身體功能訓(xùn)練對體育院校武術(shù)套路學(xué)生相關(guān)身體素質(zhì)及專項技術(shù)影響的實驗研究碩士論文答辯

揚州大學(xué)碩士學(xué)位論文答辯論文題目：

身體功能訓(xùn)練對體育院校武術(shù)套路學(xué)生相關(guān)身體素質(zhì)及專項技術(shù)影響的實驗研究

研究生：宋遠(yuǎn)鳳研究方向：民族傳統(tǒng)體育科學(xué)

指導(dǎo)教師：邱瑞瑯教授

2015年5月?lián)P州內(nèi)容研究對象、方法與內(nèi)容

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選題依據(jù)4結(jié)論與建議5致謝研究對象研究目的與意義2

據(jù)調(diào)查，成人的NAFLD發(fā)病率為20%～33%，女性患者要明顯高于男性，兒童患病率為2.6%，肥胖或2型糖尿病患者中NAFLD發(fā)病率達(dá)到75%，其中在肥胖的兒童中的患病率為52.8%，不同的人種的患病率也存在很大的差異。近年來，我國的NAFLD發(fā)病率明顯上升，已僅次于病毒性肝炎成為第二大肝病，NAFLD已經(jīng)嚴(yán)重地影響到我國人民的健康和生活水平。1.研究背景ANPANPANPANPANPANPANPANPANPANPANPANPANPANPANPANPANPANPANPANP肝臟脂肪代謝障礙ANP胰島素抵抗（IR）ANP各種原因如肥胖脂代謝紊亂等2型糖尿病游離脂肪酸增加肝細(xì)胞內(nèi)TG增加而輸出量又減少肝細(xì)胞脂肪變性二次打擊目前對NAFLD研究很多，但其發(fā)病具體機制尚未清楚，目前對NAFLD發(fā)病機制主要的觀點還是

“二次打擊假說”為主。

（1）二次打擊假說：

（2）非酒精性脂肪肝與胰島素抵抗（IR）：

IR引起NAFLD的主要原因是脂質(zhì)過多和高胰島素血癥。發(fā)生IR時脂蛋白脂酶活性及脂肪合成能力減弱，導(dǎo)致脂肪組織分解釋放出FFA增多，并進(jìn)入肝臟組織，使得肝臟組織中TG的合成明顯增多，TG在微粒體轉(zhuǎn)運蛋白(MTP)催化的反應(yīng)中，與載脂蛋白結(jié)合轉(zhuǎn)化為VLDL,當(dāng)TG的形成超過其輸出以及VLDL的合成障礙時，就會影響其轉(zhuǎn)運，過多的TG便蓄積在肝內(nèi)，于是就形成脂肪肝。

（3）非酒精性脂肪肝與脂質(zhì)代謝異常

脂肪酸攝入肝臟內(nèi)過多，而肝臟內(nèi)合成脂蛋白代謝發(fā)生障礙，F(xiàn)FA通過激活信號通路誘導(dǎo)肝細(xì)胞發(fā)生凋亡，使得肝細(xì)胞的脂質(zhì)排泄速度受限，脂質(zhì)就會出現(xiàn)沉積，過多的脂質(zhì)沉積導(dǎo)致脂肪肝的發(fā)生。（4）非酒精性脂肪肝與氧化應(yīng)激和脂質(zhì)過氧化損傷

外源性高脂飲食使血清FFA增加，使線粒體β氧化速度加快，進(jìn)而增加了活性氧(ROS)的產(chǎn)出。當(dāng)肝細(xì)胞內(nèi)活性氧（ROS）的產(chǎn)生及其作用超過SOD、GSH、維生素E抗氧化體統(tǒng)清除自由基能力時，便產(chǎn)生氧應(yīng)激導(dǎo)致過氧化損傷，當(dāng)肝細(xì)胞氧化應(yīng)激反應(yīng)所產(chǎn)生的損害超過肝臟自身防御能力時，會導(dǎo)致肝臟NAFLD的發(fā)生。

（5）其他因素對脂肪肝的影響：

經(jīng)研究表明脂肪肝與人體的瘦素、脂聯(lián)素、TNF-a、細(xì)胞性內(nèi)毒素等細(xì)胞因子有著密切的關(guān)系。1.2有氧運動對非酒精性脂肪肝的影響和機制

目前已有研究證明,耐力性運動對脂肪肝的預(yù)防和延緩具有重要的作用。不同運動強度對肝臟脂質(zhì)及脂肪病變的影響,有明顯的預(yù)防效果。多數(shù)研究都集中在運動對脂肪肝預(yù)防作用方面,而運動對脂肪肝治療方面的研究報道較少。

（1）有氧運動對非酒精性脂肪肝的影響（2）有氧運動對改善非酒精性脂肪肝的機制（3）有氧運動可以改善脂質(zhì)代謝（4）有氧運動可以改善胰島素抵抗（5）有氧運動可以改善機體抗氧化能力

1.4消脂散對非酒精性脂肪肝的影響和機制

（1）調(diào)節(jié)血脂代謝，改善IR。（2）降低血清和肝臟MDA含量,增強紅細(xì)胞和肝臟SOD的活性,同時增強GSH的活性,從而提高抗氧化能力,抑制脂質(zhì)過氧化物,預(yù)防脂質(zhì)代謝紊亂。（3）保護SOD活性和抑制氧化低密度脂蛋白的形成發(fā)揮減輕氧化脂蛋白中的MDA和氧化低密度脂蛋白對肝細(xì)胞損傷的作用。

1.5PPAR-α在脂肪肝發(fā)病中的作用

（1）降低中性脂質(zhì)在高密度脂蛋白和極低密度脂蛋白之間的交換，促進(jìn)低密度脂蛋白的清除；（2）增加脂蛋白酯酶的活性，促進(jìn)TG的分解；（3）減少脂肪酸、甘油三酯和極低密度脂蛋白的產(chǎn)生；（4）調(diào)控β氧化過程中脂肪酸代謝酶的基因轉(zhuǎn)錄，上調(diào)脂肪酸氧化相關(guān)蛋白的基因表達(dá)，下調(diào)脂質(zhì)合成的基因；

2、研究對象與方法2.1研究對象

選用清潔級5周齡雄性SD大鼠（南京青山實驗動物研究中心提供）60只，體重140g-160g。動物合格證號為：Sexk(浙20080033)2.2運動方式

HE組與HZE組大鼠每天進(jìn)行60min無負(fù)重有氧游泳運動，游泳缸體積為150×60×70cm3，水深60cm,內(nèi)壁光滑，水溫31±1℃，HE組與HZE組適應(yīng)性游泳1周，第一天游泳10min，以后每天遞增10min至60min，第二周開始每天游泳60min，每周6次，直至游滿10周。

2.3高脂飼料與“消脂散”的配方及用量

高脂飼料配方的組成:80.5%的基礎(chǔ)飼料，14%的豬油，2%的膽固醇，0.5%的膽鹽，3%的麻油，購于南通立默生物科技有限公司。消脂散配方的組成:制何首烏、山楂、白術(shù)、澤瀉、柴胡、水侄（炒）、冬瓜皮、荷葉、決明子、生大黃、黃芪、三七。在每次訓(xùn)練的上午，對HZ組和HZE組大鼠以1ml/100gBW（濃度為0.8g/ml）劑量的中藥灌胃，其余各組灌服等量的生理鹽水。2.3生化指標(biāo)測試

為避免急性運動的影響，大鼠運動后24小時后取樣，取樣前一天，大鼠均禁食12小時，自由飲水。大鼠用2％的戊巴比妥鈉50mg/kg腹腔注射麻醉，腹主動脈取血，各組大鼠取血后迅速取部分肝大葉組織，迅速放于經(jīng)0.1%DEPC處理的無RNA污染的去離子水中，漂洗去血漬，立即放入液氮中冷凍，-70℃保存，預(yù)備測肝臟的各項指標(biāo)和預(yù)備作RT-PCR。

3熒光定量PCR法測定大鼠肝臟PPAR-αmRNA的表達(dá)

3.1肝臟組織總RNA的制備

熱變性引物退火延伸反應(yīng)SYBRGreenI染料法——作用機理

2.4PPAR-α擴增引物設(shè)計

2.5反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)

2.6實時熒光定量PCR反應(yīng)

實事熒光定量PCR反應(yīng)按照TaKaRa公司生產(chǎn)的SYBRPremixExTapTM要求進(jìn)行，具體反應(yīng)體系如下（20μl）：2.7RNA的提取結(jié)果

RNA的提取結(jié)果如圖所示，通過甲醛變性膠檢測后，提取的RNA完整性好，沒有降解，可以進(jìn)行下一步操作。

3.110周實驗前后4組大鼠體重變化3、研究結(jié)果與討論

通過雙因素方差分析，從第2周開始一直到第5周，HF組體重均高于C組，但是從第5周開始，HF組體重均低于C組，在6-9周齡運動可以顯著降低大鼠體重，而“消脂散”以及有氧運動聯(lián)合消脂散可以降低大鼠體重，但是差異不顯著。3.210周實驗前后4組實驗大鼠肝臟重量和肝指數(shù)

與C組相比高脂膳食組使得大鼠肝臟重量顯著增加。而有氧運動和“消脂散”均能有效地抑制大鼠肝臟重量的增加并且有氧運動和“消脂散”有明顯的交互作用。與C組相比，高脂膳食使得大鼠肝體比（肝體比＝肝臟質(zhì)量／體重）增大顯著顯的。而單獨有氧運動、服用“消脂散”以及有氧運動聯(lián)合“消脂散”均能明顯抑制大鼠肝體比的增加，并且有明交互作用。3.3實驗大鼠肝功能指標(biāo)的變化

HF組大鼠血清ALT水平有上升的趨勢顯著；且HF組大鼠血清AST和LDH活性顯著升高。有氧運動或“消脂散”均可以顯著地降低高脂飲食大鼠血清AST、ALT和LDH的活性，而且有氧運動和服用“消脂散”對于降低高脂飲食大鼠血清ALT和LDH活性均具有顯著的交互作用，從而使它們的活性進(jìn)一步降低。3.4實驗大鼠血清中TC、TG和FFA水平的影響

與C組相比，高脂飼料使得HF組大鼠血清TG、TC水平明顯增高；有氧運動或“消脂散”均能顯著地降低高脂飲食大鼠血清TG、TC的水平，而且有氧運動和“消脂散”對降低高脂飲食大鼠血清TG、TC水平具有顯著的交互作用與C組相比，HF組大鼠血清FFA水平明顯增高；在高脂飲食的同時進(jìn)行有氧運動訓(xùn)練或服用“消脂散”能夠顯著地降低高脂飲食大鼠血清中FFA含量，同時有氧運動聯(lián)合“消脂散”對進(jìn)一步降低肝組織中FFA水平具有顯著的交互作用。

3.5實驗大鼠肝臟中TC、TG和FFA水平的影響與C組相比較，HF組大鼠肝組織內(nèi)TC和TG水平顯著升高；有氧運動或服用“消脂散”均能顯著地降低高脂膳食大鼠肝臟組織內(nèi)TC和TG水平，而且有氧運動和“消脂散”對降低高脂膳食大鼠肝臟中TC和TG水平具有明顯的交互作用。與C組相比，HF組大鼠肝內(nèi)FFA水平明顯增高；在高脂膳食的同時進(jìn)行有氧運動訓(xùn)練或服用“消脂散”能夠顯著地降低高脂飲食大鼠肝組中FFA含量，同時有氧運聯(lián)合“消脂散”對進(jìn)一步降低肝組織中FFA水平具有顯著的交互作用。3.6實驗大鼠肝臟中SOD和MDA含量以及SOD/MDA變化的影響

與C組相比，HF組大鼠肝組織中SOD活力下降顯著，且MDA含量顯著上升，從而導(dǎo)致SOD/MDA顯著降低。有氧運動運動或服用“消脂散”均能使高脂飲食大鼠肝組織中SOD活性顯著升高，MDA含量顯著降低，從而使SOD/MDA顯著升高；而且有氧運動訓(xùn)練聯(lián)合“消脂散”對高脂膳食大鼠肝組織中SOD活性進(jìn)一步升高，MDA含量進(jìn)一步降低，具有顯著的交互作用。

3.7目的基因和內(nèi)參基因的擴增曲線

PPAR-α和β-actin基因的擴增曲線。由圖可知，兩個基因的溶解曲線只有單峰，說明引物的特異好，沒有非特異性擴增和引物二聚體的形成。3.8目的基因和內(nèi)參基因的溶解曲線

PPAR-α和β-actin基因的擴增曲線。由圖可知，兩個基因的溶解曲線只有單峰，說明引物的特異好，沒有非特異性擴增和引物二聚體的形成。

3.9目的基因和內(nèi)參基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線及表達(dá)量

目的基因PPAR-α的標(biāo)準(zhǔn)曲線為：Y=-2.997X+20.554，擬合度R2=0.9932，擴增效率E=115.61%，β-actin的標(biāo)準(zhǔn)曲線為：Y=-3.181X+16.050，擬合度R2=0.9949，擴增效率E=106.23%。目的基因與內(nèi)參基因的擴增效率基本一致。

3.9實驗大鼠肝臟中PPAR-αmRNA的表達(dá)

與C組相比，高脂膳食組大鼠肝組織中PPAR-αmRNA表達(dá)量顯著降低，有氧運動和“消脂散”均能使高脂飲食大鼠肝組織中PPAR-αmRNA表達(dá)量顯著升高，而且有氧運動聯(lián)合“消脂散”使高脂飲食大鼠肝組織中PPAR-αmRNA表達(dá)量升高有明顯的交互作用。

4.1實驗證實10周的高脂飲食成功地復(fù)制出大鼠非酒精性脂肪肝模型。4.2有氧運動和“消脂散”對高脂飲食大鼠脂肪肝的形成具有顯著的干預(yù)作用，且兩者具有明顯的交互作用。4.3脂肪肝的形成與脂肪代謝紊亂有關(guān)，有氧運動和“消脂散”通過顯著改善高脂飲食大鼠的脂肪代謝來干預(yù)脂肪肝的形成。4.4有氧運動和“消脂散”可以改善高脂飲食大鼠肝組織中氧自由基代謝，預(yù)防肝細(xì)胞的損傷，從而起到保護肝臟功能的作用。4.5有氧運動和“消脂散”可以有效地提高高脂膳食大鼠肝臟中PPAR-αmRNA表達(dá)量，同時有氧運動和“消脂散”對高脂膳食大鼠肝組織中PPAR-αmRNA表達(dá)量升高有顯著的交互作用。4、結(jié)論

首先，我要衷心地感謝導(dǎo)師李寧川教授。三年來，李老師無論在學(xué)習(xí)還是生活上都給我無微不至的幫助和關(guān)懷。在此，謹(jǐn)以此文，向恩師致以我最衷心的感謝和崇高的敬意！在本論文完成過程中，感謝揚州大學(xué)體育學(xué)院金其貫教授和施洪飛教授對我