還原葉酸載體基因多態(tài)性與兒童ALL易感性的關(guān)系研究

還原葉酸載體基因多態(tài)性與兒童ALL易感性的關(guān)系研究

楊麗華

余晶

王斌南方醫(yī)科大學(xué)珠江醫(yī)院兒科中心研究背景急性淋巴細胞白血?。╝cutelymphoblasticleukemia，ALL）為最常見的兒童惡性腫瘤，約占25-30%

病毒感染基因環(huán)境病因？現(xiàn)普遍認為，ALL的發(fā)生為基因-環(huán)境相互作用所致理化因素遺傳素質(zhì)暴露于相同危險環(huán)境因素的兒童,其ALL發(fā)病的差異是由遺傳易感性（susceptibility）來決定的危險環(huán)境

CancerCancer-free基因多態(tài)性Susceptibility:Metabolism,DNAdamage&repair…RFC5-MeTHF圖1.葉酸代謝途徑Dhillonetal.MutatRes2009;665:1-6葉酸代謝相關(guān)基因的多態(tài)性

影響細胞的葉酸代謝

干擾正常DNA合成和甲基化ALL？（Reducedfolatecarrier,

RFC）還原葉酸載體還原葉酸載體基因RFC1位于21q22.2-q22.3,編碼一個含591個氨基酸的完整的膜蛋白,包含12個跨膜區(qū)(transmembranedomain，TMD)還原葉酸載體分生結(jié)構(gòu)第2外顯子第80位核苷酸具有高頻率的A

→G多態(tài)可引起第27位密碼子His→Arg多態(tài)性①與正常人群的血漿葉酸和同型半胱氨酸水平有關(guān)②可能影響兒童ALL的遺傳易感性、療效、預(yù)后等特性研究目的了解在健康兒童和ALL白血病兒童中RFC180位點基因型分布特征探討RFC1A80G多態(tài)性與兒童ALL易感性之間的關(guān)系研究對象

ALL組

45例，2008.10-2010.2兒科和血液內(nèi)科住院的初治ALL兒童。男28例，女17例，年齡1-16歲，中位年齡5.53歲。

對照組

70例，同期門診體檢健康兒童。男45名，女25名，年齡1-14歲，中位年齡5.31歲。兩組均為華南地區(qū)出生漢族兒童

研究方法1.采集外周靜脈血，抽提基因組DNA2.PCR擴增3.DNA片段大小檢測及回收純化4.DNA測序5.統(tǒng)計學(xué)處理結(jié)果500bp400bp300bp200bp150bp100bp50bp140bp

M1234567圖2RFC1基因第2外顯子含80片段PCR產(chǎn)物2%瓊脂糖凝膠電泳M：Marker1-7：分別為ALL標(biāo)本1-7A

BC圖2

RFC1基因第2外顯子含80片段的測序圖A.野生型(His27His)：CACB.雜合子突變型(His27Arg)：CNC(N代表A/G雜合)

C.純合子突變型(Arg27Arg)：CGC組別GGGAAAχ2P觀察值期望值觀察值期望值觀察值期望值A(chǔ)LL組76.42021.21817.40.1340.71對照組1820.64034.71214.61.6031.21表1RFC180基因型分布及Hardy-Weinberg平衡檢驗擬合優(yōu)度χ2檢驗結(jié)果：兩組人群均符合H-W遺傳平衡(df=2，P>0.05)，說明這兩個研究人群來自大的群體，不存在明顯的自然選擇、遷移等因素對遺傳平衡的影響組別例數(shù) 基因型頻率GGAGAAALL組457（15.6）20（44.4）18（40.0）*對照組7018（25.7）40（57.1）12（17.1）*ALL組與對照組相比，χ2=7.633，P=0.02表2兩組RFC1基因80位點基因型頻率分布表3兩組RFC基因80位點G、A等位基因頻率分布組別例數(shù)等位基因頻率

GAALL組4534（37.8）56(62.2)*對照組7076（54.3）64(45.7)*ALL組與對照組相比，χ2=5.983，P=0.01兩組RFC180各種基因型頻率的分布差異具有統(tǒng)計學(xué)意義兩組RFC180等位基因A頻率差異具有統(tǒng)計學(xué)意義

基因型ALL組（%）對照組（%）OR值（95%CI）OR值*（95%CI）GG7（15.6）18（25.7）1.001.00GA20（44.4）40（57.1）1.29（0.46-3.58）1.23（0.44-3.46）AA18（40.0）12（17.1）3.86（1.24-12.04）4.15（1.29-13.38）AG+AA38(84.4)52(74.3)1.88（0.71-4.95）1.87（0.71-4.93）表4RFC180多態(tài)性與兒童ALL易感性的logistic回歸分析*OR*（95%CI）經(jīng)過年齡和性別校正在調(diào)整了年齡、性別因素后，攜帶RFC180AA基因型的兒童較80GG攜帶者患ALL的風(fēng)險增加4.15倍討論（1）華南地區(qū)漢族健康兒童的RFC180A等位基因頻率為45.7%

中國南方人群47.9%美國健康兒童62%英國健康兒童59%ReltonCL,

etal2004裴麗君2004deJongeR,

etal2009RFC1A80G多態(tài)性頻率特征在不同種族或地域的人群間有不同差異討論（2）

RFC180AA可顯著性增加兒童ALL的患病風(fēng)險一方面，位于TMD1內(nèi)的組氨酸堿性相對較弱，可改變RFC轉(zhuǎn)運功能，引起葉酸攝取率

以及甲硫氨酸循環(huán)中的Hcy，致使該循環(huán)轉(zhuǎn)甲基能力

（Whetstineetal,2001）另一方面，含RFC180A等位基因的個體的淋巴細胞微核率較其它基因型者明