殺蟲劑生物測定技術(shù)

殺蟲劑生物測定技術(shù)第一頁，共六十二頁，編輯于2023年，星期三標(biāo)準(zhǔn)試蟲殺蟲劑生物測定方法毒力的表示方法殺螨劑生物測定方法殺蟲劑田間藥效試驗第二頁，共六十二頁，編輯于2023年，星期三一、標(biāo)準(zhǔn)試蟲標(biāo)準(zhǔn)試蟲是指數(shù)種被普遍采用的具有一定代表性和經(jīng)濟意義及耐藥能力較穩(wěn)定而均勻的昆蟲群體。標(biāo)準(zhǔn)試蟲的大量供應(yīng)與質(zhì)量均勻是影響生物測定結(jié)果正確、穩(wěn)定與可靠的最基本因子，同時也是保證順利地開展和完成生物測定最基本的條件之一。

第三頁，共六十二頁，編輯于2023年，星期三（1）粘蟲（LeucaniaseparateWalker），代表鱗翅目咀嚼式口器食葉性害蟲。（可人工飼養(yǎng)）（2）玉米螟（Ostrinianubilalis），代表為害雜糧作物的鉆蛀性害蟲。（可人工飼養(yǎng)）（3）二化螟（Chilosuppressalis）,代表鉆蛀性水稻害蟲。（可人工飼養(yǎng)）常用的供試?yán)ハx有：第四頁，共六十二頁，編輯于2023年，星期三（4）還有三化螟、棉鈴蟲、地老虎農(nóng)業(yè)害蟲等。（5）衛(wèi)生害蟲（如蚊、蠅類）（6）倉庫害蟲（米象、赤擬谷盜等）（7）刺吸性害蟲（蚜螨類）第五頁，共六十二頁，編輯于2023年，星期三（1）在分類上或經(jīng)濟上有一定的代表性的不同種類的昆蟲；（2）對藥物敏感性符合要求；（3）容易飼養(yǎng)，能終年提供試材，使測定工作不受地區(qū)或季節(jié)的限制；（4）在試驗中便于控制操作。供試?yán)ハx的要求第六頁，共六十二頁，編輯于2023年，星期三二、殺蟲劑生物測定方法

（1）胃毒作用（2）觸殺作用（3）熏蒸作用（4）內(nèi)吸作用第七頁，共六十二頁，編輯于2023年，星期三夾毒葉片法液滴飼喂法口腔注射法

胃毒作用（stomachaction）的測定方法

第八頁，共六十二頁，編輯于2023年，星期三

葉片夾毒法適合于植食性、取食量大的咀嚼式口器的昆蟲，如鱗翅目幼蟲、蝗蟲等。其基本原理是用2張葉片，中間均勻地分布一層殺蟲藥劑，飼喂試蟲，按吞食葉片的面積計算吞食藥量。夾毒葉片法（sandwichmethod）第九頁，共六十二頁，編輯于2023年，星期三

對于舐吸式口器的昆蟲不宜用夾毒葉片法，如家蠅、果蠅、蜜蜂等昆蟲喜歡食糖液，可將一定量的殺蟲劑加入到糖液中，用微量注射器形成一定大小的液滴（0.001~0.01ml），直接飼喂昆蟲。液滴飼喂法（Feedingofmeasureddrops）第十頁，共六十二頁，編輯于2023年，星期三一般適用個體較大的咀嚼式昆蟲，如家蠶，鱗翅目幼蟲等，處理時，將藥劑溶解后用微量注射器或手細(xì)管點滴定量的藥液注入試蟲口器中，昆蟲吞食藥液后，轉(zhuǎn)入放有新鮮飼料的容器中培養(yǎng)觀察。這種方法由于從口腔注入藥液時易刺破口腔內(nèi)軟組織，技術(shù)難以掌握。因此，應(yīng)用較少?？谇蛔⑸浞?/p>

第十一頁，共六十二頁，編輯于2023年，星期三觸殺作用（contactaction）測定方法點滴法藥膜法或殘膜法浸液法第十二頁，共六十二頁，編輯于2023年，星期三室內(nèi)定量測定觸殺毒力最常用的方法。在測定觸殺毒力時，應(yīng)盡量避免藥劑從口器或氣孔進入蟲體。直接將藥液點滴到昆蟲的某一部位。多為幼蟲的前胸背板，溶劑迅速揮發(fā)，藥劑在體壁上形成藥膜而侵入體內(nèi)。點滴法第十三頁，共六十二頁，編輯于2023年，星期三

用噴霧法及噴粉法將藥劑定量地分布于一定表面上，如濾紙、玻璃容器內(nèi)壁及植物葉片等而形成一層均勻的藥膜。使昆蟲在藥膜上接觸一定時間（4~24h），檢查擊倒率或死亡率。求出藥劑對試蟲的毒力。藥膜法或殘膜法

第十四頁，共六十二頁，編輯于2023年，星期三

對于水生昆蟲（蚊幼蟲、螨類和蚜蟲）將藥劑配成5~7個不同濃度有藥液，摘取有一定數(shù)量蚜蟲的豆苗葉片，在不同藥液中浸3~5s，取出后，用吸水紙吸去多余的藥液，統(tǒng)計葉片上的蚜蟲數(shù)量，對照用清水處理。保濕24h，檢查蚜蟲的死亡數(shù)，計算死亡率及校正死亡率，求出LC50。浸液法第十五頁，共六十二頁，編輯于2023年，星期三

某些藥劑有內(nèi)吸性如許多有機磷和氨基甲酸酯類殺蟲劑可以通過植株的根、莖、葉等部位吸收到植株的內(nèi)部，隨著植物體液在體內(nèi)的傳導(dǎo)，當(dāng)害蟲取食或刺吸植物時，藥劑也隨之進入害蟲的體內(nèi)并將其殺死。內(nèi)吸作用（Systemicaction）的試驗方法第十六頁，共六十二頁，編輯于2023年，星期三內(nèi)吸殺蟲劑毒力的測定方法分為直接測定法和間接測定法2種。直接法包括莖或葉的局部涂藥、根際施藥及種子處理等。間接法是用處理后的植物，取其葉片研磨成為水劑，加在水中，測定對水生昆蟲的毒力。第十七頁，共六十二頁，編輯于2023年，星期三

定義殺蟲藥劑以氣體的方式通過害蟲的呼吸系統(tǒng)進入蟲體，而起到毒殺的作用稱熏蒸作用。

目的熏蒸作用毒力的測定的目的主要有2個：一是用鑒別殺蟲劑有無熏蒸作用；二是測定熏蒸劑的殺蟲毒力。

注意要求在一個密閉的條件下進行，且藥劑不與試蟲接觸。熏蒸作用（fumigationaction）測定方法第十八頁，共六十二頁，編輯于2023年，星期三毒力的表示方法及計算致死中量（LD50：Medianlethaldose）或致死中濃度（LC50：Medianlethalconcentration）：藥劑殺死某種生物群體50％所需的劑量（LD50）或濃度（LC50）。第十九頁，共六十二頁，編輯于2023年，星期三結(jié)果檢查與LD50計算胃毒作用觸殺作用第二十頁，共六十二頁，編輯于2023年，星期三

以夾毒葉片法為例

昆蟲取食后放在干凈容器中，加入新鮮的植物葉片，在24~72h后檢查死亡率。由于各昆蟲的取食量不同，因此必須單獨觀察記錄。第二十一頁，共六十二頁，編輯于2023年，星期三根據(jù)取食面積、單位面積上的著藥量（μg/g），根據(jù)單位體重受藥量，由小至大順序排列，由于在取食量較小時試蟲無死亡；隨著取食量加大，出現(xiàn)死、活均有出現(xiàn)的劑量范圍；再加大取食量，試蟲全部死亡。這三種表現(xiàn)自然分成三組：（1）生存組（2）生死組（3）死亡組。如實驗中三組數(shù)值均出現(xiàn)，則說明實驗成功，如缺其中一組，應(yīng)重做。生存組和死亡組是劃分生死組（中間組）界線的。第二十二頁，共六十二頁，編輯于2023年，星期三將中間組死蟲的每項單位體重藥量累加，除以總死蟲數(shù)得A；中間組活蟲的每項單位體重相加除以活蟲數(shù)得B。將A＋B除2即得致死中量（μg/g），計算公式為致死中量（LD50）＝（A＋B）/2第二十三頁，共六十二頁，編輯于2023年，星期三

供試藥劑設(shè)計5~6個濃度梯度，每個濃度為一個處理，每個處理40~60頭，重復(fù)4~6次，每個重復(fù)10頭。用微量點樣器在供試?yán)ハx的前胸背板上點一定體積的藥量，24~48h后檢查死亡蟲數(shù)。統(tǒng)計死亡率，計算LD50。觸殺毒力結(jié)果檢查第二十四頁，共六十二頁，編輯于2023年，星期三LD50（LC50）的計算死亡率（%）＝死蟲數(shù)/供試蟲數(shù)X100%校正死亡率（%）＝處理組死亡率－對照組死亡度/100－對照組死亡率X100單位體重受藥量（μg/g）＝處理濃度（ppm）X點滴藥量(μl)/試蟲平均體重(g)X100第二十五頁，共六十二頁，編輯于2023年，星期三LD50的計算方法作圖法Excel法最小2乘法第二十六頁，共六十二頁，編輯于2023年，星期三例：用點滴法測定辛硫磷對玉米螟5齡幼蟲的毒力，試蟲平均體重為0.046g/頭，每頭試蟲點滴0.8μl藥劑丙酮液，48h檢查試蟲死亡率，結(jié)果如表1-1。試計算辛硫磷對玉米螟5齡幼蟲的LD50。第二十七頁，共六十二頁，編輯于2023年，星期三第二十八頁，共六十二頁，編輯于2023年，星期三第二十九頁，共六十二頁，編輯于2023年，星期三第三十頁，共六十二頁，編輯于2023年，星期三第三十一頁，共六十二頁，編輯于2023年，星期三第三十二頁，共六十二頁，編輯于2023年，星期三第三十三頁，共六十二頁，編輯于2023年，星期三第三十四頁，共六十二頁，編輯于2023年，星期三第三十五頁，共六十二頁，編輯于2023年，星期三第三十六頁，共六十二頁，編輯于2023年，星期三第三十七頁，共六十二頁，編輯于2023年，星期三用計算器求毒力方程及LD50或LC50打開計算器的開關(guān)，先按MODE

2進入“LR”按INV

AC清除舊存數(shù)字按INV

MR清除貯存數(shù)字將濃度的對數(shù)值作為X輸入到XD,YD，將死亡率查機率值作為Y輸入到RUN順次輸入，輸完后，按Kout3檢查輸入數(shù)字的組數(shù)。第三十八頁，共六十二頁，編輯于2023年，星期三按INV7顯示的數(shù)字為a值按INV8顯示的數(shù)字為b值按INV9顯示的數(shù)字為r值已知ab，就可寫出回歸方程y=a+bx第三十九頁，共六十二頁，編輯于2023年，星期三求LC50或LD50、LC90、LC95

求LC50

，按5INVYX；再按INVLog，顯示的數(shù)字為LC50求LC90按6.2816INVYX；再按INVLog，顯示的數(shù)字為LC90

LC95

按6.6449INVYX；再按INVLog，顯示的數(shù)字為LC95

第四十頁，共六十二頁，編輯于2023年，星期三第四十一頁，共六十二頁，編輯于2023年，星期三（1）死亡率的校正：一般情況，若有對照死亡，需要校正，若對照死亡超過20%，應(yīng)重做；如對照死亡率小于5%時，也可不必校正。（2）死亡率的范圍：一般，至少有4個濃度處理試蟲的死亡率應(yīng)在10－90%。這樣計算得到的LD50更可靠。（3）相關(guān)系數(shù)R：一般應(yīng)在0.9以上。注意事項第四十二頁，共六十二頁，編輯于2023年，星期三葉片浸液法玻片浸液法葉片殘毒法

殺螨劑的毒力測定方法第四十三頁，共六十二頁，編輯于2023年，星期三1用盆栽豆苗（大豆苗）繁殖葉螨（如棉葉螨），測定時用成螨，且發(fā)育時間（日齡）一致。2將成螨轉(zhuǎn)到無蟲豆苗上，每株40頭左右。葉片浸液法第四十四頁，共六十二頁，編輯于2023年，星期三3將待測藥劑（乳油或可濕性粉劑）用水稀釋成系列濃度，每一濃度可配40~50ml，置于小燒杯中。4將接上螨的豆苗浸入藥液6s，取出后用吸水紙吸去多余藥液。處理時先用清水處理對照(CK)，再由低濃度至高濃度處理，每一濃度重復(fù)4~5次。第四十五頁，共六十二頁，編輯于2023年，星期三5處理后豆苗置于25℃恒溫箱中，保持24h后檢查死亡率。為了防止紅蜘蛛逃逸，可在葉柄基部涂上一圈凡士林。6將藥劑濃度取對數(shù)值，24h校正死亡率（或減退率）取機率值，用統(tǒng)計分析法求出毒力回歸式Y(jié)＝a+bx及LC50值。第四十六頁，共六十二頁，編輯于2023年，星期三本法適于測定各種雌成螨，飼養(yǎng)時必須將螨種鑒別、純化，使之為單一種類。以蘋果實生苗飼養(yǎng)山楂紅蜘蛛，以柑桔苗飼養(yǎng)柑桔紅蜘蛛，螨的齡期應(yīng)一致。浸玻片法

第四十七頁，共六十二頁，編輯于2023年，星期三1．將雙面尼龍膠帶剪成2cm長，貼在常用的載玻片的一端。2．用零毫毛筆挑起3～4日齡的雌成螨，將其背部粘在膠帶上，每行10頭，粘2~3行或用毛筆將雌成螨集中在一起。然后將貼在膠帶的玻片的膠面部分輕輕地壓向成螨背部，以粘著為準(zhǔn)，再用毛筆將重疊或不規(guī)則的或死亡的挑去，使其成行保留，這樣比較省時也省工。第四十八頁，共六十二頁，編輯于2023年，星期三3．用水將藥劑配成系列濃度，置于小燒杯中，用手持紙片無螨的一端，將粘有螨的一端置藥液中浸5秒鐘，取出后用吸水紙吸去多余藥液。對照用清水處理。各處理重復(fù)4次。

第四十九頁，共六十二頁，編輯于2023年，星期三4．取一白瓷盤，盤底鋪厚2cm的海綿，其上鋪一塊略小一點的藍(lán)布，再鋪一層塑料薄膜，然后加蒸餾水至藍(lán)布。將粘有螨的玻片平放在盤中，再用紗布罩住，置25℃，相對濕度85％左右溫室中，經(jīng)24h檢查死亡率。用毛筆尖輕輕觸動螨足，以不動者為死亡。求出毒力回歸式及LC50值。第五十頁，共六十二頁，編輯于2023年，星期三編號＿＿＿濃度＿＿＿名稱＿＿＿日期＿＿＿。。。。。。。。。。。。。。。。。。浸玻片法示意圖注：。表示為成螨第五十一頁，共六十二頁，編輯于2023年，星期三葉片殘效法此法適用于測定卵、若螨及背部剛毛過長的雌成螨（不易用浸玻片法）。

1在直徑為9cm的培養(yǎng)皿內(nèi)放入保溫的葉片2在葉片上接20頭雌成雌成螨，讓其在葉片上產(chǎn)卵，24h后移去成螨，保留螨卵。3將待測藥劑用水稀釋成5個系列濃度第五十二頁，共六十二頁，編輯于2023年，星期三4將有螨卵的葉片在待測藥液中浸5s，每一藥液濃度重復(fù)5次，對照用清水處理。5將培養(yǎng)皿保持在22℃，相對濕度95％恒溫箱內(nèi)，每天觀察記載卵的孵化數(shù)及若螨存活數(shù)，直至對照組全部孵化成若螨。6計算藥劑各濃度的殺卵或殺死若蟲的效果。求出藥劑殺卵或若蟲的毒方程及LC50。第五十三頁，共六十二頁，編輯于2023年，星期三殺蟲劑田間藥效試驗第五十四頁，共六十二頁，編輯于2023年，星期三

處理組死亡率－對照組死亡率校正死亡率（%）＝1－對照組死亡率X100注意：自然死亡在20％以內(nèi)，可以用上面的公式計