實驗植物細胞切片的制作

實驗植物細胞切片的制作第一頁，共十八頁，編輯于2023年，星期二二、實驗用品和材料1、顯微鏡、尖嘴鑷子、刀片、載玻片、蓋玻片、吸水紙、解剖針、紗布、碘液。2、蠶豆（芹菜）莖和葉3、洋蔥或玉米根尖縱切永久制片4、南瓜或向日葵莖橫、縱切永久制片.5、洋蔥鱗葉、馬鈴薯塊莖。第二頁，共十八頁，編輯于2023年，星期二三、內(nèi)容與方法（一）臨時切片制作１、徒手切片法（重點）２、整體裝片

適合于植物體形小而扁平的材料。如菌絲、孢子束、蘚類。３、涂抹法

用于極小的植物體或組織。如細菌，酵母，花粉，淀粉，晶體等。第三頁，共十八頁，編輯于2023年，星期二4、撕片法

適用于某些植物莖、葉容易撕下表皮的植物，如洋蔥鱗莖、蠶豆葉等。5、壓片法適用于幼嫩組織中細胞的觀察，如根尖，莖尖生長點的細胞有絲分裂及花粉母細胞染色體等。第四頁，共十八頁，編輯于2023年，星期二徒手切片法第五頁，共十八頁，編輯于2023年，星期二徒手切片法

1、取材選取待觀察的植物材料，初步切取大約3cm長的小塊，再依切片的具體要求，將組織塊修整為0.5cm的材料塊。第六頁，共十八頁，編輯于2023年，星期二2、切片1）以左手夾住材料，用右手平穩(wěn)地握住刀片。2）使刀片與材料的斷面保持平行，刀口自左上方斜向右下方，動作要均勻有力。3）材料與刀片須常以水濕潤。4）切下的薄片，立即用毛筆蘸水后粘取，移入盛有清水的培養(yǎng)皿內(nèi)。第七頁，共十八頁，編輯于2023年，星期二3、選片1）切片完整，在培養(yǎng)皿中選擇薄而均勻，且切面完整的組織切片撈出;2）放在載玻片上作臨時水裝片，然后置于顯微鏡下觀察；3）如果結(jié)構能被清晰地顯示出來，則可制成永久保存封片。第八頁，共十八頁，編輯于2023年，星期二石蠟切片機第九頁，共十八頁，編輯于2023年，星期二（二）永久裝片的制作1、材料預處理

將材料裝在25ml規(guī)格的小指管，加入甘油—酒精軟化劑（甘油1份，70%酒精1份）8ml封蓋后在電熱恒溫水浴鍋50℃18h，第二天升溫至60℃8h進行軟化。第十頁，共十八頁，編輯于2023年，星期二2、蠟塊制取1）逐級脫水

將上述經(jīng)軟化的材料轉(zhuǎn)入250ml已洗凈的輸液瓶中加入40ml，70%酒精脫水24h。分別加入各級酒精40ml，70%酒精脫水24h，85%酒精脫水12h，95%酒精脫水2h，無水酒精脫水1h。同時回收各級酒精。2）染色

番紅酒精染液染色（1g番紅溶于100ml50%酒精中，紗布過濾）染色24h。第十一頁，共十八頁，編輯于2023年，星期二3）透明

轉(zhuǎn)入1/2二甲苯＋1/2無水酒精混合液20ml透明1h，純二甲苯20ml透明1h,再用純二甲苯20ml透明40min，并回收各液。4）浸蠟

將透明過的材料轉(zhuǎn)入50ml小燒杯,在恒溫箱內(nèi)加入預先在溫度保持在56～58℃恒溫箱溶化并過濾的石蠟15ml，使材料完全被純二甲苯與石蠟浸沒，并使溫度保持在36～38℃,過夜浸蠟24h，待二甲苯完全揮發(fā)，回收石蠟,再加入溶化并過濾的純石蠟40ml，溫度保持在36～38℃1h，升溫至56℃，使石蠟保持溶化狀態(tài)。第十二頁，共十八頁，編輯于2023年，星期二5）包埋：將浸蠟完全的材料倒入預先制成的光滑的硬紙（10.0×1.0×1.0㎝）制成的紙盒中制取蠟塊，在恒溫箱門的低坎處擺好紙盒，并寫上名稱，使其一面緊貼恒溫箱的受熱金屬板，紙盒底面緊貼恒溫箱底面金屬板，倒入溶化石蠟0.2～0.3㎝厚的薄層，2min后待薄層稍有凝固時將材料依次排列于其上，再倒入溶化石蠟，并用燒熱的解剖針刺破其中的氣泡，提著紙盒兩端預留的盒耳將紙盒浸入盛有冷水的盆中冷卻制成石蠟塊。第十三頁，共十八頁，編輯于2023年，星期二6）石蠟塊的修整：剝?nèi)ゼ埡?，用銳利的單面刀片把石蠟塊切分為2㎝長的小蠟塊，并將各小蠟塊的各面修整平，再將其修成長楔形。3、切片1）固定石蠟塊：用在酒精燈上預熱好的解剖刀，融化修整好的石蠟塊中少許蠟后，立即粘牢在小木塊（2.5

×2×1.5cm）上，待蠟完全凝固結(jié)實后，將小木塊夾入切片機的固定夾板中固定；2）切片：調(diào)整切片機的切片厚度為8～14μm,切取石蠟塊薄片。第十四頁，共十八頁，編輯于2023年，星期二4、粘貼展平

選取潔凈的載玻片，于中央用火柴棒粘取明膠粘貼劑（明膠2g電熱恒水浴鍋60℃水浴溶于1000ml蒸餾水，紗布過濾），展成一薄層或滴加一滴蛋白甘油（取雞蛋一個敲破流出蛋清，甘油即丙三醇，此粘貼劑較明膠粘貼劑理想），用細玻棒展成一薄層，加蒸餾水一滴，挑取理想的蠟帶貼于粘貼劑上，在酒精燈火焰稍過3～4來回，或恒溫37℃展片臺6min，使蠟展在粘貼劑上并展平。將展平的材料連同一側(cè)貼有標簽的載玻片，置于37℃電熱恒溫箱24h，使水分蒸干，或恒溫37℃展片臺12h，或室內(nèi)自然晾干。第十五頁，共十八頁，編輯于2023年，星期二5、染色制片1）脫蠟：將粘有蠟片的載玻片排列在裝片架上，轉(zhuǎn)入盛有400ml純二甲苯的1000ml大燒杯中20min，杯口用塑料袋封嚴，再轉(zhuǎn)入盛有400ml純二甲苯的1000ml大燒杯中10min，杯口同樣用塑料袋封嚴，使石蠟完全溶解。2）過渡：將脫蠟完全的裝片架轉(zhuǎn)入盛有400ml1/2二甲苯＋1/2純酒精混合液的1000ml大燒杯中過渡5min，杯口仍用塑料袋封嚴。第十六頁，共十八頁，編輯于2023年，星期二3）下降至70%酒精（水）：分別經(jīng)400ml純酒精、95%、85%、70%酒精割400ml（50%及30%酒精下降至蒸餾水），并回收各液。4）番紅復染色：400ml1%番紅酒精（水液）再染色2h。回收染液，并用自來水洗去多余的染液。5）繼續(xù)脫水：用30%、50%和70%酒精400ml各處理30s～1min，并回收各液。6）固綠復染：用0.1%固綠的95%酒精400ml復染10～30s，回收染液。第十七頁，共十八頁，編輯于2023年，星期二7）再繼續(xù)脫水：用95%酒精和兩次純酒精徹底脫水，每次10s～1min，回收各液。8）透明：用純酒精和二甲苯各半