%（區(qū)分宮頸細胞高度癌前病變與低度癌前發(fā)育異常）伴有hTERC基因擴增的癌前病變的病人有52%－96%的惡變可能。可預(yù)測CIN1/CIN2向CIN3發(fā)展的風(fēng)險因素，其靈敏度是100%，特異性是70%.

FISH是進行宮頸癌篩查，早期診斷和風(fēng)險預(yù)測的有效手段(AJPApril2005,Vol.166,No.4)34編輯課件有效進行子宮頸癌前病變的病理分級

——國內(nèi)魏麗惠教授TBS分級正常/炎癥ASCUSASC-HLSILHSILTERC基因擴增發(fā)生率（%）4.613.528.625.287.7病理分級正常/炎癥CIN1CIN2CIN3原位癌TERC基因擴增發(fā)生率（%）4.27.369.285.195.7IGCS2008會議報告，中國醫(yī)學(xué)論壇報報道35編輯課件1宮頸癌篩查、早期診斷的新途徑和手段

2探索預(yù)測CIN發(fā)展到宮頸癌的新手段

3迎來宮頸癌防治領(lǐng)域的又一次飛躍

hTERC基因36編輯課件專家點評hTERC基因

中華婦產(chǎn)科學(xué)會主委郎景和教授認為：在TCT檢查和HPV檢測篩查宮頸癌的同時，檢測hTERC基因擴增，有望成為協(xié)助宮頸癌及癌前病變診斷及預(yù)測癌前病變是否向?qū)m頸癌進展的重要指標(biāo)，從而造福廣大婦女。2008年，美國安德森癌癥研究中心研究表明，hTERC基因擴增與宮頸高度病變和宮頸鱗癌密切相關(guān)。37編輯課件CINⅠ的處理

——北京大學(xué)人民醫(yī)院魏麗惠教授很多學(xué)者認為《2002年ASCCP方案》存在對CINⅠ的過度治療，近年來大量臨床資料證實CIN未經(jīng)治療即有較高的自然消退率，CINⅠ60%-90%在1-2年內(nèi)逆轉(zhuǎn)，而且癌變的幾率極低。因此，對于無癥狀、細胞學(xué)為ASCUS和LSIL，即使轉(zhuǎn)化區(qū)不可見，也不用頸管刮宮，也不必錐切或LEEP，建議嚴(yán)格隨訪。物理治療并不能避免宮頸發(fā)生上皮內(nèi)瘤變(CIN)或早期癌(ECC)，趙昀等報道的診斷為CINⅢ中，9例曾接受過宮頸物理治療后宮頸表面光滑，說明物理治療并不能避免CIN的發(fā)生。——來自《中國婦產(chǎn)科網(wǎng)》38編輯課件隨訪（涂片、HPV）≥Asc-us或HPV（+）連續(xù)二次涂片（-）HPV（-）合并宮頸糜爛等陰道鏡檢每年隨診物理治療LEEPCIN1持續(xù)