白細(xì)胞血小板配血試驗(yàn)課件

一、人類(lèi)白細(xì)胞抗原

人類(lèi)白細(xì)胞抗原代表個(gè)體特異性與移植排斥有關(guān)的抗原稱(chēng)為組織相容性抗原或移植抗原-MHS

編碼MHS的基因組稱(chēng)為主要組織相容性復(fù)合物(MHC)

人類(lèi)的MHC是首先在白細(xì)胞上發(fā)現(xiàn)的，稱(chēng)為人類(lèi)白細(xì)胞抗原(humanleukocyteantigen，HLA)HLA的研究歷史最早發(fā)現(xiàn)人類(lèi)白細(xì)胞抗原者為Dausset-1954年

HLA不僅僅是白細(xì)胞特異性同種抗原。它是分布廣泛的組織抗原。HLA的分型命名

血清學(xué)分型命名具有臨床意義的HLA基因有A、B、C、DR、DQ、DP等位點(diǎn)(Loci)，每個(gè)位點(diǎn)又有若干等位基因，這些基因的產(chǎn)物便是HLA抗原。

臨床意義比較大的HLA-A、B、C稱(chēng)為Ⅰ類(lèi)抗原

HLA-DR、DQ、DP稱(chēng)為Ⅱ類(lèi)抗原。HLA的遺傳

單體型遺傳存在基因重組多態(tài)性現(xiàn)象連鎖不平衡

HLA抗體及抗體檢測(cè)

臨床上HLA抗體多由妊娠、輸血或器官移植等免疫產(chǎn)生HLA在醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用

一、HLA與輸血

HLA與非溶血性輸血反應(yīng)

HLA與血小板輸注二、HLA與器官移植

(一)腎移植

(二)骨髓移植三、HLA與親子鑒定二、血小板血型一類(lèi)是與其他細(xì)胞表面或組織共有的抗原，稱(chēng)血小板相關(guān)抗原另一類(lèi)為血小板特異性抗原血小板血型相關(guān)抗原：主要與紅細(xì)胞的ABO血型系統(tǒng)以及人類(lèi)白細(xì)胞抗原(HLA)有關(guān)特異性抗原：由血小板特有的抗原決定簇組成，表現(xiàn)出血小板獨(dú)特的遺傳多態(tài)性，在其他細(xì)胞和組織上不能發(fā)現(xiàn)血小板血型血小板表面存在紅細(xì)胞ABO系統(tǒng)的A抗原和B抗原,可能是從血漿中吸附上的。是否還存在其他紅細(xì)胞血型抗原尚在探討之中在我國(guó)，通常進(jìn)行ABO同型血小板輸血配合性血小板輸注ABO同型血小板抗體的篩選交叉配合試驗(yàn)：確保供受體的血小板型和HLA型的配合血小板血型

血小板特異性抗原

具有獨(dú)特的型特異性，并構(gòu)成血小板膜結(jié)構(gòu)中的一部分血小板特異性抗原有6個(gè)血型系統(tǒng)24個(gè)抗原，正式命名為HPA-1、HPA-2、HPA-3、HPA-4、HPA-5、HPA-15血小板血型的臨床意義一.血小板輸注無(wú)效性(PTR)二.輸血后紫癜(PTP)三.新生兒同種免疫性血小板減少性紫癜(NAITP)四.血小板的自身免疫作用---特發(fā)性血小板減少性紫癜(簡(jiǎn)稱(chēng)ITP)血小板同種抗體與輸血

1.ABO血型的選擇

一般需要做主側(cè)或次側(cè)的交叉配血，最好輸注ABO血型配合的血小板

2．Rh血型的選擇

D陰性的患者，最好要避免用D陽(yáng)性獻(xiàn)血者的濃縮血小板。對(duì)育齡婦女可以注射Rh免疫球蛋白

三、輸血前免疫血液學(xué)檢查

目的:供者與患者的血液

輸血前免疫血液學(xué)檢查內(nèi)容：患者的病史、標(biāo)本的核對(duì)及處理供受雙方ABO、Rh血型鑒定不規(guī)則抗體的篩選和鑒定交叉配血試驗(yàn)報(bào)告和發(fā)血標(biāo)本一、標(biāo)本采集二、紅細(xì)胞懸液的配制三、標(biāo)本的保存聚凝胺交叉配血技術(shù)示意圖2Polybrene拉近紅細(xì)胞間的距離并造成凝集血小板特異性抗原HLA不僅僅是白細(xì)胞特異性同種抗原。凝膠技術(shù)的原理目的:供者與患者的血液一類(lèi)是與其他細(xì)胞表面或組織共有的抗原，稱(chēng)血小板相關(guān)抗原與移植排斥有關(guān)的抗原稱(chēng)為組織相容性抗原或移植抗原-MHSHLA抗體及抗體檢測(cè)1個(gè)IgG分子同時(shí)連接兩個(gè)紅細(xì)胞對(duì)育齡婦女可以注射Rh免疫球蛋白HLA與血小板輸注加入受者的血清,如有抗血小板抗體,則和血小板發(fā)生特異性結(jié)合D陰性的患者，最好要避免用D陽(yáng)性獻(xiàn)血者的濃縮血小板。4抗人球蛋白可以同時(shí)和兩個(gè)不完全抗體的FC段結(jié)合，從而把紅細(xì)胞連接在一起。對(duì)育齡婦女可以注射Rh免疫球蛋白三、輸血前免疫血液學(xué)檢查2加入聚凝胺后，可以縮短紅細(xì)胞之間的距離，使其非特異性凝集血小板特異性抗原有6個(gè)血型系統(tǒng)24個(gè)抗原，正式命名為HPA-1、HPA-2、HPA-3、HPA-4、HPA-5、HPA-15標(biāo)本一、標(biāo)本采集1．紅細(xì)胞標(biāo)本-ACD或CPD、(Na2-EDTA)抗凝靜脈血少數(shù)患者有一種自身抗體--不宜用抗凝血液作為紅細(xì)胞抗原標(biāo)本

2．血清標(biāo)本

一般實(shí)驗(yàn)避免使用血漿配血試驗(yàn)用血清——不超過(guò)72小時(shí)二、紅細(xì)胞懸液的配制1、紅細(xì)胞懸液常用濃度有2％、5％和10％2、2％的懸液一般用于滴定抗體效價(jià)，5％的懸液常用于血型鑒定和交叉配血試驗(yàn)，10％的懸液則用于測(cè)定抗體的親合力。

三、標(biāo)本的保存1．血清標(biāo)本不稀釋的血清標(biāo)本如加有防腐劑可在4℃保存數(shù)月,在一20℃以下可保存數(shù)年如用生理鹽水稀釋的血清只限當(dāng)天使用2．紅細(xì)胞標(biāo)本一般試驗(yàn)用的凝血標(biāo)本要在5天之內(nèi)使用，以不溶血為準(zhǔn)。如用保存液可保存3周用鹽水配制的紅細(xì)胞懸液只能在當(dāng)天使用

供受雙方ABO、Rh血型鑒定ABO血型正反定型Rh血型鑒定｝試管法抗A、抗B以外的所有抗體統(tǒng)稱(chēng)為不規(guī)則抗體。常見(jiàn)于多次輸血的人群不規(guī)則抗體的篩選和鑒定不規(guī)則抗體的篩選和鑒定患者血清+試劑篩選紅細(xì)胞鹽水介質(zhì)聚凝胺介質(zhì)抗人球蛋白介質(zhì)交叉配血試驗(yàn)受者血清+供者紅細(xì)胞受者紅細(xì)胞+供者血清方法主側(cè)次側(cè)

鹽水介質(zhì)聚凝胺介質(zhì)抗人球蛋白介質(zhì)（1）低離子聚凝胺交叉配血技術(shù)原理：聚凝胺（Polybrene），一種高價(jià)陽(yáng)離子季胺鹽多聚物，溶解后能產(chǎn)生很多正電荷，可以中和紅細(xì)胞表面的負(fù)電荷，使紅細(xì)胞之間距離減少，能引起正常紅細(xì)胞可逆性的非特異性凝集。如果使抗體致敏的紅細(xì)胞被聚凝胺凝集，則凝集不可逆。1紅細(xì)胞間有一定間距2加入聚凝胺后，可以縮短紅細(xì)胞之間的距離，使其非特異性凝集3加入枸櫞酸鈉，可以中和聚凝胺4紅細(xì)胞的非特異性凝集消失聚凝胺交叉配血技術(shù)示意圖1聚凝胺枸櫞酸鈉加入重懸液減弱了Polybrene的作用臨床上HLA抗體多由妊娠、輸血或器官移植等免疫產(chǎn)生(二)骨髓移植人類(lèi)白細(xì)胞抗原代表個(gè)體特異性2加入聚凝胺后，可以縮短紅細(xì)胞之間的距離，使其非特異性凝集（4）血小板配血實(shí)驗(yàn)原理示意圖（陽(yáng)性）凝膠柱中的抗人球蛋白捕獲抗血小板抗體,導(dǎo)致試劑紅細(xì)胞凝集。HLA與非溶血性輸血反應(yīng)2加入聚凝胺后，可以縮短紅細(xì)胞之間的距離，使其非特異性凝集C、粘液：親和柱中有一層粘液，作用與“試劑或鹽水層”相同。試劑紅細(xì)胞和血小板特異性結(jié)合高度敏感有時(shí)也會(huì)造成不便：有報(bào)導(dǎo)應(yīng)用凝膠試驗(yàn)后，1/300的庫(kù)血直抗陽(yáng)性。Polybrene分子連接到紅細(xì)胞上HLA-DR、DQ、DP稱(chēng)為Ⅱ類(lèi)抗原。相關(guān)抗原：主要與紅細(xì)胞的ABO血型系統(tǒng)以及人類(lèi)白細(xì)胞抗原(HLA)有關(guān)血小板特異性抗原1紅細(xì)胞上已有不完全抗體致敏加入Polybrene一類(lèi)是與其他細(xì)胞表面或組織共有的抗原，稱(chēng)血小板相關(guān)抗原HLA不僅僅是白細(xì)胞特異性同種抗原。1紅細(xì)胞上已有不完全抗體致敏2加入聚凝胺后，縮短紅細(xì)胞之間的距離，讓不完全抗體可以同時(shí)與兩個(gè)紅細(xì)胞結(jié)合使其特異性凝集3加入枸櫞酸鈉中和聚凝胺4由于不完全抗體的結(jié)合，紅細(xì)胞的特異性凝集不消失聚凝胺交叉配血技術(shù)示意圖2聚凝胺枸櫞酸鈉不完全抗體試驗(yàn)分步原理血清紅細(xì)胞懸液加入LIM混合液Polybrene受體血型抗原IgG抗體迅速致敏試驗(yàn)分步原理Polybrene上海市血液中心血Polybrene分子連接到紅細(xì)胞上加入Polybrene試驗(yàn)分步原理離心Polybrene拉近紅細(xì)胞間的距離并造成凝集1個(gè)IgG分子同時(shí)連接兩個(gè)紅細(xì)胞試驗(yàn)分步原理加入重懸液減弱了Polybrene的作用重懸液上海市血液中心血加重懸液試驗(yàn)分步原理已被血型抗體致敏的紅細(xì)胞不會(huì)散開(kāi)陽(yáng)性結(jié)果試驗(yàn)分步原理未被血型抗體致敏的紅細(xì)胞很快散開(kāi)陰性結(jié)果注意事項(xiàng)按比例加樣致敏時(shí)間觀察非特異性凝集觀察結(jié)果關(guān)于冷凝集聚凝胺方法的特點(diǎn)靈敏：靈敏度比抗球蛋白方法高1-20倍。速度快：實(shí)驗(yàn)時(shí)間5分鐘左右。準(zhǔn)確：準(zhǔn)確度高于酶試驗(yàn)。不適合于Kell系統(tǒng)抗體的檢測(cè)，但黃種人群中Kell系統(tǒng)抗體極罕見(jiàn)。操作要求較高（2）微柱凝膠技術(shù)2．紅細(xì)胞標(biāo)本一般試驗(yàn)用的凝血標(biāo)本要在5天之內(nèi)使用，以不溶血為準(zhǔn)。凝膠技術(shù)的原理2）結(jié)果可保存凝膠試驗(yàn)的結(jié)果可在冰箱中保存數(shù)日，并且較容易被拍成照片。2加入聚凝胺后，可以縮短紅細(xì)胞之間的距離，使其非特異性凝集交叉配合試驗(yàn)：確保供受體的血小板型和HLA型的配合一類(lèi)是與其他細(xì)胞表面或組織共有的抗原，稱(chēng)血小板相關(guān)抗原2）結(jié)果可保存凝膠試驗(yàn)的結(jié)果可在冰箱中保存數(shù)日，并且較容易被拍成照片。不規(guī)則抗體的篩選和鑒定一類(lèi)是與其他細(xì)胞表面或組織共有的抗原，稱(chēng)血小板相關(guān)抗原準(zhǔn)確：準(zhǔn)確度高于酶試驗(yàn)。臨床上HLA抗體多由妊娠、輸血或器官移植等免疫產(chǎn)生供受雙方ABO、Rh血型鑒定臨床上HLA抗體多由妊娠、輸血或器官移植等免疫產(chǎn)生1紅細(xì)胞上已有不完全抗體致敏4紅細(xì)胞的非特異性凝集消失2不完全抗體可以結(jié)合在紅細(xì)胞表面,但是不能和兩個(gè)紅細(xì)胞同時(shí)結(jié)合（致敏）。三、輸血前免疫血液學(xué)檢查(一)腎移植（4）血小板配血實(shí)驗(yàn)原理示意圖（陽(yáng)性）微柱凝膠技術(shù)

凝膠技術(shù)的原理

反應(yīng)室外管壁反應(yīng)室底孔內(nèi)套管壁凝膠或玻璃珠親和凝膠試劑或鹽水特殊粘液凝膠技術(shù)的原理：A、反應(yīng)室：下端底孔很小，液體在孵育過(guò)程中不會(huì)流入下方微柱中。B、試劑或鹽水層：紅細(xì)胞在離心力作用下穿越該層，紅細(xì)胞與反應(yīng)室中的血清分離并與該層液體中的試劑反應(yīng)。C、粘液：親和柱中有一層粘液，作用與“試劑或鹽水層”相同。1）敏感：在凝膠試驗(yàn)中常能發(fā)現(xiàn)其它試驗(yàn)不易發(fā)現(xiàn)的問(wèn)題。2）結(jié)果可保存凝膠試驗(yàn)的結(jié)果可在冰箱中保存數(shù)日，并且較容易被拍成照片。3）操作技術(shù)要求較低：凝膠試驗(yàn)的操作主要是簡(jiǎn)單的加樣和判讀，孵育、離心過(guò)程都有專(zhuān)門(mén)的設(shè)備。其中能被人為改變的因素較少。4)無(wú)需洗滌的抗球蛋白試驗(yàn)：

優(yōu)點(diǎn)：缺點(diǎn)：凝膠試驗(yàn)方法成本較高，需要特殊設(shè)備。高度敏感有時(shí)也會(huì)造成不便：有報(bào)導(dǎo)應(yīng)用凝膠試驗(yàn)后，1/300的庫(kù)血直抗陽(yáng)性。2不完全抗體可以結(jié)合在紅細(xì)胞表面,但是不能和兩個(gè)紅細(xì)胞同時(shí)結(jié)合（致敏）。3加入抗人球蛋白1紅細(xì)胞彼此之間有一定的間距4抗人球蛋白可以同時(shí)和兩個(gè)不完全抗體的FC段結(jié)合，從而把紅細(xì)胞連接在一起。（3）抗人球蛋白交叉配血法示意圖1.試劑紅細(xì)胞(表面標(biāo)有抗血小板抗體)2.加入供者血小板3.試劑紅細(xì)胞和血小板特異性結(jié)合4.加入受者的血清,如有抗血小板抗體,則和血小板發(fā)生特異性結(jié)合5.凝膠柱中的抗人球蛋白捕獲抗血小板抗體,導(dǎo)致試劑紅細(xì)胞凝集。（4）血小板配血實(shí)驗(yàn)原理示意圖（陽(yáng)性）1.試劑紅細(xì)胞(表面標(biāo)有抗血小板抗體)2.加入供者血小板3.試劑紅細(xì)胞和血小板特異性結(jié)合4.加入受者的血清,如血清中無(wú)抗血小板抗體,則凝膠柱中的抗人球蛋白不發(fā)生特異性結(jié)合，試劑紅細(xì)胞仍呈單個(gè)分布。血小板配血實(shí)驗(yàn)原理示意圖（陰性反應(yīng)）HLA的研究歷史最早發(fā)現(xiàn)人類(lèi)白細(xì)胞抗原者為Dausset-1954年

HLA不僅僅是白細(xì)胞特異性同種抗原。它是分布廣泛的組織抗原。HLA與血小板輸注1個(gè)IgG分子同時(shí)連接兩個(gè)紅細(xì)胞一般需要做主側(cè)或次側(cè)的交叉配血，最好輸注ABO血型配合的血小板血小板輸注無(wú)效性(PTR)2加入聚凝胺后，可以縮短紅細(xì)胞之間的距離，使其非特異性凝集一般需要做主側(cè)或次側(cè)的交叉配血，最好輸注ABO血型配合的血小板高度敏感有時(shí)也會(huì)造成不便：有報(bào)導(dǎo)應(yīng)用凝膠試驗(yàn)后，1/300的庫(kù)血直抗陽(yáng)性。Polybrene分子連接到紅細(xì)胞上Polybrene拉近紅細(xì)胞間的距離并造成凝集2加入聚凝胺后，縮短紅細(xì)胞之間的距離，讓不完全抗體可以同時(shí)與兩個(gè)紅細(xì)胞結(jié)合使其特異性凝集1個(gè)IgG分子同時(shí)連接兩個(gè)紅細(xì)胞2加入聚凝胺后，可以縮短紅細(xì)胞之間的距離，使其非特異性凝集D陰性的患者，最好要避免用D陽(yáng)性獻(xiàn)血者的濃縮血小板。加入重懸液減弱了Polybrene的作用一類(lèi)是與其他細(xì)胞表面或組織共有的抗原，稱(chēng)血小板相關(guān)抗原4紅細(xì)胞的非特異性凝集消失一類(lèi)是與其他細(xì)胞表面或組織共有的抗原，稱(chēng)血小板相關(guān)抗原1個(gè)IgG分子同時(shí)連接兩個(gè)紅細(xì)胞患者的病史、標(biāo)本的核對(duì)及處理配合性血小板輸注ABO同型血小板抗體的篩選交叉配合試驗(yàn)：確保供受體的血小板型和HLA型的配合血小板同種抗體與輸血

1.ABO血型的選擇

一般需要做主側(cè)或次側(cè)的交叉配血，最好輸注ABO血型配合的血小板

2．Rh血型的選擇

D陰性的患者，最好要避免用D陽(yáng)性獻(xiàn)血者的濃縮血小板。對(duì)育齡婦女可以注射Rh免疫球蛋白

標(biāo)本一、標(biāo)本采集1．紅細(xì)胞標(biāo)本-ACD或CPD、(Na2-EDTA)抗凝靜脈血少數(shù)患者有一種自身抗體--不宜用抗凝血液作為紅細(xì)胞抗原標(biāo)本試驗(yàn)分步原理加入重懸液減弱了Polybrene的作用重懸液上海市血液中心血加重懸液注意事項(xiàng)按比例加樣致敏時(shí)間觀察非特異性凝集觀察結(jié)果關(guān)于冷凝集微柱凝膠技術(shù)C、粘液：親和柱中有一層粘液，作用與“試劑或鹽水層”相同。HLA與非溶血性輸血反應(yīng)靈敏：靈敏度比抗球蛋白方法高1-20倍。HLA不僅僅是白細(xì)胞特異性同種抗原。D陰性的患者，最好要避免用D陽(yáng)性獻(xiàn)血者的濃縮血小板。一類(lèi)是與其他細(xì)胞表面或組織共有的抗原，稱(chēng)血小板相關(guān)抗原2加入聚凝胺后，可以縮短紅細(xì)胞之間的距離，使其非特異性凝集加入重懸液減弱了Polybrene的作用2加入聚凝胺后，可以縮短紅細(xì)胞之間的距離，使其非特異性凝集HLA與血小板輸注HLA抗體及抗體檢測(cè)2）結(jié)果可保存凝膠試驗(yàn)的結(jié)果可在冰箱中保存數(shù)日，并且較容易被拍成照片。加入Polybrene供受雙方ABO、Rh血型鑒定在我國(guó)，通常進(jìn)行ABO同型血小板輸血一類(lèi)是與其他細(xì)胞表面或組織共有的抗原，稱(chēng)血小板相關(guān)抗原一般需要做主側(cè)或次側(cè)的交