溶血性貧血實(shí)驗(yàn)室檢查版課件

什么叫溶血性貧血？

hemolyticanemia----指各種原因?qū)е录t細(xì)胞生存時(shí)間縮短、破壞增多或加速，骨髓代償造血功能不足時(shí)所發(fā)生的一類貧血。什么叫溶血性疾病？指骨髓代償能力尚足以補(bǔ)償紅細(xì)胞的損耗而不出現(xiàn)貧血。溶血性貧血的分類(病因和發(fā)病機(jī)制)1、RBC內(nèi)在缺陷所致的溶貧（1）

RBC膜缺陷：遺傳球PNH

（2）

HB結(jié)構(gòu)異常：海洋性貧血（3）RBC內(nèi)酶缺陷：G-6PD缺乏癥2、RBC外來因素所致的溶貧

AIHA、藥物、化學(xué)因素、感染因素溶血性貧血的分類（溶血的場所）1、血管內(nèi)溶血：RBC在循環(huán)血液中直接破壞，如血型不合輸血PNH2、血管外溶血：RBC在脾臟破壞，如球形RBC增多癥、脾亢3、原位溶血：幼R(shí)BC在骨髓中溶血，如AL、巨幼貧如何診斷溶血性貧血？第一步確定是否有溶血第二步哪一類溶貧一、首先確定有無溶血（一）找出RBC破壞增多的依據(jù)（1）RBC壽命縮短（2）血片見RBC碎片（3）血漿游離HB增高（血管內(nèi)溶血）（4）HB尿檢測（＋），醬油色（5）尿含鐵血黃素試驗(yàn)（＋）（6）血清非結(jié)合膽紅素（間接膽紅素）增高（7）尿膽原增高（8）血清結(jié)合珠蛋白減低（9）血漿高鐵血紅素清蛋白檢測（＋）電泳法：區(qū)帶Hb代謝示意圖

珠蛋白血紅素鐵+卟啉單核巨噬系統(tǒng)脾臟血管外溶血RBC血管內(nèi)溶血血漿游離Hb腎臟血紅蛋白尿游離膽紅素肝臟結(jié)合珠蛋白近曲小管上皮細(xì)胞腎閾結(jié)合膽紅素糞膽原的腸肝循環(huán)含鐵血黃素尿

Rous實(shí)驗(yàn)?zāi)懼S膽原腸道血液腎臟尿膽原高鐵血紅蛋白清蛋白/血紅素蛋白溶血性貧血篩查紅細(xì)胞壽命測定方法：51Cr標(biāo)記紅細(xì)胞，檢測其半衰期正常紅細(xì)胞半衰期25—32天溶血性貧血者半衰期小于15天確定溶血性貧血的可靠方法G6PD缺陷癥、不穩(wěn)定Hb、HbH病等常高于45%2條α鏈（erythrocyteosmoticfragilitytest)PK嚴(yán)重缺乏（純合子）熒光60min不消失ADP+PK磷酸丙酮酸目的：檢查紅細(xì)胞表面的或血清中游離的不完全抗體，用于診斷AIHA。蛋白質(zhì)的兩性性質(zhì)—是由氨基酸的NH+與COO-決定的。HbF（22）0.（erythrocyteosmoticfragilitytest)正常值：醋纖法（PH8.溶血性貧血的分類（溶血的場所）（2）血片見RBC碎片陽性見于陣發(fā)性寒冷性血紅蛋白尿患者大小不均，大紅細(xì)胞、嗜多色細(xì)胞及有核紅細(xì)胞，Howell-Jolly小體、Cabot環(huán)、點(diǎn)彩紅細(xì)胞等肝病、傳單、先天性無結(jié)合珠蛋白血癥減少或消失紅細(xì)胞孵育滲透脆性試驗(yàn)此時(shí)蛋白質(zhì)無電泳，在水中電解度小，并發(fā)生沉淀。臨床意義——常用于輕型遺傳球、遺傳性非球形細(xì)胞溶血的診斷此時(shí)蛋白質(zhì)無電泳，在水中電解度小，并發(fā)生沉淀。溶血性貧血篩查血漿游離血紅蛋白測定參考值：＜50mg/L(1-5mg/dl)

臨床意義：血管內(nèi)溶血者明顯升高AIHA、珠蛋白生成障礙性貧血者輕度升高血管外溶血時(shí)正常溶血性貧血篩查血清結(jié)合珠蛋白測定參考值：0.7-1.5g/L臨床意義：各種溶血均可減低，血管內(nèi)溶血減低最顯著肝病、傳單、先天性無結(jié)合珠蛋白血癥減少或消失感染、創(chuàng)傷、糖皮質(zhì)激素治療、服用避孕藥物、肝外阻塞性黃疸可增高溶血性貧血篩查血漿高鐵血紅素清蛋白測定方法：生化法：與硫化銨形成銨血色原，經(jīng)光譜儀測定558nm吸收光帶電泳法：醋酸纖維膜電泳正常值：陰性臨床意義：陽性者表示嚴(yán)重的血管內(nèi)溶血6）HbA96%~98%，HbA21.見于蠶豆病、伯氨喹型藥物溶血性貧血2、紅細(xì)胞孵育滲透脆性試驗(yàn)（二）紅細(xì)胞酶缺陷的檢驗(yàn)脆性增高遺傳性球形紅細(xì)胞增多癥1、酸溶血試驗(yàn)(Ham試驗(yàn))2、紅細(xì)胞孵育滲透脆性試驗(yàn)（erythrocyteosmoticfragilitytest)臨床意義——常用于輕型遺傳球、遺傳性非球形細(xì)胞溶血的診斷2、RBC外來因素所致的溶貧PK嚴(yán)重缺乏（純合子）熒光60min不消失此時(shí)蛋白質(zhì)無電泳，在水中電解度小，并發(fā)生沉淀。氧合HB（Fe2+）紅色34%NaCl溶液——紅細(xì)胞完全破裂目的：測定血清中游離的不完全抗體（erythrocyteosmoticfragilitytest)電泳：一個(gè)帶電荷的離子或膠體顆粒在電場中可向一極移動(dòng)。G6PD缺陷導(dǎo)致高鐵血紅蛋白還原率下降原理：在一定的pH緩沖液中，緩沖液的pH大于Hb等電點(diǎn)，其帶負(fù)電，在電場中向陽極移動(dòng)；陣發(fā)性寒冷性血紅蛋白尿癥（PCH）患者的血清中有雙相溶血素，在0-4C時(shí)，溶血素與紅細(xì)胞結(jié)合，并吸附補(bǔ)體，但不溶血；丙酮酸激酶熒光篩選試驗(yàn)和活性測定原理:G6PD使NADP還原成NADPH,后者在紫外線照射下發(fā)出熒光溶血性貧血篩查含鐵血黃素尿試驗(yàn)（Rous試驗(yàn)）原理：鐵離子+氰化鉀鐵氰化鐵（藍(lán)色）如腎小管上皮有含鐵血黃素，該試驗(yàn)陽性正常值：陰性臨床意義：陽性者表示慢性血管內(nèi)溶血，如PNH含鐵血黃素（二）顯示紅細(xì)胞代償增生依據(jù)外周血網(wǎng)織紅增多；外周血紅細(xì)胞形態(tài)：

大小不均，大紅細(xì)胞、嗜多色細(xì)胞及有核紅細(xì)胞，Howell-Jolly小體、Cabot環(huán)、點(diǎn)彩紅細(xì)胞等增生性貧血骨髓象：

增生明顯活躍，紅系顯著增生，粒系相對減少，巨核系一般正常

二、哪一類溶血性貧血？（一）紅細(xì)胞膜缺陷的檢驗(yàn)

紅細(xì)胞滲透脆性試驗(yàn)紅細(xì)胞孵育滲透脆性試驗(yàn)自身溶血試驗(yàn)及糾正試驗(yàn)1、

紅細(xì)胞滲透脆性試驗(yàn)原理:正常紅細(xì)胞為雙凹圓盤狀,在低滲鹽水中吸水膨脹的適應(yīng)性較大(可增加70%的體積而不破裂)遺傳性球形細(xì)胞增多癥等紅細(xì)胞的表面積/體積(S/V)的比值小,對低滲鹽水的適應(yīng)性小(脆性增大)本試驗(yàn)是測定紅細(xì)胞在一系列不同濃度低滲氯化鈉鹽水內(nèi)開始溶血和完全溶血的氯化鈉濃度，檢測其對不同濃度的低滲鹽水溶血的抵抗力。

紅細(xì)胞滲透脆性試驗(yàn)

（erythrocyteosmoticfragilitytest)

原理：低滲溶液紅細(xì)胞皺縮紅細(xì)胞膨脹甚至破裂高滲溶液等滲溶液正常低滲溶液

參考值

0.6-0.8%NaCl溶液——紅細(xì)胞不破裂

0.42-0.46%NaCl溶液——部分紅細(xì)胞破裂

0.28-0.34%NaCl溶液——紅細(xì)胞完全破裂NaCl0.85%0.6%0.42%0.34%0.8%0.7%對低滲溶液抵抗能力減小即RBC滲透脆性增加臨床意義

（1）脆性增高

開始溶血及完全溶血時(shí)氯化鈉濃度較正常對照提前兩管，即0.04%以上;開始溶血＞0.5%，完全溶血＞0.38%主要見于遺傳性球形紅細(xì)胞增多癥（2）脆性減低

小細(xì)胞低色素性貧血：海洋性貧血、缺鐵性貧血2、紅細(xì)胞孵育滲透脆性試驗(yàn)

原理

37℃孵育24小時(shí)，細(xì)胞內(nèi)葡萄糖消耗增加，ATP減少，鈉離子泵出減少，細(xì)胞膨脹，脆性增高。

參考值

未孵育50%溶血4~4.45g/LNaCl

孵育50%溶血4.65~5.9g/LNaCL

臨床意義——常用于輕型遺傳球、遺傳性非球形細(xì)胞溶血的診斷

脆性增高遺傳性球形紅細(xì)胞增多癥脆性減低缺鐵性貧血、珠蛋白生成障礙性貧血、鐮形細(xì)胞貧血、脾切除術(shù)后3、自身溶血試驗(yàn)及糾正試驗(yàn)

原理

先天性非球形紅細(xì)胞溶血患者紅細(xì)胞內(nèi)酶缺陷，葡萄糖酵解障礙，ATP不足不能維持細(xì)胞鈉泵作用患者紅細(xì)胞在自身血漿中孵育48h，溶血增強(qiáng)，可加入葡萄糖、ATP，觀察溶血能否被糾正

參考值

正常人孵育后輕微溶血、溶血度＜3.5%加葡萄糖和加ATP后，溶血明顯糾正，溶血度＜1%3、自身溶血試驗(yàn)及糾正試驗(yàn)

臨床意義——常用于遺傳球、遺傳性非球形細(xì)胞溶血的鑒別診斷

遺傳性球形細(xì)胞增多癥遺傳性非球形細(xì)胞性溶貧（Ⅰ型）葡萄糖6磷酸脫氫酶缺陷癥（Ⅱ型）丙酮酸激酶缺陷癥孵育后溶血增強(qiáng)增強(qiáng)增強(qiáng)加葡萄糖后溶血明顯糾正部分糾正不能糾正加ATP后溶血明顯糾正部分糾正糾正丙酮酸激酶熒光篩選試驗(yàn)和活性測定結(jié)果:正常人標(biāo)本呈紅色HbF（22）0.血紅素開始溶血及完全溶血時(shí)氯化鈉濃度較正常對照提前兩管，即0.丙酮酸激酶熒光篩選試驗(yàn)和活性測定（一）找出RBC破壞增多的依據(jù)按抗體反應(yīng)最適溫度分為溫抗體型和冷抗體型，后者又分為冷凝集素綜合征和陣發(fā)性冷性血紅蛋白尿AIHA分三型：C3型12%，IgG型24%，IgG+C3型60%。04%以上;開始溶血＞0.（一）找出RBC破壞增多的依據(jù)此時(shí)蛋白質(zhì)無電泳，在水中電解度小，并發(fā)生沉淀。如腎小管上皮有含鐵血黃素，該試驗(yàn)陽性3、自身溶血試驗(yàn)及糾正試驗(yàn)當(dāng)升溫至30-37C則發(fā)生溶血臨床意義：陽性者表示嚴(yán)重的血管內(nèi)溶血氧合HB（Fe2+）紅色如腎小管上皮有含鐵血黃素，該試驗(yàn)陽性珠蛋白：由4條多肽鏈組成原理：在一定的pH緩沖液中，緩沖液的pH大于Hb等電點(diǎn)，其帶負(fù)電，在電場中向陽極移動(dòng)；直接CoombsTest(+)說明病人RBC表面上包被有不完全抗體1、高鐵血紅蛋白還原試驗(yàn)（二）紅細(xì)胞酶缺陷的檢驗(yàn)

定義：紅細(xì)胞酶缺陷所致溶血性貧血又稱紅細(xì)胞酶病，指參與紅細(xì)胞代謝的酶由于基因缺陷，導(dǎo)致活性改變而發(fā)生溶血的一組疾病內(nèi)容：高鐵血紅蛋白還原試驗(yàn)氰化物-抗壞血酸試驗(yàn)變性珠蛋白小體生成試驗(yàn)葡萄糖-6-磷酸脫氫酶熒光斑點(diǎn)試驗(yàn)和活性測定丙酮酸激酶熒光篩選試驗(yàn)和活性測定原理1、高鐵血紅蛋白還原試驗(yàn)G6PD正常NADPH還原型輔酶Ⅱ煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸高鐵血紅蛋白亞鐵血紅蛋白NADPH充足G6PD高鐵Hb還原酶G6PG6-PANADPNADPH還原型美蘭氧化型美蘭高鐵Hb（Fe3+）為褐色氧合HB（Fe2+）紅色結(jié)果：光電比色法，正常還原率＞75%，低于75%為異常，提示G6PD活力↓，74～31%為G-6PD缺乏的雜合子（紅棕色），30%以下為顯著缺陷的純合子（為棕色—目測比色法）。參考值高鐵血紅蛋白還原率＞75%高鐵血紅蛋白0.3~1.3g/L臨床意義G6PD缺陷導(dǎo)致高鐵血紅蛋白還原率下降見于蠶豆病、伯氨喹型藥物溶血性貧血1、高鐵血紅蛋白還原試驗(yàn)原理:6-磷酸葡萄糖

NADP

GSH

H202

氧合血紅蛋白

6-磷酸葡萄糖酸

NADPH

GSSG

H20

高鐵血紅蛋白結(jié)果:正常人標(biāo)本呈紅色G-6PD2、氰化物-抗壞血酸試驗(yàn)臨床意義:正常血液數(shù)小時(shí)后變成暗色純合子G6PD缺乏者2h變色雜合子G6PD缺乏者3~4h變色3、變性珠蛋白小體生成試驗(yàn)又稱“紅細(xì)胞包涵體”、“赫恩小體”、“Heinz小體”、“海因小體”原理：G-6PD缺乏致紅細(xì)胞內(nèi)GSH減少，高鐵血紅蛋白增高，形成變性珠蛋白小體，沉著于紅細(xì)胞膜上。

抗凝血+乙酰苯肼37℃溫育2～4h充分的氧化

其Hb氧化成Heinz小體（用結(jié)晶紫、甲紫或煌焦油蘭染色，油鏡觀察）1.正常人＜30%2.G6PD缺陷癥、不穩(wěn)定Hb、HbH病等常高于45%結(jié)果：

該小體為圓形或多角形色涵體，φ0.2～2um。多位于紅細(xì)胞邊緣，一個(gè)紅細(xì)胞含1～20個(gè)，多為1～2個(gè)，以含5個(gè)以上小體的紅細(xì)胞計(jì)數(shù)4、G6PD熒光斑點(diǎn)試驗(yàn)和活性測定原理:

G6PD使NADP還原成NADPH,后者在紫外線照射下發(fā)出熒光

參考值：正常人強(qiáng)熒光；酶活性5U/gHb

6-磷酸葡萄糖NADPGSHH202

氧合血紅蛋白

6-磷酸葡萄糖酸NADPHGSSGH20高鐵血紅蛋白G-6PD5、丙酮酸激酶熒光篩選試驗(yàn)和活性測定原理:

ADP+PK磷酸丙酮酸

丙酮酸NAPH

乳酸NAD（無熒光）參考值正常PK活性熒光在20min內(nèi)消失酶活性15.1±4.99U/gHb臨床意義PK嚴(yán)重缺乏（純合子）熒光60min不消失雜合子熒光25~60min消失(三)、珠蛋白合成異常的檢測血紅蛋白的結(jié)構(gòu)

原卟啉

血紅素Hb（四聚體）鐵

2條α鏈

珠蛋白：由4條多肽鏈組成

2條非α鏈正常人HbA（22）97%HbA2（22）1.5-3%HbF（22）0.5-0.8%34%NaCl溶液——紅細(xì)胞完全破裂丙酮酸激酶熒光篩選試驗(yàn)和活性測定6）HbA96%~98%，HbA21.此時(shí)蛋白質(zhì)無電泳，在水中電解度小，并發(fā)生沉淀。正常人孵育后輕微溶血、溶血度＜3.大小不均，大紅細(xì)胞、嗜多色細(xì)胞及有核紅細(xì)胞，Howell-Jolly小體、Cabot環(huán)、點(diǎn)彩紅細(xì)胞等Coombs血清（抗人球蛋白血清）蔗糖溶液加強(qiáng)補(bǔ)體與紅細(xì)胞結(jié)合，使蔗糖進(jìn)入紅細(xì)胞，導(dǎo)致溶血增強(qiáng)NADPH還原型輔酶Ⅱ葡萄糖-6-磷酸脫氫酶熒光斑點(diǎn)試驗(yàn)和活性測定2、RBC外來因素所致的溶貧如腎小管上皮有含鐵血黃素，該試驗(yàn)陽性目的：測定血清中游離的不完全抗體遺傳性非球形細(xì)胞性溶貧結(jié)果:正常人標(biāo)本呈紅色含鐵血黃素尿試驗(yàn)（Rous試驗(yàn)）AIHA分三型：C3型12%，IgG型24%，IgG+C3型60%。溶血性貧血的分類（溶血的場所）遺傳性球形細(xì)胞增多癥等紅細(xì)胞的表面積/體積(S/V)的比值小,對低滲鹽水的適應(yīng)性小(脆性增大)氧合HB（Fe2+）紅色

血紅蛋白病珠蛋白肽鏈量的不正常(地中海貧血)血紅蛋白分子結(jié)構(gòu)異常(異常血紅蛋白病)遺傳性溶血性疾病

1.血紅蛋白電泳蛋白質(zhì)的兩性性質(zhì)—是由氨基酸的NH+與COO-

決定的。等電點(diǎn)—調(diào)節(jié)水溶液的pH，能使蛋白質(zhì)的NH+與COO-數(shù)目相等呈電中性，此時(shí)蛋白質(zhì)無電泳，在水中電解度小，并發(fā)生沉淀。

電泳：一個(gè)帶電荷的離子或膠體顆粒在電場中可向一極移動(dòng)。

原理：在一定的pH緩沖液中，緩沖液的pH大于Hb等電點(diǎn)，其帶負(fù)電，在電場中向陽極移動(dòng)；反之向陰極移動(dòng)。由于各種Hb珠蛋白肽鏈結(jié)構(gòu)不同，其等電點(diǎn)不同，電泳方向和速度亦不同，故可分離出不同的區(qū)帶，對區(qū)帶進(jìn)行電泳掃描，可進(jìn)行Hb定量分析。(+)HJKAGDE(-)

1.HbH增多是HbH病，為α-地中海貧血的一種；HbA2明顯增高見于輕型β地中海貧血；HbF明顯增高見于中重型β地中海貧血。

2.正常值：醋纖法（PH8.6）HbA96%~98%，HbA21.0%~3.1%，HbF＜2%電泳結(jié)果CAA2FA異常正常2.胎兒蛋白HbF（22）酸洗脫試驗(yàn)：含HbF紅細(xì)胞著色原理：HbF抗酸力強(qiáng)臨床意義：臍帶血、新生兒、嬰兒陽性成人小于1%地中海貧血輕者少數(shù)紅細(xì)胞陽性地中海貧血重癥陽性細(xì)胞增多

3.HbF定量測定（堿變性試驗(yàn)）:

原理：堿性溶液中HbF不易變性沉淀，可測定濾液中Hb量臨床意義：2歲-成人HbF<2%，>4%為異常重型地貧80-90%AL、AA、淋巴瘤等可輕度升高

4.HbA2定量測定

診斷輕型地貧的重要依據(jù)5.限制性內(nèi)切酶譜分析基因診斷(四)、自身免疫性溶血性貧血檢測此時(shí)蛋白質(zhì)無電泳，在水中電解度小，并發(fā)生沉淀。陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿陽性（PNH），此試驗(yàn)可作為PNH的確診試驗(yàn)。含鐵血黃素尿試驗(yàn)（Rous試驗(yàn)）各種溶血均可減低，血管內(nèi)溶血減低最顯著高鐵血紅蛋白還原率＞75%(四)、自身免疫性溶血性貧血檢測(+)HJKAGDE(-)感染、創(chuàng)傷、糖皮質(zhì)激素治療、服用避孕藥物、肝外阻塞性黃疸可增高PK嚴(yán)重缺乏（純合子）熒光60min不消失主要見于遺傳性球形紅細(xì)胞增多癥3、自身溶血試驗(yàn)及糾正試驗(yàn)Hb（四聚體）鐵原理：在一定的pH緩沖液中，緩沖液的pH大于Hb等電點(diǎn)，其帶負(fù)電，在電場中向陽極移動(dòng)；溶血性貧血的分類（溶血的場所）多位于紅細(xì)胞邊緣，一個(gè)紅細(xì)胞含1～20個(gè)，多為1～2個(gè)，以含5個(gè)以上小體的紅細(xì)胞計(jì)數(shù)1、酸溶血試驗(yàn)(Ham試驗(yàn))主要見于遺傳性球形紅細(xì)胞增多癥自身免疫性溶血性貧血

（autoimmunehemolyticanemia,AIHA)PK嚴(yán)重缺乏（純合子）熒光60min不消失蔗糖溶液加強(qiáng)補(bǔ)體與紅細(xì)胞結(jié)合，使蔗糖進(jìn)入紅細(xì)胞，導(dǎo)致溶血增強(qiáng)堿性溶液中HbF不易變性沉淀，可測定濾液中Hb量（五）、陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿

paroxysmalnoturnalhemoglobinuria,PNH

為獲得性紅細(xì)胞膜缺陷引起的慢性血管內(nèi)溶血

常在睡眠時(shí)加重

也可伴有發(fā)作性睡眠性血紅蛋白尿和全血細(xì)胞減少自身免疫性溶血性貧血

（autoimmunehemolyticanemia,AIHA)定義：體內(nèi)免疫異常，產(chǎn)生自身抗體、補(bǔ)體，結(jié)合在紅細(xì)胞膜上使紅細(xì)胞破壞加速病因：尚未完全闡明，可能因素：病毒感染可激活多克隆B細(xì)胞或化學(xué)物與紅細(xì)胞膜相結(jié)合，改變其抗原性，導(dǎo)致自身抗體產(chǎn)生分類：

可為原發(fā)性的，也可繼發(fā)于結(jié)締組織病、造血系統(tǒng)腫瘤、感染等按抗體反應(yīng)最適溫度分為溫抗體型和冷抗體型，后者又分為冷凝集素綜合征和陣發(fā)性冷性血紅蛋白尿1.Coombs試驗(yàn)（抗人球蛋白試驗(yàn)）

原理：不完全抗體(IgG)，無法架接兩個(gè)鄰近的紅細(xì)胞，而只能和一個(gè)紅細(xì)胞抗原相結(jié)合。抗人球蛋白抗體是完全抗體,可與多個(gè)不完全抗體的Fc段相結(jié)合,導(dǎo)致紅細(xì)胞凝集現(xiàn)象,稱為抗人球蛋白試驗(yàn)陽性。

目的：檢查紅細(xì)胞表面的或血清中游離的不完全抗體，用于診斷AIHA。直接CoombsTest(+)說明病人RBC表面上包被有不完全抗體間接CoombsTest(+)則說明病人血清中存在著不完全抗體Coombs血清（抗人球蛋白血清）（1）直接試驗(yàn)１．正常人：陰性２．直接反應(yīng)陽性，最常見于AIHA（其他有藥物誘發(fā)的溶貧、陣發(fā)性冷性Hb尿、新生兒同種免疫溶血病、SLE、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、惡性淋巴瘤等）。目的：測定吸附于紅細(xì)胞表面的不完全抗體方法：結(jié)果：（2）間接試驗(yàn)有過?？贵w時(shí)直接、間接均為陽性。AIHA分三型：C3型12%，IgG型24%，IgG+C3型60%。冷凝集素病為IgM抗體。目的：測定血清中游離的不完全抗體方法：結(jié)果：間接陽性，見于AIHA，正常人為陰性。病人血清正常RBC抗IgG2.冷凝集素試驗(yàn)原理冷凝激素是可逆性抗體：低溫時(shí)可與自身紅細(xì)胞、O型紅細(xì)胞、患者同型紅細(xì)胞發(fā)生凝集，溫度升高時(shí)，凝集塊又復(fù)消失參考值效價(jià)低于1:40，反應(yīng)最高溫度4℃臨床意義某些AIHA很高3.冷熱雙相溶血試驗(yàn)原理：陣發(fā)性寒冷性血紅蛋白尿癥（PCH）患者的血清中有雙相溶血素，在0-4C時(shí)，溶血素與紅細(xì)胞結(jié)合，并吸附補(bǔ)體，但不溶血；當(dāng)升溫至30-37C則發(fā)生溶血參考值：陰性臨床意義：

陽性見于陣發(fā)性寒冷性血紅蛋白尿患者（五）、陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿

paroxysmalnoturnalhemoglobinuria,PNH

為獲得性紅細(xì)胞膜缺陷引起的慢性血管內(nèi)溶血

常在睡眠時(shí)加重

也可伴有發(fā)作性睡眠性血紅蛋白尿和全血細(xì)胞減少1、酸溶血試驗(yàn)(Ham試驗(yàn))

原理：PNH患者紅細(xì)胞膜對補(bǔ)體敏感,在酸性(pH6.4～6.5)條件下,能被正常人新鮮血清(含補(bǔ)體)所溶解,產(chǎn)生酸溶血現(xiàn)象。臨床意義：正常人陰性陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿陽性（PNH），此試驗(yàn)可作為PNH的確診試驗(yàn)。2.蔗糖溶血試驗(yàn)（sucrosehemolysistest)原理：蔗糖溶液加強(qiáng)補(bǔ)體與紅細(xì)胞結(jié)合，使蔗糖進(jìn)入紅細(xì)胞，導(dǎo)致溶血增強(qiáng)臨床意義：敏感性最高，特異性差是PNH的篩選試驗(yàn)陰性?？膳懦齈NH，陽性需再做Ham試驗(yàn)。陽性率90-91%。3.蛇毒因子溶血試驗(yàn)原理：蛇毒因子直接激活補(bǔ)體C3，旁路途徑激活補(bǔ)體系統(tǒng)，攻擊PNH病人紅細(xì)胞臨床意義：是特異性PNH試驗(yàn)，敏感性優(yōu)于Ham試驗(yàn)常用的溶血性貧血病因?qū)嶒?yàn)檢查項(xiàng)目項(xiàng)目結(jié)果常見疾病紅細(xì)胞脆性試驗(yàn)增高遺傳性球形紅細(xì)胞增多癥抗人球蛋白試驗(yàn)陽性AIHA；藥物免疫性溶血性貧血；新生兒同種免疫容血?。焕淠鼐C合癥酸溶血試驗(yàn)陽性PNH（確診試驗(yàn)）蔗糖溶血試驗(yàn)陽性PNH（篩選試驗(yàn)）高鐵血紅蛋白還原試驗(yàn)還原率減低G6PD缺乏癥血紅蛋白電泳異常用于檢查HbC、HbBart’S等乳酸NAD（無熒光）蔗糖溶液加強(qiáng)補(bǔ)體與紅細(xì)胞結(jié)合，使蔗糖進(jìn)入紅細(xì)胞，導(dǎo)致溶血增強(qiáng)含鐵血黃素尿試驗(yàn)（Rous試驗(yàn)）hemolyticanemia----指各種原因?qū)е录t細(xì)胞生存時(shí)間縮短、破壞增多或加速，骨髓代償造血功能不足時(shí)所發(fā)生的一類貧血。參考值：＜50mg/L(1-5mg/dl)6-磷酸葡萄糖酸NADPHGSSGH20高鐵血紅蛋白目的：檢查紅細(xì)胞表面的或血清中游離的不完全抗體，用于診斷AIHA。陽性見于陣發(fā)性寒冷性血紅蛋白尿患者此時(shí)蛋白質(zhì)無電泳，在水中電解度小，并發(fā)生沉淀。肝病、傳單、先天性無結(jié)合珠蛋白血癥減少或消失葡萄糖-6-磷酸脫氫酶熒光斑點(diǎn)試驗(yàn)和活性測定丙酮酸NAPH（5）尿含鐵血黃素試驗(yàn)（＋）增生明顯活躍，紅系顯著增生，粒系相對減少，巨核系一般正常提示G6PD活力↓，74～31%為G-6PD缺乏的雜合子（紅棕（2）

HB結(jié)構(gòu)異常：海洋性貧血如腎小管上皮有含鐵血黃素，該試驗(yàn)陽性增生明顯活躍，紅系顯著增生，粒系相對減少，巨核系一般正常變性珠蛋白小體生成試驗(yàn)參考值：＜50mg/L(1-5mg/dl)結(jié)果:正常人標(biāo)本呈紅色目的：測定吸附于紅細(xì)胞表面的不完全抗體項(xiàng)目結(jié)果常見疾病HbA2增高地貧HbF增高地貧冷熱溶血試驗(yàn)陽性PCH病TheEnd溶血性貧血篩查血清結(jié)合珠蛋白測定參考值：0.7-1.5g/L臨床意義：各種溶血均可減低，血管內(nèi)溶血減低最顯著肝病、傳單、先天性無結(jié)合珠蛋白血癥減少或消失感染、創(chuàng)傷、糖皮質(zhì)激素治療、服用避孕藥物、肝外阻塞性黃疸可增高1、

紅細(xì)胞滲透脆性試驗(yàn)原理:正常紅細(xì)胞為雙凹圓盤狀,在低滲鹽水中吸水膨脹的適應(yīng)性較大(可增加70%的體積而不破裂)遺傳性球形細(xì)胞增多癥等紅細(xì)胞的表面積/體積(S/V)的比值小,對低滲鹽水的適應(yīng)性小(脆性增大)本試驗(yàn)是測定紅細(xì)胞在一系列不同濃度低滲氯化鈉鹽水內(nèi)開始溶血和完全溶血的氯化鈉濃度，檢測其對不同濃度的低滲鹽水溶血的抵抗力。

2、紅細(xì)胞孵育滲透脆性試驗(yàn)

原理

37℃孵育24小時(shí)，細(xì)胞內(nèi)葡萄糖消耗增加，ATP減少，鈉離子泵出減少，細(xì)胞膨脹，脆性增高。

參考值

未孵育50%溶血4~4.45g/LNaCl

孵育50%溶血4.65~5.9g/LNaCL

臨床意義——常用于輕型遺傳球、遺傳性非球形細(xì)胞溶血的診斷

脆性增高遺傳性球形紅細(xì)胞增多癥脆性減低缺鐵性貧血、珠蛋白生成障礙性貧血、鐮形細(xì)胞貧血、脾切除術(shù)后（二）紅細(xì)胞酶缺陷的檢驗(yàn)

定義：紅細(xì)胞酶缺陷所致溶血性貧血又稱紅細(xì)胞酶病，指參與紅細(xì)胞代謝的酶由于基因缺陷，導(dǎo)致活性改變而發(fā)生溶血的一組疾病內(nèi)容：高鐵血紅蛋白還原試驗(yàn)氰化物-抗壞血酸試驗(yàn)變性珠蛋白小體生成試驗(yàn)葡萄糖-6-磷酸脫氫酶熒光斑點(diǎn)試驗(yàn)和活性測定丙酮酸激酶熒光篩選試驗(yàn)和活性測定

1.血紅蛋白電泳蛋白質(zhì)的兩性性質(zhì)—是由氨基酸的NH+與COO-

決定的。等電點(diǎn)—調(diào)節(jié)水溶液的pH，能使蛋白質(zhì)的NH+與COO-數(shù)目相等呈電中性，此時(shí)蛋白質(zhì)無電泳，在水中電解度小，并發(fā)生沉淀。

電泳：一個(gè)帶電荷的離子或膠體顆粒在電場中可向一極移動(dòng)。

原理：在一定的pH緩沖液中，緩沖液的pH大于Hb等電點(diǎn)，其帶負(fù)電，在電場中向陽極移動(dòng)；反之向陰極移動(dòng)。由于各種Hb珠蛋白肽鏈結(jié)構(gòu)不同，其等電點(diǎn)不同，電泳方向和速度亦不同，故可分離出不同的區(qū)帶，對區(qū)帶進(jìn)行電泳掃描，可進(jìn)行Hb定量分析。1.Coombs試驗(yàn)（抗人球蛋白試驗(yàn)）

原理：不完全抗體(IgG)，無法架接兩個(gè)鄰近的紅細(xì)胞，而只能和一個(gè)紅細(xì)胞抗原相結(jié)合。抗人球蛋白抗體是完全抗體,可與多個(gè)不完全抗體的Fc段相結(jié)合,導(dǎo)致紅細(xì)胞凝集現(xiàn)象,稱為抗人球蛋白試驗(yàn)陽性。

目的：檢查紅細(xì)胞表面的或血清中游離的不完全抗體，用于診斷AIHA。直接CoombsTest(+)說明病人RBC表面上包被有不完全抗體間接CoombsTest(+)則說明病人血清中存在著不完全抗體此時(shí)蛋白質(zhì)無電泳，在水中電解度小，并發(fā)生沉淀。46%NaCl溶液——部分紅細(xì)胞破裂如腎小管上皮有含鐵血黃素，該試驗(yàn)陽性（Ⅰ型）葡萄糖6磷酸脫氫酶缺陷癥（Ⅰ型）葡萄糖6磷酸脫氫酶缺陷癥地中海貧血輕者少數(shù)紅細(xì)胞陽性2、紅細(xì)胞孵育滲透脆性試驗(yàn)1、酸溶血試驗(yàn)(Ham試驗(yàn))5、丙酮酸激酶熒光篩選試驗(yàn)和活性測定此時(shí)蛋白質(zhì)無電泳，在水中電解度小，并發(fā)生沉淀。主要見于遺傳性球形紅細(xì)胞增多癥2、紅細(xì)胞孵育滲透脆性試驗(yàn)PK嚴(yán)重缺乏（純合子）熒光60min不消失NADPH還原型輔酶Ⅱ肝病、傳單、先天性無結(jié)合珠蛋白血癥減少或消失葡萄糖-6-磷酸脫氫酶熒光斑點(diǎn)試驗(yàn)和活性測定（Ⅰ型）葡萄糖6磷酸脫氫酶缺陷癥34