食品中金黃葡萄球菌及其檢驗

食品中金黃葡萄球菌及其檢驗第七章食品中致病球菌的檢驗第一節(jié)金黃葡萄球菌及其檢驗金黃色葡萄球菌及其檢驗金黃色葡萄球菌屬于微球菌科葡萄球菌屬，金黃色葡萄球菌是該屬中的一個種引起人類疾病的葡萄球菌主要是金黃色葡萄球菌，除可引起皮膚組織炎癥外，還可產(chǎn)生腸毒素如果該菌在食品中大量生長繁殖，產(chǎn)生毒素,人誤食了含有毒素的食品，就會發(fā)生食物中毒，因此，由該菌引起的中毒為毒素型食物中毒食品中存在金黃色葡萄球菌對人的健康是一種潛在威脅,所以檢驗食品中的金黃葡萄球菌及數(shù)量具有實際意義主要內(nèi)容一、金黃色葡萄球菌的生物學(xué)特性二、金黃色葡萄球菌的檢驗一、金黃色葡萄球菌的生物學(xué)特性、形態(tài)與染色分型簡介、培養(yǎng)特性生化特性毒素與酶抵抗力致病性、形態(tài)與染色：(staphylococcusaureus)典型的金黃色葡萄球菌為球型直徑mm左右顯微鏡下排列成葡萄串狀。金黃色葡萄球菌無芽胞、鞭毛大多數(shù)無莢膜。革蘭氏染色陽性。典型的金黃色葡萄球菌為球型直徑mm左右顯微鏡下排列成葡萄串狀。葡萄球菌革蘭染色鏡下圖金黃色葡萄球菌的掃描電鏡照片金黃色葡萄球菌的透射電鏡照片分型簡介血清學(xué)分型：金黃色葡萄球菌水解獲得兩種抗原成分：蛋白抗原和多糖抗原蛋白抗原主要為葡萄球菌A蛋白3?人)是一種表面抗原以上金黃色葡萄球菌有此抗原無特異性。多糖抗原為半抗原有型特異性。噬菌體分型根據(jù)腸毒素分型根據(jù)血漿凝固酶分型、培養(yǎng)特性金黃色葡萄球菌營養(yǎng)要求不高在普通培養(yǎng)基上生長良好需氧或兼性厭氧最適生長溫度°C,最適生長pH。金黃色葡萄球菌有高度的耐鹽性可在NaCl肉湯中生長。在肉湯培養(yǎng)基中生長迅速。C,培養(yǎng)后h,呈均勻渾濁生長，延長培養(yǎng)時間，管底出現(xiàn)少量沉淀，輕輕振搖，沉淀物上升，旋即消散,培養(yǎng)d后可形成很薄的菌環(huán)，在管底則形成多量粘稠沉淀。、培養(yǎng)特性葡萄球菌在普通營養(yǎng)瓊脂平板上培養(yǎng)h后，可形成圓形凸起、邊沿整齊、表面光滑、濕潤、有光澤、不透明的菌落直徑mm?？僧a(chǎn)生不同的色素。如金黃、檸檬色素為脂溶性不溶于水故色素只限于培養(yǎng)物而不外滲至培養(yǎng)基中。金黃色葡萄球菌在血平板上形成的菌落較大多數(shù)致病菌株可產(chǎn)生溶血毒素菌落周圍形成透明的溶血圈（B溶血圈）非致病性球菌則無此現(xiàn)象。金黃色葡萄球菌的平板菌落照片（普通培養(yǎng)基）生化特性葡萄球菌大多數(shù)菌株可分解葡萄糖、麥芽糖、乳糖、蔗糖產(chǎn)酸不產(chǎn)氣。致病菌株多能分解甘露醇產(chǎn)酸。甲基紅反應(yīng)陽性VP反應(yīng)弱陽性。許多菌株可分解精氨酸水解尿素產(chǎn)氨還原硝酸鹽液化明膠。金黃色葡萄球菌具有較強的抵抗力對磺胺類藥物敏感性低但對青霉素、紅霉素等高度敏感。金黃色葡萄球菌在甘露醇鹽平板上的菌落金黃色葡萄球菌的致病力強弱主要取決于其產(chǎn)生的毒素和侵襲性酶。產(chǎn)生的毒素和酶主要有下列幾種：（）溶血毒素：外毒素可使動物紅細胞溶解培養(yǎng)時出現(xiàn)溶血環(huán)。按抗原性不同至少有a、B、Y、6、e五種對人類致病作用的主要是a溶血素。a溶血素是一種外毒素具有良好的抗原性。經(jīng)甲醛處理可制成類毒素。毒素與酶毒素與酶（）殺白細胞素：使寄主白細胞崩解死亡是一種毒性蛋白。（能殺死人和兔的多形核粒細胞和巨噬細胞。此毒素有抗原性不耐熱產(chǎn)生的抗體能阻止葡萄球菌感染的復(fù)發(fā)。）（）腸毒素：金黃色葡萄球菌能產(chǎn)生數(shù)種引起急性胃腸炎的蛋白質(zhì)性腸毒素分為A、B、C、C、D、E及F六種血清型。該毒素為一種可溶性蛋白質(zhì)耐熱°C分鐘不破壞。腸毒素可引起急性胃腸炎即食物中毒以A型引起的食物中毒最多。毒素與酶毒素與酶（）血漿凝固酶：血液凝固的本質(zhì)是血漿內(nèi)的可溶性纖維蛋白原轉(zhuǎn)變?yōu)椴蝗芙獾睦w維蛋白正常人體在鈣離子的參與下凝血酶原轉(zhuǎn)變?yōu)槟冈谘褐屑尤腓蹤此徕c，可與血漿中的鈣離子結(jié)合成不解離的枸櫞酸鈣，凝血酶不能形成,血凝的化學(xué)反應(yīng)不能進行血漿凝固酶是能使含有枸椽酸鈉或肝素抗凝劑的人或兔血漿發(fā)生凝固的酶類物質(zhì)致病菌株多能產(chǎn)生如金黃葡萄球菌。常作為鑒別葡萄球菌有無致病性的重要標(biāo)志。當(dāng)金黃色葡萄球菌侵入人體時該酶使血液或血漿中的纖維蛋白沉積于菌體表面或凝固阻礙吞噬細胞的吞噬作用。同時凝固酶集聚在菌體四周亦能保護病菌不受血清中殺菌物質(zhì)的作用。葡萄球菌形成的感染易局部化與此酶有關(guān)。（）溶纖維蛋白酶可使人及家兔、犬的已凝固的纖維蛋白溶解。溶纖維蛋白酶是一種激酶可激活血漿蛋白酶原成為血漿蛋白酶而使纖維蛋白溶解。初次培養(yǎng)后菌落周圍若出現(xiàn)一個不透明圈表示產(chǎn)生凝固酶繼續(xù)培養(yǎng)時不透明圈消失說明是溶纖維蛋白酶作用的結(jié)果。（）透明質(zhì)酸酶透明質(zhì)酸酶具有高度的粘稠性是機體結(jié)締組織中基質(zhì)的主要成分。它被透明質(zhì)酸酶水解后結(jié)締組織細胞間失去粘性呈疏松狀態(tài)有利于細菌和毒素在機體內(nèi)擴散因此透明質(zhì)酸酶又稱為擴散因子。毒素與酶（）脫氧核糖核酸酶金黃色葡萄球菌產(chǎn)生的脫氧核糖核酸酶能耐受高溫可用來作為依據(jù)鑒定金黃色葡萄球菌（）其它葡萄球菌還可以產(chǎn)生表皮溶解毒素、蛋白酶、磷酸酶、卵磷脂酶、脂酶、肽酶等使細菌具有侵襲力。毒素與酶抵抗力金黃色葡萄球菌對熱和干燥的抵抗力較一般無芽胞細菌強加熱°C分鐘才被殺死。在干燥的膿汁、痰液中可存活月。石炭酸中分鐘死亡。對堿性染料敏感十萬分之一的龍膽紫液即可抑制其生長。對青霉素、紅霉素和慶大霉素高度敏感但易產(chǎn)生耐藥性。葡萄球菌的致病性（）引起的主要疾病化膿性感染：如毛囊炎、癤、癰、傷口化膿、氣管炎、肺炎、中耳炎、腦膜炎、心包炎等全身感染：如敗血癥、膿毒血癥等食物中毒金黃色葡萄球菌引起的下顎感染金黃色葡萄球菌引起的須瘡感染葡萄球菌的致病性（）生存場所金黃色葡萄球菌在自然界中無處不在空氣、水、灰塵及人和動物的排泄物中都可找到。作為人和動物的常見病原菌其主要存在于人和動物的鼻腔、咽喉、頭發(fā)上以上健康人的皮膚上都有金黃色葡萄球菌存在。因而食品受其污染的機會很多。葡萄球菌的致病性（）流行病學(xué)特點a發(fā)病率高近年來美國疾病控制中心報告由金黃色葡萄球菌引起的感染占第二位僅次于大腸桿菌。b季節(jié)分布多見于春夏季。葡萄球菌的致病性（）流行病學(xué)特點C中毒食品種類多如奶、肉、蛋、魚及其制品。此外剩飯、油煎蛋、糯米糕及涼粉等引起的中毒事件也有報道。d污染食品途徑：食品加工人員、炊事員或銷售人員帶菌造成食品污染食品在加工前本身帶菌或在加工過程中受到了污染產(chǎn)生了腸毒素引起食物中毒熟食制品包裝不嚴運輸過程受到污染奶?；蓟撔匀橄傺谆蚯菪缶植炕摃r對肉體其他部位的污染。上呼吸道感染患者鼻腔帶菌率所以人畜化膿性感染部位常成為污染源。葡萄球菌的致病性（）流行病學(xué)特點e腸毒素引起的中毒多金黃色葡萄球菌腸毒是個世界性衛(wèi)生問題在美國由金黃色葡萄球菌腸毒素引起的食物中毒占整個細菌性食物中毒的加拿大則更多占我國每年發(fā)生的此類中毒事件也非常多。葡萄球菌的致病性（）流行病學(xué)特點e腸毒素引起的中毒多腸毒素形成條件：存放溫度在。C內(nèi)溫度越高產(chǎn)毒時間越短存放地點通風(fēng)不良氧分壓低易形成腸毒素食物種類含蛋白質(zhì)豐富水分多同時含一定量淀粉的食物腸毒素易生成。二、金黃色葡萄球菌的檢驗方法：增菌培養(yǎng)法、直接計算法（一）檢驗原理:金黃葡萄球菌耐鹽性強在gL氯化鈉培養(yǎng)基中能生長適宜生長的鹽濃度為可以利用這個特性對金黃葡萄球菌增菌抑制雜菌。金黃葡萄球菌可產(chǎn)生溶血素在血平板上生長菌落周圍有透明的溶血環(huán)可產(chǎn)生卵磷脂酶分解卵磷脂產(chǎn)生甘油脂和可溶性磷酸膽堿所以在bairdparker（含卵黃和亞碲酸鉀）平板上生長菌落為黑色周圍有一渾濁帶,在其外層有一透明圈利用此特性可分離金黃葡萄球菌金黃葡萄球還可產(chǎn)生凝固酶酶可使血漿中的可溶性纖維蛋白原變成不溶解的纖維蛋白使血漿凝固這是鑒定致病性金黃葡萄球菌的重要指標(biāo)是否是致病的金黃葡萄球菌主要看它是否產(chǎn)生凝固酶。二、金黃色葡萄球菌的檢驗增菌培養(yǎng)法（二）檢驗程序金黃色葡萄球菌檢驗程序如圖檢樣一稀釋一NaCl肉湯增菌培養(yǎng)一血平板、BP分離一鏡檢、血漿凝固E試驗一報告結(jié)果二、金黃色葡萄球菌的檢驗（三）操作步驟、檢樣處理稱取g固體樣品吸取mL液體樣品加入mL滅菌生理鹽水固體樣品研磨或置均質(zhì)器中制成混懸液。、增菌吸取mL上述混懸液接種于氯化鈉肉湯或胰酪胨豆肉湯mL培養(yǎng)基內(nèi)置土。C溫箱培養(yǎng)h。在肉湯中呈混濁生長在胰酪陳大豆肉湯內(nèi)有時液體澄清菌量多時呈混濁生長二、金黃色葡萄球菌的檢驗、平板分離血平板：菌落成金黃色大而突起圓形不透明表面光滑周圍有透明溶血圈（B型）二、金黃色葡萄球菌的檢驗BP平板：主要成分及作用：氯化鋰、甘氨酸抑制非制病性葡萄球的生長丙酮酸鈉:促進葡萄球菌生長亞碲酸鉀:抑制G桿菌生長可被金黃色葡萄球菌還原為碲鹽呈黑色卵黃：含蛋白質(zhì)、卵磷、脂肪二、金黃色葡萄球菌的檢驗Baird—Parker平板土C培養(yǎng)h。圓形、光滑凸起、濕潤、直徑為mm顏色呈灰色到黑色邊緣為淡色周圍為一混濁帶在其外層有一透明圈。用接種針接觸菌落似有奶油樹膠的硬度。金黃葡萄球菌在Baird—Parker平板上的菌落形態(tài)二、金黃色葡萄球菌的檢驗、鏡檢及血漿凝固酶試驗挑取金黃色葡萄球菌可疑菌落進行革蘭氏染色。為革蘭氏陽性球菌排列是葡萄球狀無芽胞無莢膜致病性葡萄球菌菌體較小直徑約為mm。二、金黃色葡萄球菌的檢驗如發(fā)現(xiàn)葡萄球菌,再做血漿凝固E試驗吸?。盒迈r兔血漿mL放入于mmXmm試管內(nèi)再加入培養(yǎng)h的金黃色葡萄球菌肉浸液肉湯培養(yǎng)物mL振蕩搖勻放土°C溫箱或水浴內(nèi)每半小時觀察一次觀察h如呈現(xiàn)凝固即將試管傾斜或倒置時呈現(xiàn)凝塊者被認為陽性結(jié)果。同時以已知陽性和陰性葡萄球菌株及肉湯作為對照。金黃色葡萄球菌血漿凝固酶實驗二、金黃色葡萄球菌的檢驗直接計數(shù)方法吸取上述：混懸液進行十倍遞次稀釋根據(jù)樣品污染情況選擇不同濃度的稀釋液mL分別加入三塊Baird-Parker平板每個平板接種量分別為mL、mL、mL然后用滅菌L棒涂布整個平板。如水分不多吸收可將平板放在土C溫箱h等水分蒸發(fā)后反轉(zhuǎn)平皿置土C溫箱培養(yǎng)。四、金黃色葡萄球菌的檢驗在三個平板上點數(shù)周圍有混濁帶的黑色菌落并從中任選個菌落分別接種血平板土Ch培養(yǎng)后進行染色鏡檢、血漿凝固酶試驗步驟同增菌培養(yǎng)法。二、金黃色葡萄球菌的檢驗結(jié)果報告（）初步報告：根據(jù)血平板培養(yǎng)計數(shù)和鏡檢如發(fā)現(xiàn)有G葡萄串狀球菌存在且有溶血性則初步報告為：“有金黃色葡萄球菌存在g樣品約含多少?！保ǎ?/p>