食用菌三級(jí)菌種制作技術(shù)

第二章食用菌制種技術(shù)

關(guān)于制種的幾個(gè)概念第一節(jié)制種場(chǎng)地、設(shè)備、用具及消毒藥品第二節(jié)三級(jí)菌種制作技術(shù)本章重點(diǎn)4.5學(xué)時(shí)第二章食用菌三級(jí)菌種制作技術(shù)有關(guān)概念菌種：由人工方法培育出來(lái)的純雙核菌絲體。母種：由孢子或者組織分離而得到的最初菌種。原種：將母種擴(kuò)大到新培養(yǎng)基上培育出來(lái)的菌絲體。栽培種：由原種再擴(kuò)大接種一次培養(yǎng)而得。直接應(yīng)用于生產(chǎn)。消毒和滅菌。第二章食用菌三級(jí)菌種制作技術(shù)母種原種第二章食用菌三級(jí)菌種制作技術(shù)栽培種第二章食用菌三級(jí)菌種制作技術(shù)第一節(jié)制種場(chǎng)地、設(shè)備等一、制種場(chǎng)地二、常用設(shè)備三、制種用具四、消毒藥品第二章食用菌三級(jí)菌種制作技術(shù)一、制種場(chǎng)地閑散房屋均可用。新建時(shí)選擇場(chǎng)地要注意：交通方便，水電齊全，周圍環(huán)境要衛(wèi)生。建造可參照“Ｕ”字型房，以方便生產(chǎn)。包括：配料室、滅菌室、冷卻室、接種室、菌種培養(yǎng)室、銷售室以及庫(kù)房等。第二章食用菌三級(jí)菌種制作技術(shù)第二章食用菌三級(jí)菌種制作技術(shù)第二章食用菌三級(jí)菌種制作技術(shù)二、常用設(shè)備（一）拌料和裝料設(shè)備（二）滅菌設(shè)備（三）接種設(shè)備（四）培養(yǎng)設(shè)備第二章食用菌三級(jí)菌種制作技術(shù)（一）拌料和裝料設(shè)備拌料設(shè)備：可人工拌料，也可用拌料機(jī)，有桶式和開放式兩種。裝料設(shè)備：人工裝料或用裝瓶裝袋兩用機(jī)。關(guān)鍵是料的松緊度，可3-5人合作，約1000袋/h。第二章食用菌三級(jí)菌種制作技術(shù)第二章食用菌三級(jí)菌種制作技術(shù)（二）滅菌設(shè)備根據(jù)滅菌壓力：高壓滅菌設(shè)備和常壓滅菌設(shè)備。高壓滅菌特點(diǎn)：溫度高，滅菌速度快，滅菌徹底，但每次滅菌量小，投資較大。高壓滅菌設(shè)備：①手提式高壓滅菌鍋。②立式高壓滅菌鍋。③臥式高壓滅菌鍋。第二章食用菌三級(jí)菌種制作技術(shù)第二章食用菌三級(jí)菌種制作技術(shù)第二章食用菌三級(jí)菌種制作技術(shù)常壓滅菌特點(diǎn)：容量大(0.5-1噸料/次)，投資小，但時(shí)間長(zhǎng)，滅菌效果較差。常壓滅菌設(shè)備：常壓滅菌灶、滅菌室或滅菌包（可利用節(jié)能型多功能蒸汽爐或普通鍋爐）。第二章食用菌三級(jí)菌種制作技術(shù)第二章食用菌三級(jí)菌種制作技術(shù)第二章食用菌三級(jí)菌種制作技術(shù)第二章食用菌三級(jí)菌種制作技術(shù)（三）接種設(shè)備潔凈工作臺(tái)：適合接母種和少量原種。接種箱：成本低，容量較大，適合各級(jí)菌種。接種帳：適于接栽培袋，但效果稍差。接種室：與接種帳類似。電爐和蒸汽接種：簡(jiǎn)易，成功率80%以上。第二章食用菌三級(jí)菌種制作技術(shù)第二章食用菌三級(jí)菌種制作技術(shù)第二章食用菌三級(jí)菌種制作技術(shù)第二章食用菌三級(jí)菌種制作技術(shù)第二章食用菌三級(jí)菌種制作技術(shù)（四）培養(yǎng)設(shè)備培養(yǎng)室：要清潔衛(wèi)生，有調(diào)溫設(shè)備?？捎糜谠N、栽培種培養(yǎng)，要做一些培養(yǎng)架，便于菌種檢查和提高空間利用率。電熱恒溫培養(yǎng)箱：溫度可調(diào)，容積小。第二章食用菌三級(jí)菌種制作技術(shù)第二章食用菌三級(jí)菌種制作技術(shù)第二章食用菌三級(jí)菌種制作技術(shù)三、制種用具１、酒精燈；２、托盤天平；３、地泵；４、水桶、盆、鋁鍋；５、鑷子；６、接種鉤和接種鏟；７、試管、菌種瓶和菌種袋；８、漏斗；９、電爐或煤爐；另外，還需溫度計(jì)、濕度計(jì)、量筒和量杯、磨口瓶、塑料繩、報(bào)紙以及pH試紙等。第二章食用菌三級(jí)菌種制作技術(shù)第二章食用菌三級(jí)菌種制作技術(shù)四、消毒藥品1.75%酒精2.40%甲醛＋高錳酸鉀3.汽霧消毒劑4.高錳酸鉀（0.1%-0.2%）5.5%石炭酸(苯酚)6.1%-2%來(lái)蘇兒7.2%-5%漂白粉8.硫磺各種藥品最好輪換使用，以防產(chǎn)生抗藥性。第二章食用菌三級(jí)菌種制作技術(shù)第二節(jié)三級(jí)菌種制作技術(shù)一、母種制作技術(shù)（一）母種培養(yǎng)基制備（二）組織分離法（三）母種的擴(kuò)大二、原種制作技術(shù)（一）原種培養(yǎng)基的制備（二）原種的制作三、栽培種制作技術(shù)（一）栽培種培養(yǎng)基制備（二）栽培種的制作四、菌種污染的原因及防止措施第二章食用菌三級(jí)菌種制作技術(shù)一、母種制作技術(shù)培養(yǎng)基的概念常用的母種培養(yǎng)基配方母種培養(yǎng)基的制作（一）母種培養(yǎng)基的制備第二章食用菌三級(jí)菌種制作技術(shù)1.培養(yǎng)基的概念培養(yǎng)基是按照食用菌生長(zhǎng)繁殖所需要的各種營(yíng)養(yǎng)，用人工方法配制而成的營(yíng)養(yǎng)基質(zhì)。第二章食用菌三級(jí)菌種制作技術(shù)2.母種培養(yǎng)基配方(g/1000ml)除配方1，其它均需加入KH2PO43克，MgSO41.5克，VB12片。

編號(hào)土豆棉籽皮木屑發(fā)酵料麩皮葡萄糖瓊脂蛋白胨120020202200202031001005020202-1041001005020205520020205-10第二章食用菌三級(jí)菌種制作技術(shù)3.母種培養(yǎng)基的制作PDA培養(yǎng)基的制作過(guò)程：煮土豆，取濾液。開鍋后，文火煮30min，適當(dāng)攪拌，使?fàn)I養(yǎng)充分溶出。補(bǔ)足水，加藥品溶化。瓊脂溶解較慢并易溢鍋，燒開后減小火力并攪拌1min左右。第二章食用菌三級(jí)菌種制作技術(shù)分裝試管。常用試管為18mm×180mm，每管約裝培養(yǎng)基8-10ml。加棉塞后3個(gè)一把綁好。高壓滅菌。在1.1-1.2kg/cm2壓力下滅菌30-40min。滅菌程序：放入物品，擰緊鍋蓋加熱，當(dāng)壓力達(dá)到0.5kg/cm2時(shí)，排出冷空氣，關(guān)閉放氣閥。壓力上去后記時(shí)，維持所需時(shí)間。第二章食用菌三級(jí)菌種制作技術(shù)第二章食用菌三級(jí)菌種制作技術(shù)擺斜面。滅完菌后，鍋體自然冷涼，壓力降到0.5kg/cm2以下時(shí)，緩慢放氣，氣排盡后取出試管，趁熱擺斜面，40℃以下即可凝固。第二章食用菌三級(jí)菌種制作技術(shù)母種培養(yǎng)基制作流程第二章食用菌三級(jí)菌種制作技術(shù)（二）菌種組織分離法組織分離的概念、種類和特點(diǎn)組織分離的方法第二章食用菌三級(jí)菌種制作技術(shù)1.組織分離的概念、種類和特點(diǎn)概念：是指在雙核菌絲的組織上切取一塊組織，使其在培養(yǎng)基上萌發(fā)而獲得純雙核菌絲體的方法。稱作原始母種。種類：據(jù)切取組織的來(lái)源，分為子實(shí)體組織分離、菌核、菌索組織分離和基內(nèi)菌絲組織分離。特點(diǎn)：簡(jiǎn)單易行；為無(wú)性繁殖。第二章食用菌三級(jí)菌種制作技術(shù)2.平菇子實(shí)體組織分離方法培養(yǎng)基制備。種菇選擇：是指用來(lái)進(jìn)行組織分離的子實(shí)體。要選擇適宜出菇期出菇早、出菇整齊、形態(tài)正常、無(wú)病蟲害、產(chǎn)量高的栽培袋，從上選擇肥大、肉厚、6成熟的幼嫩子實(shí)體，切去多余菌柄。接種場(chǎng)地消毒。第二章食用菌三級(jí)菌種制作技術(shù)種菇處理：表面消毒。接種過(guò)程：雙手表面消毒，把種菇帶入接種箱，點(diǎn)燃酒精燈，種菇表面消毒后從中間縱向撕開，用無(wú)菌小鑷子夾取菌柄、菌蓋交界處的菌肉，迅速放入培養(yǎng)基上，塞上棉塞。特殊種類：靈芝、金針菇、雞腿菇等。第二章食用菌三級(jí)菌種制作技術(shù)培養(yǎng)。適宜條件下，2-3天組織塊上即萌發(fā)出菌絲，8-10天可長(zhǎng)滿。期間要檢查，從中選留無(wú)污染、菌絲潔白濃密、長(zhǎng)速正常的菌種?；鶅?nèi)菌絲組織分離以及菌核和菌索的組織分離過(guò)程類似，只是所取部位不同。原始母種還可轉(zhuǎn)接擴(kuò)繁3-4次，以增加母種量。長(zhǎng)滿后暫時(shí)不用的母種要置于2-5℃下冷藏。第二章食用菌三級(jí)菌種制作技術(shù)第二章食用菌三級(jí)菌種制作技術(shù)第二章食用菌三級(jí)菌種制作技術(shù)（三）母種的擴(kuò)大培養(yǎng)基的制備（同前）接種場(chǎng)地的消毒滅菌（同前）母種的擴(kuò)大培養(yǎng)第二章食用菌三級(jí)菌種制作技術(shù)3.母種的擴(kuò)大要嚴(yán)格無(wú)菌操作。母種試管表面消毒，然后靠近燈焰用接種鉤將母種橫切成若干份，再用接種鏟將橫切的母種分成2-3份，取一份帶1～2mm厚的培養(yǎng)基放入新的培養(yǎng)基斜面上。第二章食用菌三級(jí)菌種制作技術(shù)4.培養(yǎng)在適宜條件下培養(yǎng)。2-3天后，檢查菌絲的生長(zhǎng)及雜菌污染情況，若在接種塊或培養(yǎng)基表面上出現(xiàn)獨(dú)立的小菌落或奶油狀小點(diǎn)，即為污染，應(yīng)立即淘汰。第二章食用菌三級(jí)菌種制作技術(shù)二、原種制作技術(shù)（一）原種培養(yǎng)基的制備（二）原種的制作第二章食用菌三級(jí)菌種制作技術(shù)（一）原種培養(yǎng)基的制備

1.常用原種培養(yǎng)基配方(%)麥粒預(yù)處理：冷水浸泡12小時(shí)后水煮，開鍋后文火20min左右，麥粒煮透，脹而不破，用水冷卻后瀝干表面水分，拌入石膏即可。編號(hào)麥粒棉子皮木屑麩皮玉米面蔗糖石膏1982265332377-8720-1012482105125414115126821512第二章食用菌三級(jí)菌種制作技術(shù)2.原種培養(yǎng)基制備選定配方。分別稱取各物質(zhì)。加水拌料。含水量約60%～65%，料水比約1:1.3～1.5。關(guān)鍵是拌勻，用量少的水溶性物質(zhì)要先溶于水，再拌入料中。第二章食用菌三級(jí)菌種制作技術(shù)裝瓶。常用容器為750ml罐頭瓶或菌種瓶，每瓶裝干料2.5～3兩。料要裝勻，松緊適度，裝至瓶肩下1cm處，料面壓平。打洞封口。擦凈瓶口，中央打直徑2cm的孔至瓶底。用兩層報(bào)紙和一層聚丙烯膜封口。打洞可增加料底透氣性。第二章食用菌三級(jí)菌種制作技術(shù)第二章食用菌三級(jí)菌種制作技術(shù)滅菌：高壓滅菌或常壓滅菌。常壓滅菌：視滅菌量，需8～10h以上。注意：一是培養(yǎng)料量要適中，物品排列合理，保證蒸汽流通。二是大火猛燒，防止壓力忽高忽低。三是滅菌后悶4～6h再出鍋。高壓滅菌：1.4～1.5kg/cm2壓力下滅1.5～2h，壓力不穩(wěn)或壓力低時(shí)要延時(shí)。高壓滅菌應(yīng)注意：第二章食用菌三級(jí)菌種制作技術(shù)滅菌鍋內(nèi)冷空氣必須排盡。否則會(huì)產(chǎn)生假蒸汽壓。培養(yǎng)基必須排放有序，蒸汽暢通。滅菌完畢應(yīng)緩慢減壓。自然降溫或緩慢排氣，防止液體突然沸騰弄臟瓶塞，或瓶、袋脹破。棉塞防濕。滅菌時(shí)棉塞不能接觸鍋壁，并蓋報(bào)紙或防水紙，防止冷凝水打濕棉塞。第二章食用菌三級(jí)菌種制作技術(shù)第二章食用菌三級(jí)菌種制作技術(shù)（二）原種的制作場(chǎng)地消毒：將料瓶和用具放入接種箱熏0.5～2h。接種：母種表面消毒后帶入接種箱，點(diǎn)燃酒精燈，再次對(duì)試管外壁消毒。在燈焰范圍內(nèi)，用接種鉤將母種分成4～6份，取一份放入料面中部，封口。兩人合作既好又快。培養(yǎng)：在適宜條件下培養(yǎng)。定期檢查。菌絲長(zhǎng)滿后，再繼續(xù)培養(yǎng)3～5天。第二章食用菌三級(jí)菌種制作技術(shù)第二章食用菌三級(jí)菌種制作技術(shù)三、栽培種制作技術(shù)（一）栽培種培養(yǎng)基的制備培養(yǎng)基配方：與原種培養(yǎng)基可以相同。菌種袋規(guī)格：選用聚丙烯或高密度聚乙烯塑料袋。①17×32cm，一端開口，每袋裝干料6兩。②17×40cm，兩端開口，每袋裝干料1斤。第二章食用菌三級(jí)菌種制作技術(shù)拌料裝袋，注意：料松緊度適宜；袋壁光滑。料面要平，中間打孔，以利通氣。繩要綁緊，盡量排除袋內(nèi)空氣，防止?jié)q袋。滅菌：與原種相同。第二章食用菌三級(jí)菌種制作技術(shù)（二）栽培種的制作場(chǎng)地消毒：同前。接種方法：雙手表面消毒后進(jìn)入接種箱；原種表面消毒，放于三角架或空瓶上，瓶口表面消毒、火焰滅菌；用鑷子把菌種扒成1-2cm小塊，均勻接于料面，綁口。第二章食用菌三級(jí)菌種制作技術(shù)第二章食用菌三級(jí)菌種制作技術(shù)接種時(shí)注意：接種過(guò)程應(yīng)在酒精燈旁進(jìn)行。每瓶原種接栽培種10～15袋(兩頭接種)或50瓶左右。接種用具使用前表面消毒，火焰滅菌。接完種后，據(jù)接種量確定封口松緊度。培養(yǎng)：同原種。第二章食用菌三級(jí)菌種制作技術(shù)三級(jí)菌種生產(chǎn)的工藝流程第二章食用菌三級(jí)菌種制作技術(shù)四、菌種污染原因及防止措施（一）常見雜菌種類：細(xì)菌、酵母菌、放線菌和霉菌。第二章食用菌三級(jí)菌種制作技術(shù)第二章食用菌三級(jí)菌種制作技術(shù)（二）污染原因及防止措施培養(yǎng)基滅菌不徹底。表現(xiàn)為瓶壁和袋壁上出現(xiàn)雜菌菌落。原因：滅菌壓力或時(shí)間不足，或者高壓滅菌時(shí)鍋內(nèi)空氣沒(méi)有排盡。措施：鍋內(nèi)空氣排盡；保證滅菌壓力和時(shí)間。第二章食用菌三級(jí)菌種制作技術(shù)菌種帶雜菌。表現(xiàn)為菌種塊周圍首先污染。措施：選用純正菌種。接種操作中污染。污染點(diǎn)常分散在培養(yǎng)基表面。原因：接種時(shí)無(wú)菌操作不嚴(yán)格。措施：接種場(chǎng)所及工具消毒、滅菌要徹底，接種操作在燈焰形成的無(wú)菌區(qū)進(jìn)行，并要敏捷迅速。第二章食用菌三級(jí)菌種制作技術(shù)培養(yǎng)室環(huán)境污染。培養(yǎng)室環(huán)境不衛(wèi)生，或通風(fēng)不良、潮濕等導(dǎo)致棉塞等封口材料受潮而污染。措施：選擇清潔、高燥的場(chǎng)地作菌種培養(yǎng)室。破口污染。滅菌操作或運(yùn)輸中不小