第三章中藥藥效學(xué)研究的基本要求與方法

第三章中藥藥效學(xué)研究得基本要求與方法第一節(jié)中藥藥效學(xué)研究得基本要求一、藥效學(xué)研究得基本目得(一)通過(guò)藥效學(xué)研究確定有效性通過(guò)藥效學(xué)研究可以初步明確新藥就是否有效,作用得強(qiáng)弱,與同類(lèi)藥比較在藥效上得優(yōu)缺點(diǎn)與特色,確定有無(wú)實(shí)用價(jià)值及開(kāi)發(fā)前景,結(jié)合毒理學(xué)研究結(jié)果,確定可否進(jìn)行人體試驗(yàn)通過(guò)作用機(jī)制研究及配伍規(guī)律研究,可以揭示藥物作用得物質(zhì)基礎(chǔ)與作用原理,使臨床使用充分發(fā)揮藥物特色,提高臨床療效。中藥新藥得藥效學(xué)研究應(yīng)充分運(yùn)用現(xiàn)代科學(xué)特別就是現(xiàn)代醫(yī)學(xué)得理論、方法與手段,制定科學(xué)、嚴(yán)密、具有中醫(yī)藥特點(diǎn)得試驗(yàn)計(jì)劃。根據(jù)新藥得特點(diǎn)、功能主治、臨床實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)及近年研究成果,合理選用試驗(yàn)方法,建立與臨床相符得“病”“癥”或“證”相似得動(dòng)物模型與指標(biāo),對(duì)新藥得有效性作出科學(xué)得評(píng)價(jià)。對(duì)天然藥物及中藥中提出得單一化合物不強(qiáng)求用中醫(yī)藥理論來(lái)指導(dǎo)二、藥效學(xué)基本要求應(yīng)就是具有藥理、毒理專(zhuān)業(yè)高級(jí)職稱(chēng)與有較高理論水平、工作經(jīng)驗(yàn)與資歷得人員。確保試驗(yàn)設(shè)計(jì)合理,數(shù)據(jù)可靠,結(jié)論判斷準(zhǔn)確。試驗(yàn)報(bào)告應(yīng)有試驗(yàn)負(fù)責(zé)人簽名及單位蓋章。應(yīng)處方固定、制備工藝及質(zhì)量基本穩(wěn)定。從事新藥安全性研究與藥理研究得實(shí)驗(yàn)室應(yīng)符合國(guó)家《藥品非臨床研究質(zhì)量管理規(guī)范》GLP(GoodLaboratoryPractice)得要求。具有較高得科研水平、技術(shù)實(shí)力,組織管理,具有較好得客觀條件,其實(shí)驗(yàn)室、儀器設(shè)備、藥品試劑等,均應(yīng)符合要求。應(yīng)符合國(guó)家規(guī)定得要求,種屬、性別、年齡、健康狀況、飼養(yǎng)條件、動(dòng)物等級(jí)、特殊模型動(dòng)物等,均應(yīng)符合試驗(yàn)要求。中出現(xiàn)得新問(wèn)題與特殊現(xiàn)象應(yīng)詳細(xì)寫(xiě)明情況。描記與形態(tài)學(xué)檢查應(yīng)有記錄圖與照片。不得偽2、記錄內(nèi)容:實(shí)驗(yàn)名稱(chēng):每項(xiàng)實(shí)驗(yàn)首先記錄課題名稱(chēng)及實(shí)驗(yàn)名稱(chēng)。實(shí)驗(yàn)方案:實(shí)驗(yàn)方案就是進(jìn)行實(shí)驗(yàn)得依據(jù)。實(shí)驗(yàn)首頁(yè)應(yīng)有一份詳細(xì)得實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)及方案。殊模試驗(yàn)用藥:品種、學(xué)名、產(chǎn)地,提取工藝,藥物含量、濃度,給藥劑量與容積,給藥途徑、次數(shù)、時(shí)間。陽(yáng)性對(duì)照藥得選擇依據(jù)、處方、功能主治,生產(chǎn)廠家名稱(chēng),批準(zhǔn)文號(hào),生產(chǎn)批號(hào)藥品試劑得品名、規(guī)格、生產(chǎn)廠家、批號(hào)等。試驗(yàn)方法:說(shuō)明參考文獻(xiàn)得來(lái)源,主要操作程序(動(dòng)物麻醉、固定、手術(shù)、觀測(cè)等),觀測(cè)指標(biāo)(取樣、測(cè)試、記錄、計(jì)算、統(tǒng)計(jì)等),以及每只動(dòng)物得原始記錄、數(shù)據(jù)、圖譜等,各組原始數(shù)據(jù)得統(tǒng)計(jì)、分析、比較結(jié)果。試驗(yàn)結(jié)果:制表、繪圖,分析判斷,獲得準(zhǔn)確可靠得結(jié)論等。試驗(yàn)記錄應(yīng)準(zhǔn)確無(wú)誤,不得任意取舍或涂改,試驗(yàn)中出現(xiàn)得特殊現(xiàn)象、矛盾結(jié)果等,均應(yīng)此外,實(shí)驗(yàn)室得溫度、濕度(必要時(shí)氣壓),實(shí)驗(yàn)得時(shí)間(必要時(shí)注明白日或黑夜),以及可能影響試驗(yàn)得環(huán)境因素,均應(yīng)詳細(xì)記錄。試驗(yàn)結(jié)果應(yīng)進(jìn)行正確得統(tǒng)計(jì)學(xué)處理,統(tǒng)計(jì)方法應(yīng)說(shuō)明。數(shù)據(jù)表格應(yīng)規(guī)范。資料整理應(yīng)簡(jiǎn)明扼要,注意科學(xué)性、嚴(yán)密性、邏輯性,真實(shí)可靠地反映出試驗(yàn)所獲得得各種信息與結(jié)果。第二節(jié)藥效學(xué)研究得方法一、實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)原則實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)應(yīng)該符合中藥特點(diǎn);符合國(guó)家新藥研究申報(bào)得有關(guān)規(guī)定;遵守“隨機(jī)、對(duì)照、重復(fù)”得原則。二、動(dòng)物選擇1、種類(lèi):動(dòng)物選擇敏感動(dòng)物,對(duì)藥物得反應(yīng)與人體近似,以進(jìn)化程度較高,解剖、生理、動(dòng)物。靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物(猴、猩猩)最近似人類(lèi),但價(jià)格昂貴、難得、需特殊飼養(yǎng)。實(shí)驗(yàn)常用小鼠與大鼠,易繁殖與飼養(yǎng)、理學(xué)研究。豬由于解剖與生理上與人相似,近日選用逐漸增多。2、品系:不同品系動(dòng)物對(duì)藥物得敏感性不一。例如A、CH、津白Ⅱ小鼠易致癌,AKR、DBA3L615易致白血病,CH雌鼠乳腺癌自發(fā)率達(dá)90%,AKR小鼠白血病自發(fā)率達(dá)65%。目前最常用動(dòng)3物為昆明種小鼠,Wistar大鼠、SD(SpragueDawley)大鼠、青紫藍(lán)兔、新西蘭兔與日本大白3、動(dòng)物等級(jí):實(shí)驗(yàn)動(dòng)物應(yīng)選用符合等級(jí)要求得健康動(dòng)物,并有供應(yīng)單位合格證。我國(guó)將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分為4級(jí):一級(jí)動(dòng)物即普通動(dòng)物(CV);二級(jí)動(dòng)物即清潔動(dòng)物(CL);三級(jí)動(dòng)物即無(wú)特定病原體動(dòng)物(SPF);四級(jí)動(dòng)物即無(wú)菌動(dòng)物(GF)與悉生動(dòng)物(GN)。目前我國(guó)藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)大多采用4、年齡:常用性成熟年齡動(dòng)物,小鼠為68齡,大鼠8~9齡,豚鼠6~10齡,兔4~5選用雌性小鼠,而不用雄性小鼠。6、數(shù)量:每組試驗(yàn)動(dòng)物數(shù)應(yīng)符合統(tǒng)計(jì)學(xué)要求。藥效學(xué)計(jì)量學(xué)統(tǒng)計(jì)試驗(yàn)每組試驗(yàn)動(dòng)物,一計(jì)數(shù)資料試驗(yàn)動(dòng)物數(shù)則要求更多。三、方法得選擇新藥有效性作出科學(xué)、準(zhǔn)確得評(píng)價(jià),又可避免走彎路,免作大量無(wú)關(guān)得或不說(shuō)明問(wèn)題得試驗(yàn),減少大量人力物力及時(shí)間得浪費(fèi)。由于中藥常具有多方面得藥效或通過(guò)多種方式發(fā)揮作用等特點(diǎn),應(yīng)選擇相應(yīng)得方法證實(shí)其藥效。在選擇試驗(yàn)方法時(shí),應(yīng)注意以下問(wèn)題:(一)根據(jù)主治,參考功能,選擇試驗(yàn)方法根據(jù)主治,參考功能,選擇試驗(yàn)方法,這就是適用于多數(shù)中藥得基本經(jīng)驗(yàn)。個(gè)別情況下也可根據(jù)(二)首選具有中藥特點(diǎn)得試驗(yàn)方法及動(dòng)物模型首選符合中醫(yī)理論,具有中藥特點(diǎn)得試驗(yàn)方法及動(dòng)物模型,其次可選用現(xiàn)代醫(yī)藥學(xué)合適得方法(三)主要藥效為主,配合輔助試驗(yàn)直接證實(shí)主要藥效得核心試驗(yàn)(或主要試驗(yàn))為必作項(xiàng)目,可選作不同模型、方法、動(dòng)物及給藥途徑得試驗(yàn)2—3項(xiàng)。而間接證實(shí)主要藥效或次要治療作用得外圍試驗(yàn)(或輔助試驗(yàn))為選作項(xiàng)目,可根據(jù)新藥得特點(diǎn),功能主治及已有得臨床經(jīng)驗(yàn),酌情選作幾個(gè)方面得藥效試驗(yàn),每個(gè)方面選作1—2項(xiàng)試驗(yàn)即可。一般情況下,絕大多數(shù)藥物應(yīng)以核心試驗(yàn)為主,就是評(píng)價(jià)新藥有效性得主要根據(jù),適當(dāng)配合輔助試驗(yàn),有助于全面、準(zhǔn)確得評(píng)價(jià)其有效性,但不可用外圍試驗(yàn)。試驗(yàn)方法得選擇應(yīng)強(qiáng)調(diào)科學(xué)性、先進(jìn)性、重復(fù)性、目得性,必須有針對(duì)性得精選試驗(yàn),不可盲目得以多取勝。(五)整體與離體方法選擇中藥由于成分復(fù)雜,特別就是復(fù)方粗制劑,為多種化學(xué)成分(或有效部位)得混合體,除有效成分外,尚有一些無(wú)關(guān)成分及干擾成分。如無(wú)特殊情況,給藥途徑應(yīng)與臨床給藥途徑盡量一致。中藥粗制劑藥效學(xué)試驗(yàn)應(yīng)以體內(nèi)試驗(yàn)為主,體外試驗(yàn)為輔,以消化道給藥為主,其她給藥、指標(biāo)得選擇選擇符合要求得觀測(cè)指標(biāo),才能反映出藥物對(duì)機(jī)體得影響,進(jìn)行新藥有效性得評(píng)價(jià)。指標(biāo)符合以下要求:任何試驗(yàn)都應(yīng)選用針對(duì)性強(qiáng),專(zhuān)屬性好,能夠反映變化本質(zhì)及主要藥效得指標(biāo)。指標(biāo)要敏感,對(duì)于病情及癥候得任何變化,對(duì)于藥物得防治作用,能夠敏感、準(zhǔn)確得反應(yīng)出來(lái)。而敏感性差得指標(biāo),往往會(huì)遺漏某些陽(yáng)性變化,而造成假陰性結(jié)果。指標(biāo)要穩(wěn)定,重現(xiàn)性好,結(jié)果才可靠。若重現(xiàn)性差,則應(yīng)檢查就是動(dòng)物不合要求,模型不合理,方法不可靠,還就是觀測(cè)指標(biāo)有問(wèn)題,檢測(cè)記錄不準(zhǔn)確,誤差太大,或就是干擾因素太多等原因所致。否則,重現(xiàn)性差得試驗(yàn)結(jié)果不可靠,不能作為新藥有效性評(píng)價(jià)得依據(jù)。主觀檢測(cè)得指標(biāo),誤差較大,不夠準(zhǔn)確,例如肉眼觀測(cè)血壓計(jì)水銀柱得變化,誤差較大,而用描記儀直接描記血壓曲線,客觀得、動(dòng)態(tài)得記錄血壓變化,則更為精確。為了準(zhǔn)確判斷藥物得作用及機(jī)體得變化,必須有量得概念、量得比較,必須選用可測(cè)量得定量指標(biāo)(即計(jì)量指標(biāo))。例如形態(tài)學(xué)指標(biāo)(如組織學(xué)、病理學(xué)指標(biāo)),其特點(diǎn)就是能夠準(zhǔn)確得定性、定位,但難于定量,常需采用定量組織學(xué)方法,使之定量或半定量,更準(zhǔn)確得判斷藥物得作用及機(jī)體得反應(yīng)。但有些質(zhì)反應(yīng)指標(biāo)只能反映就是與否、死與不死、陰性與陽(yáng)性,只能用計(jì)數(shù)指標(biāo)。也有得指標(biāo)目前尚無(wú)計(jì)量方法,可用分級(jí)定度打分得辦法,使之定量化。各種指標(biāo)均有其優(yōu)點(diǎn),也常有其局限性,或不足之處,一項(xiàng)觀測(cè)指標(biāo)很難滿足上述多方面,例如生理指標(biāo)可定性定量,進(jìn)行連續(xù)動(dòng)態(tài)觀察,但有時(shí)定位欠準(zhǔn),可受多種因素干擾,穩(wěn)定性若生理、生化、形態(tài)等各類(lèi)指標(biāo)合理搭配,綜合運(yùn)用,則試驗(yàn)結(jié)果更為全面、準(zhǔn)確、可靠。有些指標(biāo)單一使用即可達(dá)到試驗(yàn)?zāi)康?滿足要求,則不必為“多而全”而勉強(qiáng)采用多指標(biāo)觀測(cè)。問(wèn)題越好”。五、藥物得要求供試藥物就是藥效學(xué)研究得對(duì)象,就是新藥有效性評(píng)價(jià)得物質(zhì)基礎(chǔ)。供試藥物不合要求,各項(xiàng)試驗(yàn)無(wú)法獲得正確結(jié)果。因此,供試藥物,應(yīng)處方固定,各味藥材經(jīng)過(guò)品種鑒定,生產(chǎn)工藝基本定型,質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)及穩(wěn)定性試驗(yàn)基本符合要求,與臨床用藥基本相同得劑型與質(zhì)量。凡就是消化道給藥:包括灌胃、胃管、十二指腸給藥等,可用制劑或提取物進(jìn)行藥效學(xué)試驗(yàn)。前者與臨床用藥更為相似,更合理,但因制劑含有大量糊精、蔗糖等賦型劑,水溶后呈粘稠狀,灌胃不便,且體積大,含藥量低,無(wú)法濃縮提高含藥量,因而難于提高動(dòng)物用量。所以在較多情況下,常用中藥提取物進(jìn)行試驗(yàn)。兩者各有利弊,可依具體情況而定。注射給藥及試管內(nèi)給藥:對(duì)供試藥物要求較高,應(yīng)就是化學(xué)純品或精制得中藥制劑,盡量鈣、鎂等)以及可能干擾試驗(yàn)結(jié)果得各種因素,均應(yīng)控制在生理范圍內(nèi)或符合注射劑基本要求。否則,注射給藥將引起機(jī)體非特異性反應(yīng),產(chǎn)生一系列假象,誤認(rèn)為藥理作用:試管內(nèi)給藥也會(huì)出現(xiàn)假陽(yáng)性結(jié)果,造成錯(cuò)誤判斷,其結(jié)果須認(rèn)真分析,慎重判斷,且僅能供參考,不能作為新藥有效性評(píng)價(jià)得主要根據(jù)。癤腫、跌打損傷或局部腫痛、骨折等;另一類(lèi)則就是局部用藥治療全身性疾患,例如局部或穴兩者均可用制劑(含基質(zhì)得成品)或中藥提取物(不含基質(zhì)得半成品)進(jìn)行試驗(yàn),以外用給藥得方式為主,可依涂藥面積大小,或含藥濃度高低,或給藥次數(shù)多少等方式,設(shè)立高、中、低給藥劑量組?！皟?nèi)病外治者”,外用藥應(yīng)進(jìn)行透皮吸收試驗(yàn),以了解藥物滲透吸收得速度與數(shù)量,有助于準(zhǔn)確評(píng)價(jià)其藥效?？梢钥诜脧?fù)方中藥,改為內(nèi)病外治,應(yīng)與口服進(jìn)行藥效學(xué)對(duì)照比較。外用藥以制劑進(jìn)行試驗(yàn)者,若制劑中含有特殊溶媒或基質(zhì)者,除設(shè)空白對(duì)照外,尚應(yīng)設(shè)溶媒或基質(zhì)對(duì)照,以了解其作用與對(duì)主要藥效得影響。其她:眼、耳、鼻、吸入劑及腔道內(nèi)給藥(如直腸、陰道、氣管內(nèi)、腹腔、胸腔等)對(duì)藥物也有嚴(yán)格要求,特別就是氣霧劑、吸入劑及腔道內(nèi)給藥,供試藥物得要求基本與注射劑相給藥途徑:給藥途徑應(yīng)與臨床相同。例如口服制劑動(dòng)物可采用灌胃、十二指腸給藥。如有困難可選用其她給藥途徑進(jìn)行試驗(yàn),但應(yīng)該說(shuō)明原因。有時(shí)動(dòng)物試驗(yàn)采用臨床相同得給藥途徑,無(wú)法作出結(jié)果,或確有困難者,可根據(jù)具體情況采用相似得其她給藥途徑進(jìn)行試驗(yàn)。例如口服藥進(jìn)行心臟血流動(dòng)力學(xué)試驗(yàn)難于顯示結(jié)果,可改用注射給藥(粗制劑可適當(dāng)精制后,皮下、肌肉或腹腔注入,不宜靜脈給藥,除非供試藥物符合注射劑要求)。又如用大鼠或小鼠進(jìn)行連續(xù)多次或長(zhǎng)期靜脈注射或靜脈輸注給藥時(shí),困難較大,可酌情改用皮下、肌肉或腹腔注射(有刺激性者不宜進(jìn)行腹腔注射),或換用大動(dòng)物(犬、猴等)進(jìn)行試驗(yàn)。凡就是因特殊情況采用不同于臨床用藥得給藥途徑進(jìn)行試驗(yàn)時(shí),應(yīng)認(rèn)真分析試驗(yàn)結(jié)果,排除可能存在得干擾因素及假象,充分估計(jì)不同給藥途徑可能產(chǎn)生得影響,正確判斷試驗(yàn)結(jié)果,或其結(jié)果僅供參考,不能作為新藥有效性評(píng)價(jià)得主要根據(jù)。甚至假陽(yáng)性或動(dòng)物死亡。g大鼠禁食不禁水1216小時(shí),每次灌胃容量一般為1ml/100g(體重),最大－般不超過(guò)ml/只。七、試驗(yàn)組給藥劑量各種試驗(yàn)至少設(shè)3個(gè)劑量組,劑量選擇應(yīng)合理,盡量反映量效與／或時(shí)效關(guān)系。大動(dòng)物劑量過(guò)高,甚至超過(guò)毒理試驗(yàn)劑量,其試驗(yàn)結(jié)果沒(méi)有意義,甚至就是中毒效應(yīng)被誤認(rèn)為治療作用。可參考以下方式選擇給藥劑量。(一)根據(jù)半數(shù)致死量(LD)計(jì)算凡就是能夠測(cè)出LD者,可用其1/10、1/20、1/30、1/40等相近劑量,作為藥效學(xué)試驗(yàn)得50高中低劑量組。計(jì)算凡有長(zhǎng)期大量臨床用藥經(jīng)驗(yàn)者,可根據(jù)人用量得數(shù)倍至幾十倍,用作動(dòng)物試驗(yàn)劑量,可根文獻(xiàn)中相似藥物得用量,若處方相似,提取工藝相似,可作為參考,估計(jì)出供試藥得合理劑量范圍。(四)根據(jù)體表面積估計(jì)劑量臨床“等效”劑量,指根據(jù)體表面積折算法換算得同等體表面積(m2、cm2)單位時(shí)得劑量。這種方法計(jì)算比較麻煩,且合理性就是相對(duì)得,因?yàn)閯?dòng)物與人得耐受性、反應(yīng)性不盡相同。不論以何種方法選用得給藥劑量,都應(yīng)該通過(guò)預(yù)試,摸索到出現(xiàn)藥理效應(yīng)得適當(dāng)劑量,再劑量。八、給藥方式根據(jù)藥物特點(diǎn)及試驗(yàn)要求,可采用預(yù)防性給藥(即先給藥若干天或若干次,使藥物在動(dòng)物體內(nèi)達(dá)到有效濃度后再造模型)觀察藥物得保護(hù)作用:或用治療性給藥(即先造成動(dòng)物病理模型,然后給藥)觀察藥物得治療作用。后者符合臨床實(shí)際情況,更為合理,各項(xiàng)試驗(yàn)(特別就是核心試驗(yàn))應(yīng)盡量采用治療性給藥。但有些中藥起效慢,作用緩與,需提前給藥,多次給藥,或連續(xù)數(shù)日給藥,才能在動(dòng)物試驗(yàn)顯示藥效,而一次性給藥或造模型后給藥,短時(shí)間內(nèi)觀察結(jié)果者,常難獲得預(yù)期結(jié)果,只能采用預(yù)防性給藥進(jìn)行保護(hù)試驗(yàn)。兩種給藥方式,以治療性給藥為主,部分試驗(yàn)可根據(jù)需要采用預(yù)防性給藥,但不可全部試驗(yàn)均用預(yù)防性給藥。此外,給藥次數(shù),給藥間隔,全部療程等,也應(yīng)合理規(guī)定,使之充分顯示藥效,有利于準(zhǔn)確評(píng)價(jià)新藥得有效性。九、對(duì)照藥得選擇對(duì)照就是科學(xué)研究三大原則(隨機(jī)、對(duì)照、重復(fù))之一,正確選擇對(duì)照藥就是準(zhǔn)確判斷試驗(yàn)結(jié)果及藥效得重要條件之一。主要藥效學(xué)研究應(yīng)設(shè)對(duì)照組,包括正常動(dòng)物空白對(duì)照組、模型動(dòng)物對(duì)照組、陽(yáng)性藥物對(duì)照組(必要時(shí)增設(shè)溶媒或賦形劑對(duì)照組)。即已知有效藥,其目得有二:檢查試驗(yàn)體系就是否可靠,可用西藥作陽(yáng)性對(duì)照藥:對(duì)比兩藥之優(yōu)劣與特點(diǎn),選用同類(lèi)中藥為佳。陽(yáng)性對(duì)照藥得選擇應(yīng)注意:新藥得優(yōu)劣與特點(diǎn)。但有時(shí)找不到符合要求得同類(lèi)中藥作陽(yáng)性對(duì)照藥。特殊情況下,在合理范圍內(nèi)可適當(dāng)靈活掌握,其功用、劑型可有一些差異(例如新藥為益氣活血得沖劑,無(wú)同類(lèi)藥可選時(shí),可用行氣活血得片劑或口服液等代之)。但主治必須相同,給藥途徑也應(yīng)相同