醫(yī)學(xué)專題-海參皂苷消化吸收特性探究

海參皂苷的消化吸收特性(tèxìng)的研究負(fù)責(zé)人：宋姍姍組員：王夢(mèng)飛、朱詩(shī)怡、于鵬凱所在(suǒzài)院系：食品科學(xué)與工程學(xué)院專業(yè)年級(jí)：食品科學(xué)與工程10級(jí)指導(dǎo)教師：王玉明實(shí)驗(yàn)時(shí)間：2012年4月至2013年4月第一頁(yè)，共十三頁(yè)。編輯ppt實(shí)驗(yàn)(shíyàn)目的研究海參皂苷的消化吸收特性，為深入研究海參皂苷的藥理活性機(jī)制及新型相關(guān)功能性保健食品研發(fā)提供支持。通過(guò)該實(shí)驗(yàn)，熟悉(shúxī)了解一些基本的實(shí)驗(yàn)技能和實(shí)驗(yàn)儀器的使用。第二頁(yè)，共十三頁(yè)。編輯ppt實(shí)驗(yàn)支撐(zhīchēng)條件本實(shí)驗(yàn)以食品科學(xué)與工程學(xué)院——人類健康實(shí)驗(yàn)室為依托，該實(shí)驗(yàn)室近年在海參加工和活性物質(zhì)研究方面具有豐富的經(jīng)驗(yàn)和雄厚的前期基礎(chǔ)。人類健康實(shí)驗(yàn)室具備本實(shí)驗(yàn)所需以下儀器：動(dòng)物實(shí)驗(yàn)設(shè)備（飼養(yǎng)室、鋼絲籠），高效液相色譜-質(zhì)譜（HPLC-MS/MS），基本的生化學(xué)試劑和有機(jī)溶劑。王玉明教授對(duì)海參的營(yíng)養(yǎng)與活性、海參營(yíng)養(yǎng)保持技術(shù)有深入的研究，具有較強(qiáng)的科研(kēyán)教學(xué)經(jīng)驗(yàn)。第三頁(yè)，共十三頁(yè)。編輯ppt實(shí)驗(yàn)(shíyàn)內(nèi)容1、海參(hǎishēn)粗皂苷的提取根據(jù)海參(hǎishēn)皂苷的化學(xué)性質(zhì)，利用乙醇浸提法提取海參(hǎishēn)干粉中總皂苷，并進(jìn)一步經(jīng)過(guò)水飽和正丁醇萃取和大孔樹(shù)脂純化后得到總海參(hǎishēn)皂苷。2、海參皂苷溶液的配制將1800mg海參總皂苷溶解于36ml生理鹽水中，配成溶液，備用。第四頁(yè)，共十三頁(yè)。編輯ppt實(shí)驗(yàn)(shíyàn)內(nèi)容3、動(dòng)物實(shí)驗(yàn)3.1高劑量(jìliàng)皂苷單體EA灌胃大鼠實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)組7組*5只對(duì)照組4組*3只對(duì)照組4組*3只每只注射1ml皂苷溶液，劑量為50mg/只每只注射1ml生理鹽水0、2、4、6、8、11h時(shí)對(duì)實(shí)驗(yàn)組的一組大鼠主動(dòng)脈取全血處死0、2、8、11h對(duì)對(duì)照組的一只大鼠主動(dòng)脈取全血處死另外，將實(shí)驗(yàn)各組大鼠消化道完整分離，收集消化道內(nèi)容物，將8、11h實(shí)驗(yàn)組及對(duì)照組的大鼠放入代謝籠，收集其糞便和尿液。第五頁(yè)，共十三頁(yè)。編輯ppt實(shí)驗(yàn)(shíyàn)內(nèi)容3、動(dòng)物(dòngwù)實(shí)驗(yàn)3.2低劑量皂苷單體EA灌胃大鼠實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)組7組*3只每只注射1ml皂苷溶液，劑量為15mg/只0、0.5、1、2、3、4、7、9、11、24h時(shí)對(duì)實(shí)驗(yàn)組的一組大鼠主動(dòng)脈取全血處死另外，將實(shí)驗(yàn)各組大鼠消化道完整分離，收集消化道內(nèi)容物，將8、12、24h實(shí)驗(yàn)組及對(duì)照組的大鼠放入代謝籠，收集其糞便和尿液。第六頁(yè)，共十三頁(yè)。編輯ppt實(shí)驗(yàn)(shíyàn)內(nèi)容4、血清皂苷單體EA液質(zhì)檢測(cè)(jiǎncè)方法的確定4.1血清樣本的前處理（反相C18固相萃取柱萃取法）240μl血清加入360μl無(wú)水乙醇加入超純水10ml甲醇和10ml水活化固相萃取柱將樣品經(jīng)固相萃取小柱將乙醇濃度稀釋到10%1200r離心5min5ml水洗脫上清液混勻100μL色譜純甲醇溶解提取物40℃旋蒸至干收集甲醇洗脫液10ml甲醇洗脫進(jìn)樣HPLC-MS/MS檢測(cè)分析第七頁(yè)，共十三頁(yè)。編輯ppt實(shí)驗(yàn)(shíyàn)內(nèi)容4.1血清樣本的前處理（反相(fǎnxiānɡ)C18固相萃取柱萃取法）第八頁(yè)，共十三頁(yè)。編輯ppt實(shí)驗(yàn)(shíyàn)內(nèi)容4.2實(shí)驗(yàn)確定皂苷單體HPLC-MS/MS檢測(cè)分析條件液相色譜條件：ZorbaxSB-C18色譜柱（4.6mm×250mm,5μm）；流速：1.0mL/min；進(jìn)樣量：20μl；柱溫：30℃；流動(dòng)相：A：乙腈，B：0.1%磷酸水溶液；梯度模式：時(shí)間梯度：0→5→30→35min濃度梯度：30%→30%→50%→30%溶劑A質(zhì)譜條件：電噴霧離子化，負(fù)離子模式檢測(cè)；進(jìn)入(jìnrù)質(zhì)譜流動(dòng)相分流至0.5mL/min；細(xì)管電壓3.0kV；錐孔電壓35V；離子源溫度80℃；干燥氣溫度150℃；質(zhì)量掃描范圍m/z200～2000；霧化氣（N2）流速15L/h；干燥氣（N2）流速11.0L/h；EA單體MRM模式檢測(cè)m/z=591.4。第九頁(yè)，共十三頁(yè)。編輯ppt實(shí)驗(yàn)(shíyàn)結(jié)果1、高劑量皂苷單體EA消化吸收曲線實(shí)驗(yàn)(shíyàn)初步確定高劑量及低劑量皂苷單體EA的消化吸收曲線，如下：第十頁(yè)，共十三頁(yè)。編輯ppt實(shí)驗(yàn)(shíyàn)結(jié)果2、低劑量皂苷單體(dāntǐ)EA消化吸收曲線第十一頁(yè)，共十三頁(yè)。編輯ppt實(shí)驗(yàn)(shíyàn)結(jié)果3、血清皂苷單體EA的液質(zhì)分析方法回收率檢驗(yàn)

取空白血清，加入一定濃度的標(biāo)準(zhǔn)品，使血清中EA的濃度分別為0.6μg/mL、10μg/mL、20μg/mL，用測(cè)定(cèdìng)樣品的方法對(duì)標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行檢測(cè)，測(cè)定(cèdìng)方法回收率為89.4%，95.7%，92.4%，證明該分析方法準(zhǔn)確性良好。第十二頁(yè)，共十三頁(yè)。編輯ppt內(nèi)容(nèiróng)總結(jié)海參皂苷的消化吸收特性的研究。實(shí)驗(yàn)時(shí)間：2012年4月至2013年4月。每只注射1ml皂苷溶液，劑量為15mg/只。10ml甲醇(jiǎchún)和10ml水活化固相萃取柱。進(jìn)