高效液相色譜法在中藥標(biāo)準(zhǔn)提高中的應(yīng)用-李華課件

高效液相色譜法在中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

廣東省藥檢所――李華前言中藥是中國(guó)醫(yī)藥學(xué)的瑰寶，對(duì)中華民族的繁衍昌盛做出了偉大的貢獻(xiàn)。為了保證中藥的安全性和有效性，數(shù)千年來中醫(yī)藥一直處于不斷標(biāo)準(zhǔn)化、規(guī)范化的進(jìn)程中，《神農(nóng)本草經(jīng)》則是最早的中藥材標(biāo)準(zhǔn)。李時(shí)珍的《本草綱目》是中藥材標(biāo)準(zhǔn)規(guī)范的深化。歷史發(fā)展到今天，總結(jié)前人經(jīng)驗(yàn)，補(bǔ)充完善、制定中藥系列標(biāo)準(zhǔn)是中藥現(xiàn)代化的需要，也是中藥國(guó)際化，造福全人類的需要。一、我省中藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)狀況、部分中藥材無質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。廣東是一個(gè)中藥材生產(chǎn)、銷售、使用的大省，我省用于生產(chǎn)中藥成方制劑及臨床配方的中藥材有上千種，《中國(guó)藥典》年版收載的中藥材有種；現(xiàn)有質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的中藥材遠(yuǎn)不能滿足我省中藥材的需求和使用，尚有數(shù)百種經(jīng)常使用、療效較好的廣東地產(chǎn)中藥材，既無國(guó)家藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)也無省級(jí)藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。、與藥典同名異物廣東是“川、廣、云、貴地道藥材”的主產(chǎn)地之一，“南藥”是廣東的特產(chǎn)。有些特產(chǎn)藥材已收入《中國(guó)藥典》如陳皮、廣藿香、廣金錢草、廣防己、廣棗、砂仁、巴戟天、沉香、地龍、化橘紅、何首烏、佛手、丁公藤……等。但尚有大部分廣東常用中藥材未被《中國(guó)藥典》收載，有的其習(xí)用名稱卻與《藥典》收載的名稱相同，為同名異物的中藥材.、已有的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)偏低。

《廣東省中藥材標(biāo)準(zhǔn)》收載個(gè)品種，建立了定量測(cè)定方法的有個(gè)，其中高效液相色譜法個(gè)。二、高效液相色譜法在國(guó)家藥品

標(biāo)準(zhǔn)中的運(yùn)用高效液相色譜法由于儀器化程度高、分離效能高、準(zhǔn)確性和重現(xiàn)性好，更適合中藥復(fù)雜成分的分離分析和標(biāo)準(zhǔn)色譜圖庫(kù)的建立，成為中藥含量測(cè)定的主導(dǎo)方法。（一）、在部標(biāo)中藥成方制劑的應(yīng)用《中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)》“中藥成方制劑”分冊(cè)，共種，建立量化指標(biāo)項(xiàng)目的占，其中采用高效液相色譜分析方法的有４２項(xiàng)，占１.１２％，見表。表部頒品種量化指標(biāo)方法分析含測(cè)方法揮發(fā)油測(cè)定容量法、重量法分光光度法液相色譜法氣相色譜法薄層掃描法其他浸出物合計(jì)項(xiàng)目（二）、在《中國(guó)藥典》的應(yīng)用在《中國(guó)藥典》的應(yīng)用，在我國(guó)藥學(xué)工作者的努力下，經(jīng)歷了一個(gè)從無到有、從少到多的過程。表２近版版藥典品含量測(cè)定方法分析年份總收載數(shù)薄層掃描法氣相色譜法高效液相色譜法比例（）三、運(yùn)用高效液相色譜法進(jìn)行藥品標(biāo)準(zhǔn)定量部分提高工作中藥是多種成分的混合物，其化學(xué)成分可有幾十種甚至上百種，雖然中藥藥效是多成分綜合作用的結(jié)果已漸成共識(shí)，但由此認(rèn)為中藥全成分均為有效成分的觀點(diǎn)則是片面的，以我們目前的技術(shù)及實(shí)驗(yàn)條件要想對(duì)所有的成分進(jìn)行測(cè)定也是不可能的，選擇

個(gè)有效成分作為中藥質(zhì)量評(píng)價(jià)的標(biāo)準(zhǔn)，雖然這種方法不夠充分、客觀，但卻是目前我們的技術(shù)及實(shí)驗(yàn)條件所能做到的。（一）、指導(dǎo)思想１、在制定中藥標(biāo)準(zhǔn)中突出中醫(yī)理論的指導(dǎo)作用，反映中醫(yī)用藥與質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的內(nèi)在關(guān)系。２、在檢測(cè)成分上也要注意以中醫(yī)臨床功能主治與現(xiàn)代藥理學(xué)相結(jié)合進(jìn)行研究。３、如所測(cè)成分含量低，應(yīng)制定浸出物或增加一味藥的含量測(cè)定。表多指標(biāo)測(cè)定品種與項(xiàng)目序號(hào)品名檢測(cè)成分西紅花羥基紅花黃色素、山奈素山楂葉總黃酮、金絲桃苷馬錢子馬錢子堿、士的寧丹參丹參酮、丹酚酸甘草甘草酸、甘草苷半枝蓮總黃酮、野黃芩苷肉桂揮發(fā)油、桂皮醛紅花羥基紅花黃色素、山奈素蘆薈庫(kù)拉素蘆薈、好望角蘆薈沙棘總黃酮、異鼠李素虎杖大黃素、虎杖苷金銀花綠原酸、木犀草素銀杏總黃酮醇苷、萜類內(nèi)酯淫羊藿總黃酮、淫羊藿苷紫草羥基萘醌總色素、??’二甲基丙酰阿卡寧槐花總黃酮、無水蘆丁蜂膠白揚(yáng)素、高良姜素六味地黃丸牡丹皮中的丹皮酚、山茱萸中馬錢苷六味地黃顆粒牡丹皮中的丹皮酚、山茱萸中馬錢苷注射用雙黃連金銀花中綠原酸、黃芩中黃芩苷、連翹中連翹苷獨(dú)一味膠囊總黃酮、正丁醇提取物、木犀草素清開靈口服液黃芩中黃芩苷、總氮量清開靈注射液含氮量、膽酸、梔子中梔子苷、黃芩中黃芩苷鼻竇炎口服液正丁醇提取物、黃芩中黃芩苷表規(guī)定的含量限度為多成分之和序號(hào)品名檢測(cè)成分測(cè)定方法含量限度（）人參人參皂苷和、的總量；≥；人參葉人參皂苷、的總量≥兒茶兒茶素和表兒茶素的總量≥三七人參皂苷、和三七皂苷的總量≥木香木香烴內(nèi)酯、去氫木香烴內(nèi)酯≥木通齊墩果酸、常春藤皂苷元≥瓦松槲皮素、山奈素≥西紅花西紅花苷、西紅花苷≥西洋參人參皂苷、、的總量≥大黃蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚和大黃素甲醚的總量≥防己粉防己堿、防己諾林≥防風(fēng)升麻甙和甲基維斯阿米醇苷的總量≥紅參人參皂苷和、的總量；≥；吳茱萸吳茱萸堿和吳茱萸次堿的總量≥補(bǔ)骨酯補(bǔ)骨酯素、異補(bǔ)骨酯素≥苦參苦參堿、氧化苦參堿≥金錢草槲皮素、山奈素≥胡黃連胡黃連苷、胡黃連苷≥厚樸厚樸酚與和厚樸酚的總量≥厚樸花厚樸酚與和厚樸酚的總量≥牽牛子咖啡酸、咖啡酸乙酯≥香薷麝香草酚、香荊芥酚≥重樓重樓皂苷、重樓皂苷≥穿心蓮穿心蓮內(nèi)酯和脫水穿心蓮內(nèi)酯的總量≥蟾酥華蟾蜍次素和脂蟾毒配基的總量≥（二）、提高的程度１、以中國(guó)藥典２００５年版一部為基準(zhǔn)。２、中國(guó)藥典２００５年版一部，成方制劑和單味制劑共收載５６個(gè)品種，其中有３２５個(gè)項(xiàng)目采用了高效液相色譜法進(jìn)行定量分析，占５７％。３、在３２５個(gè)分析項(xiàng)目中測(cè)定芍藥苷的有４５項(xiàng)，占１３.８％，測(cè)定黃芩苷的４３項(xiàng)，占１３.２％，測(cè)定鹽酸小檗堿的１８項(xiàng)，占５.５％，測(cè)定大黃素的２０項(xiàng)，占６.２％。類別被測(cè)成分所屬藥材測(cè)定條件芍藥苷白芍、赤勺乙腈磷酸溶液（：）乙腈水（：）；生物堿鹽酸小檗堿黃連、黃柏乙腈磷酸二氫鉀溶液（：）；鹽酸麻黃堿麻黃乙腈磷酸二氫鉀溶液（含三乙胺）磷酸調(diào)至（：）；苦參堿苦參乙腈磷酸溶液（三乙胺調(diào)）；氫溴酸東莨菪堿洋金花乙腈磷酸鈉溶液（含十二烷基硫酸鈉，用磷酸調(diào)節(jié)至）（：）；荷葉堿荷葉乙腈三乙胺冰醋酸水（：：：）；馬錢子堿士的寧馬錢子乙腈庚烷磺酸鈉溶液與磷酸二氫鉀等量混合,用磷酸調(diào)節(jié)至）（：）；原阿片堿夏天無乙腈三乙胺醋酸溶液（水中加冰醋酸，三三乙胺）（：）；黃酮類黃芩苷黃芩甲醇水磷酸（：：）；葛根素葛根乙腈磷酸溶液（：）；柚皮苷化橘紅甲醇冰醋酸水（：：）；橙皮苷陳皮、青皮甲醇醋酸水（：：）；淫洋藿苷淫洋藿乙腈磷酸（：）；蘆丁槐花甲醇水冰醋酸（：：）；金絲桃苷山楂葉甲醇乙腈四氫呋喃冰醋酸（：：：）；槲皮素山奈素異鼠李素銀杏甲醇磷酸（：）；木犀草素獨(dú)一味甲醇－磷酸溶液（：）；皂苷類甘草酸（單銨鹽）甘草甲醇醋酸銨溶液冰醋酸（：：）；人參皂苷類人參、三七乙腈；水，梯度洗脫；黃芪甲苷黃芪乙腈水（：）；蒸發(fā)光散射檢測(cè)器蒽醌類大黃素、大黃酚大黃甲醇磷酸溶液（：）；丹參酮丹參甲醇水（：）；丹酚酸丹參甲醇乙腈甲酸水（：：：）；馬錢苷山茱萸乙腈水（：）；綠原酸金銀花乙腈磷酸溶液（：）；（三）、高效液相色譜分析方法建立的一般步驟：一種高效液相色譜分析方法的建立，是由多種因素來決定的，除了了解樣品的性質(zhì)及實(shí)驗(yàn)室具備的條件外，對(duì)液相色譜分離理論的理解，對(duì)前人從事過的相近工作的借鑒以及分析工作者自身的實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)，都對(duì)分析方法的建立起著重要的影響。通常在確定被分析的樣品以后，要建立一種高效液相分析方法必須解決以下問題：（）根據(jù)所測(cè)成分的性質(zhì)，制定其分析純化的方法。（）根據(jù)被分析樣品的特性，選擇適用于樣品分析的高效液相色譜分析方法。（）由獲得的色譜圖進(jìn)行定性或定量分析。（四）、高效液相色譜圖存在問題、原因及解決方法液相色譜系統(tǒng)的許多問題都能在譜圖上反映出來。其中有一些問題可以通過改變?cè)O(shè)備參數(shù)得到解決；而其他的問題必須通過修改操作程序來解決。對(duì)于色譜柱和流動(dòng)相的正確選擇是得到好的色譜圖的關(guān)鍵。峰拖尾原因、流動(dòng)相選擇不當(dāng)、干擾峰、樣品與填料表面殘留硅羥基發(fā)生反應(yīng)解決方法調(diào)整值。、使用更長(zhǎng)的色譜柱。、改變流動(dòng)相或更換色譜柱。、加入離子對(duì)試劑或堿性揮發(fā)性修飾劑、更換色譜柱峰前延原因、樣品過載、樣品溶劑選擇不恰當(dāng)、柱溫低解決方法降低樣品含量。、使用流動(dòng)相作為樣品溶劑。升高柱溫峰分叉原因、保護(hù)柱或分析柱污染、樣品溶劑不溶于流動(dòng)相解決方法、取下保護(hù)柱再進(jìn)行分析。改變樣品溶劑。保留時(shí)間波動(dòng)原因色譜柱沒有平衡流動(dòng)相組分變化溫控不當(dāng)解決方法在每一次運(yùn)行之前給予足夠的時(shí)間平衡色譜柱防止變化（蒸發(fā)、反應(yīng)等）調(diào)好柱溫保留時(shí)間波動(dòng)原因、柱溫波動(dòng)。、流動(dòng)相不均勻。、流通池被污染或有氣體、檢測(cè)器出口阻塞、流動(dòng)相配比不當(dāng)或流速變化解決方法、控制好柱子和流動(dòng)相的溫度、使用級(jí)的溶劑，高純度的鹽和添加劑。、流通池被污染或有氣體、取出阻塞物或更換管子。、更改配比或流速。基線漂移、柱平衡慢，特別是流動(dòng)相發(fā)生變化時(shí)。、柱溫波動(dòng)。、流動(dòng)相污染、變質(zhì)或由低品質(zhì)溶劑配成、樣品中有強(qiáng)保留的物質(zhì)。、用中等強(qiáng)度的溶劑進(jìn)行沖洗，更改流動(dòng)相時(shí)，在分析前用倍體積的新流動(dòng)相對(duì)柱子進(jìn)行沖洗、控制好柱子和流動(dòng)相的溫度、檢查流動(dòng)相的組成。、使用保護(hù)柱基線漂移四、

結(jié)束語(yǔ)