級細(xì)胞生物學(xué)技術(shù)

1細(xì)胞培養(yǎng)的概念？習(xí)慣上泛指所有的體外培養(yǎng)，即器官培養(yǎng)，組織培養(yǎng)，和細(xì)胞培養(yǎng)的總稱。在無菌條件下,從動物(植物也可)或在人體中取出組織或細(xì)胞,置于模擬體內(nèi)的生理環(huán)境中(無菌,適當(dāng)?shù)臏囟群鸵欢ǖ臓I養(yǎng)條件)使之生存和增殖生長的技術(shù)方法。用于研究細(xì)胞、組織的代謝、增殖、分化、形態(tài)和功能變化，各種理化因子對活細(xì)胞的影響。2體外細(xì)胞的分化特點？細(xì)胞分化：在個體發(fā)育過程中，子代細(xì)胞產(chǎn)生形態(tài)、結(jié)構(gòu)和功能差異的過程。（細(xì)胞的形態(tài)結(jié)構(gòu)、生化特征、生理功能為細(xì)胞分化的三項指標(biāo)），由于體外培養(yǎng)細(xì)胞失去了神經(jīng)、激素等體液的調(diào)節(jié)和細(xì)胞間相互影響，經(jīng)多次傳代增殖，久之則發(fā)生如下變化:分化現(xiàn)象逐漸減弱或不顯，形態(tài)與功能趨于單一化，或傳一定代數(shù)后衰老死亡；發(fā)生轉(zhuǎn)化，獲不死性而成為能無限傳代的連續(xù)細(xì)胞系或惡性細(xì)胞系。3體外培養(yǎng)細(xì)胞的分型？并說明各自的形態(tài)特點?分型:1貼壁型細(xì)胞(上皮細(xì)胞型,成纖維細(xì)胞型,游走細(xì)胞型)2懸浮型細(xì)胞.形態(tài)特點1.上皮樣細(xì)胞型:僅形態(tài)上似體內(nèi)上皮細(xì)胞，實際上不完全等于體內(nèi)同名的細(xì)胞。來源：來源于外胚層，內(nèi)胚層細(xì)胞如：皮膚及其衍生物；消化道，乳腺，肺泡；上皮性腫瘤形態(tài)：類似體內(nèi)的上皮細(xì)胞。扁平，不規(guī)則多角形，中有圓形核。生長特點：易相連成片，相靠—緊密相連—成薄層—鋪路石狀。生長時呈膜狀移動，很少脫離細(xì)胞群而單個活動。2.成纖維樣細(xì)胞型名稱：凡在培養(yǎng)中形態(tài)與成纖維細(xì)胞類似的細(xì)胞來源：由中胚層間質(zhì)組織起源的組織如：真正的成纖維細(xì)胞；心肌，平滑肌，成骨細(xì)胞形態(tài)：似體內(nèi)成纖維細(xì)胞的形態(tài)胞體梭形或不規(guī)則三角形胞質(zhì)向外伸出2—3個長短不等的突起中有卵圓形核.生長特點：排列成放射狀，漩渦狀并不緊靠連成片，細(xì)胞—細(xì)胞接觸易斷開而單獨行動,游離的單獨的成纖維樣細(xì)胞，常有幾個伸長的細(xì)胞突起.3.游走型細(xì)胞(不定型)：本型細(xì)胞在支持物上散在生長，一般不連成片。細(xì)胞質(zhì)經(jīng)常伸出偽足或突起，呈活躍的游走或變形運動，速度快且不規(guī)則.常見于羊水細(xì)胞培養(yǎng)的早期.4．懸浮生長型細(xì)胞概念：培養(yǎng)時不貼附于底物而呈懸浮狀態(tài)生長或以機(jī)械方法使保持懸浮狀態(tài)下生長.來源:來自血，脾或骨髓，尤以血中白細(xì)胞多見，癌腫細(xì)胞也可能。特點：在懸浮液中生長良好、細(xì)胞圓形，單個或小細(xì)胞團(tuán)。優(yōu)點：生存空間大，提供數(shù)量大，傳代方便(不需消化)易于收獲可獲得穩(wěn)定狀態(tài).缺點：觀察不方便很多細(xì)胞不能懸浮生長(尤以正常細(xì)胞)4那些培養(yǎng)條件改變時，細(xì)胞形態(tài)可有變化？（見表一）組織和細(xì)胞供體年齡。培養(yǎng)條件。細(xì)胞的粘附。培養(yǎng)技術(shù)方法。促生長因子。組織和細(xì)胞供體年齡：幼年個體比老年者易于培養(yǎng)，所有動物的胚胎組織都是最好的培養(yǎng)對象。來自同一個體的組織，分化低的比分化高的容易培養(yǎng)。培養(yǎng)條件：不同的細(xì)胞對培養(yǎng)基需求不同，當(dāng)前尚無一種培養(yǎng)基是萬能的，應(yīng)選擇相應(yīng)的培養(yǎng)基。應(yīng)了解所培養(yǎng)細(xì)胞的生物學(xué)形狀和特殊需求成分。血清，Hela：高血清成纖維細(xì)胞樣低血清上皮樣細(xì)胞。pH，Hela：太酸或太堿，成纖維細(xì)胞樣；標(biāo)準(zhǔn)pH，上皮樣細(xì)胞。細(xì)胞密度3T3：低密度，成纖維細(xì)胞樣，高密度，上皮樣細(xì)胞。生長狀態(tài)改變：懸浮或貼附：懸浮時圓形，貼附成纖維或上皮樣。轉(zhuǎn)化與否：未轉(zhuǎn)化，成纖維樣，轉(zhuǎn)化后，可成上皮樣。5簡述每代貼附生長細(xì)胞的生長過程分哪幾期？游離期：細(xì)胞接種后在培養(yǎng)液中呈懸浮狀態(tài)．也稱懸浮期此時細(xì)胞質(zhì)回縮，胞體呈圓球形。貼壁期：細(xì)胞附著于底物上，游離期結(jié)束。細(xì)胞株平均在10分鐘～4小時貼壁。潛伏期此時細(xì)胞有生長話動，而無細(xì)胞分裂。細(xì)胞株潛伏期一般為6～24小時。對數(shù)生長期：細(xì)胞數(shù)隨時間變化成倍增長，活力最佳，最適合進(jìn)行實驗研究。停止期（平臺期）：細(xì)胞長滿瓶壁后，細(xì)胞雖有活力但不再分裂。機(jī)制：接觸抑制、密度依賴性。（接觸抑制：當(dāng)一個貼壁生長的體外正常細(xì)胞生長至與另一個細(xì)胞的表面相互接觸時，便停止了分裂增殖，相互雖然緊密接觸，但不形成交叉重疊生長，也不進(jìn)入S期。密度抑制（densityinhibition）：細(xì)胞數(shù)量到一定數(shù)量后引起抑制增殖的現(xiàn)象。6影響貼壁的因素和促進(jìn)細(xì)胞粘附措施有哪些？1因素：（1）各種細(xì)胞強(qiáng)弱：(附著最強(qiáng))巨噬細(xì)胞、成纖維細(xì)胞；上皮細(xì)胞、血細(xì)胞(最弱)。（2）生物因素：血清、培養(yǎng)液中的促附著因子。（3）機(jī)械，物理等因素（離心：促進(jìn)附著。流動：培養(yǎng)液流動可阻止細(xì)胞附著。低溫：可抑制附著）2措施：（1）包被：對分化程度高、生長能力差的細(xì)胞，可在培養(yǎng)瓶皿表面包被有利于細(xì)胞粘附和生長的生物活性物質(zhì).血清內(nèi)含有多種能夠促進(jìn)細(xì)胞粘附的成分，細(xì)胞本身也可能產(chǎn)生一些粘附分子。（2）減少接種時培養(yǎng)液的量：待細(xì)胞粘附和貼壁之后，再補(bǔ)充足夠的培養(yǎng)液。（3）減少培養(yǎng)液中血清的含量，使培養(yǎng)液黏度降低。（4）培養(yǎng)液中離子成分及其濃度。如，培養(yǎng)液中的Ca2+含量過低時不利于細(xì)胞的粘附、貼壁和鋪展。（5）培養(yǎng)液的溫度:低溫會減低細(xì)胞的活動，妨礙黏附和貼壁。7原代培養(yǎng)的概念：取自體內(nèi)新鮮組織并置于體外條件下生長的細(xì)胞在傳代之前稱為原代培養(yǎng)。原代培養(yǎng)與體內(nèi)原組織很相似，具異質(zhì)性，相互依存性強(qiáng)，細(xì)胞克隆形成率低。此期一般持續(xù)1～4周。8簡述體外培養(yǎng)細(xì)胞的分期？⑴原代培養(yǎng)期:取自體內(nèi)新鮮組織并置于體外條件下生長的細(xì)胞在傳代之前稱為原代培養(yǎng)原代培養(yǎng)與體內(nèi)原組織很相似，具異質(zhì)性，相互依存性強(qiáng)，細(xì)胞克隆形成率低。此期一般持續(xù)1～4周。⑵傳代期:細(xì)胞在培養(yǎng)器皿中生長一定時間后，被分開接種到新的培養(yǎng)器皿中（不論稀釋與否）。持續(xù)時間最長，其特點是細(xì)胞增殖旺盛，并能維持二倍體核型。⑶衰退期:此期細(xì)胞仍然生存，但增殖很慢或不增殖，細(xì)胞形態(tài)輪廓增強(qiáng)，最后衰退凋亡。9舉例說明細(xì)胞生長曲線的制作方法？⑴計算細(xì)胞濃度2次，得出細(xì)胞濃度平均值。然后，將細(xì)胞懸液等量加入培養(yǎng)板的每個孔中，培養(yǎng)時間7天。⑵每隔24小時吸去3個孔的培養(yǎng)板，加入消化液，混懸細(xì)胞，計算細(xì)胞數(shù)目。每個孔計數(shù)2次，得出細(xì)胞濃度平均值。⑶繪制細(xì)胞生長曲線，橫坐標(biāo)為培養(yǎng)時間，縱坐標(biāo)為細(xì)胞濃度。10.體外培養(yǎng)細(xì)胞生長的條件（1）細(xì)胞的營養(yǎng)需要：氨基酸、單糖、維生素、無機(jī)離子、微量元素、激素、生長因子等。（2）細(xì)胞的生存環(huán)境：溫度:37℃、O2、CO2:5%CO2+H2O←→H2CO3←→H++HCO3-、、滲透壓。（3）無污染。（4）無毒11.選擇血清需注意事項有哪些？注意事項：=1\*GB3①血清質(zhì)量好壞是實驗成敗的關(guān)鍵。=2\*GB3②常用血清有胎牛血清（剖腹產(chǎn)）、新生牛血清（小于24h）、小牛血清（10～30D）、兔血清、馬血清等，其中以胎牛血清質(zhì)量最好。③優(yōu)質(zhì)血清的標(biāo)準(zhǔn)：透明，淡黃色，無沉淀物，無細(xì)菌、支原體、病毒污染。④血清的滅活（消除補(bǔ)體活性）：56℃，30分鐘。⑤血清的消毒：過濾除菌⑥一般說來．含5％小牛血清的培養(yǎng)基對大多數(shù)細(xì)胞可以維持細(xì)胞不死．但支持細(xì)胞生長一般需加10％血清．⑦對于血清支持細(xì)胞生長的生物學(xué)效應(yīng)已得到證明，但對血清中的復(fù)雜成分至今尚未完全清楚．=8\*GB3⑧血清中不僅存在促細(xì)胞生長因子，同對也存在細(xì)胞生長抑制因子或毒性因子，因此在含血清培養(yǎng)基中培養(yǎng)的細(xì)胞所反映的生物學(xué)特性是細(xì)胞和復(fù)雜血清因子的綜合反應(yīng)。12.簡述完全培養(yǎng)基的組成及配制方法?組成：基礎(chǔ)培養(yǎng)基80％一95％血清5％一20％碳酸氫鈉2.0g/L青、鏈霉素各100單位／毫升.配制方法:⑴認(rèn)真閱讀說明書⑵配制時要保證充分溶解，各種物質(zhì)要在培養(yǎng)基完全溶解后添加⑶配制水應(yīng)為雙蒸水或三蒸水⑷所用器皿應(yīng)十分清潔⑸配制好后馬上過濾，低溫?zé)o菌保存。13.什么時候需要進(jìn)行過濾除菌？簡述過濾除菌的全過程？將液體或氣體用微孔慮膜過濾,使大于孔徑的的細(xì)菌等微生物顆粒阻留,達(dá)到除菌的目的.常用于不易高壓滅菌的物品。如：培養(yǎng)液、各種酶類等。14.細(xì)胞培養(yǎng)實驗中，使用過的玻璃和塑料制品應(yīng)如何處理后重復(fù)使用？1.常用玻璃器皿清洗：浸泡（自來水）--刷洗（洗潔精）--酸泡5％鹽酸過夜（不少于6小時）--流水沖洗--蒸溜水浸泡和沖洗（注滿水－倒空）--50℃烘干--121℃高壓蒸汽滅菌20min2.塑料制品的清洗：料自制品現(xiàn)多是采用無毒并已經(jīng)特殊處理的成品，打開包裝即可用,多為一次性物品。必要時用：2%NaOH浸泡過夜--自來水充分沖洗，清潔液洗刷5%鹽酸溶液浸泡30分鐘--自來水和蒸餾水沖洗（15－20遍）--晾干備用,紫外線直接照射或輻照滅菌15．無菌操作的注意事項？1.凡是帶入超凈工作臺內(nèi)的酒精、PBS、培養(yǎng)基、胰蛋白酶的瓶子均要用75％酒精擦拭瓶子的外表面2.靠近酒精燈火焰操作。3.器皿使用前必須過火滅菌4.繼續(xù)使用的器皿（如瓶蓋、滴管）要放在高處，使用時仍要過火。5.各種操作要靠近酒精燈，動作要輕、準(zhǔn)確，不能亂碰。如吸管不能碰到廢液缸。6.吸取兩種以上的使用液時要注意更換吸管，防止交叉污染格16臘.題分疊別指灑出下小列物蘭品通歐常使述用那柄種消憤毒方該法進(jìn)鎮(zhèn)行消散毒？帥（培霜養(yǎng)室社、工員作臺反、，皇玻璃橡制品樓、，導(dǎo)金屬搜器械亞、，葉塑料繳制品喘，橡蛋膠制天品，啦培養(yǎng)舞用液蟲、，耕布類非）理.用消毒帽方法止分為給三類羨：釋（網(wǎng)A捧）勒物理輕滅菌佛法（歷紫外蔽線、躲濕熱打、過墾濾等坊）。母（畝B旗）追化學(xué)欠滅菌嶄法（珠各種盞化學(xué)豪消毒兆劑）牲。達(dá)迷催聲鋪鐮暗岸景返倒蘆蛙戚循愧拳眉痕籮（蝕C褲）荒抗生瓦素。硬1.竹紫屑外線額消毒向：用曾于空就氣，挪操作勾臺表飄面和往不能獨使用妖其它墻法進(jìn)莫行消煩毒和箏培養(yǎng)莫器忽。紫陪外線回?zé)魬?yīng)打距地們面爭已馬2.跪0底米享為宜所，且坑消毒拴的物彎品不手宜相設(shè)互遮頁檔，貧照射涼不到萌的地譜方起宅不到寨消毒博作用補(bǔ)。時腰間盟30富分鐘笨。2幣.趣溫?zé)徇呄疽颍杭吹邏喊赫魵饪聪窘伲球咭环N舉使用玩最廣家泛、禮效果井最好趨的消扮毒方頃法。褲常用帳物品些消毒王壓力醉及時類間：綿培養(yǎng)躺液、恒橡膠悼制品自10的磅繁10膠分鐘卸；布捧類、繳玻璃衫制品仰、金緊屬器栽械汽18超磅周20扯分鐘生。3嘉.爐過濾浴消毒雖：將漏液體寧或氣團(tuán)體用悶微孔親慮膜羅過濾姿,聾使大咸于孔訊徑的銅的細(xì)符菌等園微生共物顆置粒阻挎留久,繭達(dá)到袋除菌武的目索的黎.鄙常用凱于不腦宜高凱笑睬您怕衰昨堵森跪爪堡魔田麥顫捎爬貝箭如濤貪低辣皇祝罪林位傲嗎躺冶啊趕將腸寒早娘壓榴滅菌糧的物獅品。貞如：側(cè)培養(yǎng)狡液、魔各種緊酶類燭等。騙4惹化學(xué)開消毒撥法：摔利用遵消毒污劑來服消毒臂那些針不能落用物豈理方柴法消繼毒的脹物品州和場論地。狹最常申見的鏈?zhǔn)情?5錄%偉酒精尺及完1‰召的新倒?jié)嵍s滅，遞前者鍛主要禍用于招操作牙者的饅皮膚蜜，操買作臺林表面喬及無輝菌室教內(nèi)的貨壁面任處理菊。后壤者則羽主要膛用器匹械的餃浸泡申及皮悲膚和層操作余室壁拉面的脂擦試獲消毒紫。辯5昌抗生咳素消啦毒：消即抗駱生素退滅菌堆，主吩要用澡于培矛養(yǎng)用拿液滅設(shè)菌或皆預(yù)防邀培養(yǎng)選物污惹染。瓶17弓.庸你蠢認(rèn)為哈細(xì)胞筑培養(yǎng)貸中微鳥生物乓污染威主要摧是通右過那法些途襖徑導(dǎo)構(gòu)致的隙，并漁簡要植說明濟(jì)。勾(1貌)溉空氣命：女空氣腿是微遠(yuǎn)生物群傳播咳的最略主要烈途徑液。斑如凈艦化工桑作臺遞使用泉過久膏，濾不器受滔塵埃飲阻塞聞，可襪使凈岡化工晃作不箏能正維常進(jìn)針行。市工作辦時不群戴口籌罩或健面對飯操作鑰野大隱聲講初話、亭咳嗽課等使支外界乳氣流付過強(qiáng)馬。污替染空諷氣可書侵入臉操作灣野，悅造成益污染廢。因寄此工膠作時炎減少程空氣覺流動探是防在止污滿染的掠重要遭環(huán)節(jié)套。蹲(2盾)顯器材惑：銳各種適培養(yǎng)樹器皿析及器診械清源洗消掏毒不悟徹底附，例嘆如洗玉刷不賢干凈會．污儉物殘皇留及堵培養(yǎng)粥用液樂等滅統(tǒng)菌不往徹底展都可線以引趁入有增害物用質(zhì)。逐另外定需要腎注意掀的是基CO壯2由溫箱絲．由鳴于溫駱箱內(nèi)芳濕度將大，敘溫度添適宜稼，取西存細(xì)張胞時滑不慎恥將培卸養(yǎng)液植漏出彩，易青使細(xì)毛菌、哨霉菌辛孽生傘，而樣CO破2同溫箱委內(nèi)是售開放鏡式培窗養(yǎng)．什如不蒙定期傅消毒稻,劃可形扇成污除染奪.痰(3答）操恨作忘：芝實驗余操作歲無菌劈觀念焦不強(qiáng)喝、動鑰作不鍬準(zhǔn)確熄、使餓用污狀染的眾器具畜．或闊封瓶窩時不衰嚴(yán)，釘都可釘發(fā)生的污染提。培跌養(yǎng)兩皺種以勺上細(xì)出胞時閃，操寺作不高規(guī)范撲、交性叉使償用吸忠管或原營養(yǎng)進(jìn)液瓶足等有永可能丸導(dǎo)致抖細(xì)胞強(qiáng)交叉鬧污染婆。缸(4揉)星血清風(fēng)：顛有些酷血清甲在生期產(chǎn)時湊就已膛被支攜原體帳或病淚毒等梁污染炮，即勵可成床為污使染的傅來源均。墾(5衡）組爽織樣潑本推：聽原代禾培養(yǎng)悉的污啊染多捐數(shù)來晌源于訊組織盆樣本棵；另哀一方撥面手齡術(shù)時沈使用哪碘酒酷消毒或，這關(guān)些混反入組奴織中協(xié)的碘僅可以遍影響識細(xì)胞薪生長梨。絲18粘.省常用竟清潔階液的均配制踐成分輸有哪反些？異配制挽時需陣注意宏什么照？獅（見槐表二叮）廉19昨.常情用的園胰蛋出白酶脈的濃摘度是蹄多少吳？應(yīng)獄如何偽配制記?如畏何終會止其壟活性賭？奉胰蛋嘴白酶戚作用虧于與盟賴氨解酸或玻精氨靈酸相好連接果的肽明健，飛除去宣細(xì)胞蝴間粘原蛋白淹及糖駛蛋白熱，影披響細(xì)漆胞骨鵲架，害從而玩使細(xì)命胞分鏡離。舒胰蛋活白酶木液濃困度越御高，奧作用交越強(qiáng)紫，但挑超過稱一定柔限度秋會損烘?zhèn)?xì)亂胞。坊胰蛋性白酶鉗是一謹(jǐn)種黃孤白色腹粉末愈，溶喇解及散作用濃的最潑佳鮮PH補(bǔ)是轟8軌－吵9鼻，用澆無諷Ca燭2+權(quán)、發(fā)Mg騙2+殿的寧PB辜S吵緩沖疊液配槍制，康常用權(quán)的胰喬蛋白帖酶液睡濃度娘是卡0.讓25索％粥。用哲濾器航過濾櫻除菌煩。胰跨蛋白丟酶液穩(wěn)消化曉時間姐：襲2-植10軟分鐘探。用煙含血凡清培芝養(yǎng)液塑終止缸其對梨細(xì)胞選的消狂化作牽用將（梁1）孟ED性TA素液：搞常用意濃度斯為愉0牙.0凍2均％，褲配制寬時采每用無夕Ca或2+候、桌Mg文2+梨平衡刷鹽液叫溶解件，高突壓滅得菌后孝即可趨使用巷。（慕2）成胰蛋樓白酶打、誠ED汪TA戒:寬胰蛋貢白酶握和閥ED消TA塵聯(lián)合圾使用碌可提脈高消克化率使，但蘆需注意意轟ED爐TA攝不能國被血槍清中鋸和，喘消化踏后要叫徹底脂清洗臥，否爬則細(xì)誦胞易歌脫壁箭。（源3）惠膠原革酶：抄適于愈消化年分離典纖維漸性組眨織、醉上皮昏及癌慮組織報，可幣使上圍皮細(xì)雜胞與幻膠原緊成分現(xiàn)分離牧而不跟受損午害。遞鈣、餅鎂離逢子和色血清岸成分刃不會稻影響足膠原趴酶的幣消化蓋作用軟，因撇而可謊用卷BS貫S痛或含技血清移的培棄養(yǎng)液愈配制小，這攝樣實將驗操邀作簡揀便同頭時提翅高細(xì)哥胞成搬活率唇。但燙膠原紙酶價鵝格較宣高，魂大量煙使用敏將增凱加實石驗成支本。巖膠原鎮(zhèn)酶的時常用加劑量觀為詠2到00騎U遞／故ml障（約藝為宇l隙mg許／制ml忘）或解0領(lǐng)．仔03瞧％－缺0春．燦3填％。孩最佳免PH漢是伙6.叼5棄。器20撞.名涼詞解逗釋：聰細(xì)胞倡株面密度番抑制握接譽觸抑浪制熟原代懼培養(yǎng)貢傳驗代晌1蠅細(xì)胞抄株（缸ce及l(fā)l態(tài)s埋tr濾ai涌n乞）：增通過棚選擇導(dǎo)法或魔克隆稿形成晝法從影原代助培養(yǎng)嫂物或漢細(xì)胞蠶系中籠獲得葉的具莫有特拆殊性主質(zhì)或延標(biāo)志夏的培憶養(yǎng)物歐稱細(xì)或胞株堆?？?密字度抑慣制競（爹de凈ns朗it坑y嘴in諒hi槍bi慢ti簽on爺）：醬細(xì)胞壺數(shù)量痕到一愁定數(shù)菠量后漠引起煮抑制然增殖漫的現(xiàn)不象做3老接觸董抑制騰（傾co佛nt北ac攤t認(rèn)in嘗hi夫bi行ti惱on邊）：傳細(xì)胞販匯合湖相互代接觸筒后失習(xí)去運竹動的掘現(xiàn)象苗。景4然原代夠培養(yǎng)鋪（允pr鐘im磁ar礙y恒cu撫lt垮ur儀e滲）：迎從體囑內(nèi)取社出細(xì)傅胞或猾組織裂的第侍一次粱培養(yǎng)絕。騰5飼傳代醒（道pa再ss奇ag撫e擔(dān)）粥也稱屯再培饅養(yǎng)無襯論是皂否稀遷釋，蒙將細(xì)誦胞從山一個尿培養(yǎng)擋瓶轉(zhuǎn)對移或套移植劈到另遠(yuǎn)一個踢培養(yǎng)譯瓶即存稱為質(zhì)傳代費或傳室代培鉆養(yǎng)。悼也稱橡再培俊養(yǎng)。緩21竹．細(xì)榨胞凍聲存與母復(fù)蘇泳的基印本原寇則是避什么??？僚1榮慢凍少快融母2傷當(dāng)細(xì)學(xué)胞冷則到零壁度以夾下，說可以沫產(chǎn)生文以下柄變化者：細(xì)盲胞器環(huán)脫水杠，細(xì)坊胞中叛可溶符性物董質(zhì)濃翠度升碌高，要并在版細(xì)胞賊內(nèi)形蜓成冰晶晶。糊3鞏如果都緩慢圣冷凍刪，可雄使細(xì)作胞逐元步脫笛水，痛細(xì)胞且內(nèi)不箏致產(chǎn)壁生大輕的冰才晶；瓦相反畫．結(jié)護(hù)晶就續(xù)大，袋大結(jié)王晶會叼造成測細(xì)胞誼膜、碌細(xì)胞秀器的六損傷湯和破胃裂。悼復(fù)蘇撒過程連應(yīng)快蘇融，頁目的薦是防此止小獲冰晶混形成飯大冰抓晶，仁即冰誕晶的刻重結(jié)斑晶。女22互．凍派存液薦的作約用是欺什么館？亭（1洞）保旨存種爪子細(xì)懼胞，蕩以便顧隨時患取用灑。這莫是保在存細(xì)孟胞的世最主化要目綿的。膊（2辮）減善少細(xì)狼胞被姿微生阿物污地染的簽危險啟性。帥（3采）減姜少細(xì)歡胞之局間交炎叉污各染的陣危險循性。場（4擱）減麻少細(xì)彎胞因己傳代怪培養(yǎng)降而引亂起的指遺傳肺變異閱和形擦態(tài)改鞠變。廳（5唯）避墳免有茄限細(xì)漫胞系徐出現(xiàn)券衰老柴或惡攤性轉(zhuǎn)憂化。返職降低辦人力向和物罪力。怖23惜．為無什么晌細(xì)胞摟計數(shù)倦時，遣細(xì)胞膠懸液暗逸出報槽外基時要捉重做壽？知公式贏中除捕以4涉因為泄計數(shù)捕了4鄙個大及格的召細(xì)胞沿數(shù)。城公窄式中搖乘以至2因彼為細(xì)娘胞懸棕液于駱染液索是1也：1向稀釋悔。幕公式栽中乘龜以1循04擋因為跡計數(shù)孤板中搞每一漁個大塑格的胡體積往為：妹混1.埋0m鐵m虜（長扣）少×逢1.丙0m鉛m礎(chǔ)（寬睡）顧×示0.廟1m戶m餡（高劈）＝核0.不1m格m晴3廊而此1伯ml隱＝黃10障00旁mm州3尋24勿.助在細(xì)驢胞培緒養(yǎng)中奧如何酷防止仰污染刻？灶（1日）使莫用抗朝生素京清除歸細(xì)菌船和真揪菌。岔預(yù)防闊用藥董一般某用雙襪抗生諸素，島污染技后清噸除用坡藥需確采用跌大于惰用量雁5~鑒10化倍的絹沖洗毛法。猛于加城藥后趁作用槐24摸~4摧8小蕩時，高再換捎常規(guī)胖培養(yǎng)吉液。蜂（元2）懶用M固RA滲（m村yc貢op在la像sm村a朝re推mo葉va徒l劇ag糞en笑t）岡處理搞細(xì)胞竊，每雪4天悅換一襯次液予，連號續(xù)處瘡理1鬼5天反清除撇支原松體效煌果好挑。另蝴外將牢受支輸原體霸污染倒的細(xì)怪胞放愚置在羞41怪℃清作用板5柄—紫10聞h．汽最長購不超塑過1番8h暫，以活殺滅子支原鴉體．促25究.歡培養(yǎng)久細(xì)胞同的生湯長測抱定方鍬法削1漏,膽細(xì)胞脂計數(shù)環(huán)法晝2劑,類臺盼表蘭染全色法最3棚,伏MT駕T比質(zhì)色法蛙4剝,因細(xì)胞戚生長稠曲線仿法蒸5然,哪[3探H]勵-T嘗dR透([屯3H漠]-賤胸腺勝嘧啶雹核苷高）摻封入法待6溉,威Br塑dU旅(涉5-第br耀om烈o-云2百—大de慰ox嫌yu楊ri靜di逢ne檢，5尋-溴繞脫氧璃尿嘧括啶核奔苷們）摻壇入法然26之.純?nèi)绾慰椆烙嬳炇欠穹輦鞔_及傳異代的豎方式億？兇估計鴿:特(1造)胸細(xì)胞呀?jīng)]有矩生長腫到足糕以覆寸蓋瓶蹦底壁訪的大旅部分豈表面斤以前豆，不息要急售于傳跳代。肅(2欺)輕原代永培養(yǎng)倒時細(xì)墨胞多狹為混旱雜生類長，般上皮證樣細(xì)欣胞和庫成纖綠維樣蝕細(xì)胞登并存唱的情披況很升多見幅．傳才代時和不同歉的細(xì)拍胞有換不同側(cè)的消棉化時美間，既因而囑要注財意觀枯察及行時進(jìn)映行處楊理。閣并可意根據(jù)紹不同漂細(xì)胞遞對胰駛蛋白員酶的蓄不同抵耐受忌時間蓮而分知離和雕純化合所需盛要的土細(xì)胞缸。另旦外，鼠早期肯傳代潤培養(yǎng)即的細(xì)巖胞較客已經(jīng)賀建系缺的培嫩養(yǎng)消矩化時腫間相增對較致長。蝶吹打拳細(xì)胞清時動掉作要退輕巧圈盡可牌能減式少對黃細(xì)胞旺的損五傷。豆(堆3)扛首次饅傳代京時細(xì)輕胞接什種數(shù)奮量要羽多一勾些．掃使細(xì)寺胞能籃盡快巡適應(yīng)拾新環(huán)團(tuán)境而禍利于堤細(xì)胞老生存喚和增簡殖。綁隨消藏化分襲離而譯脫落例的組高織塊粒也可頃一并菌傳入壓新的夕培養(yǎng)嘗瓶。逢細(xì)胞敘傳代鎖過程萌需注紙意的征問題未：操叢作全角過程膽注意真無菌悟操作凳；胰圣酶消揀化時憂間要辦適度胞；吹吹打細(xì)輛胞時然用力悄要適剪度，拜盡量稍減少吳氣泡裁。在澆傳代而期培傾養(yǎng)時唱應(yīng)注槳意：植為保末持二他倍體美細(xì)胞廊性質(zhì)壽，細(xì)伴胞應(yīng)馬在傳脾代后駕早期語凍存遲（不昨出獨10覺代內(nèi)蟲凍存會）。暗少數(shù)熟細(xì)胞鬧系在搭此期掌可能洋發(fā)生悉自發(fā)車或誘覺發(fā)轉(zhuǎn)慈化，逝獲得廢不死躲性而閣成為堡無限銳細(xì)胞尺系，兆此時炭細(xì)胞伶核型貼多變向成異支倍體靜。衛(wèi)方式竿:巖1.受懸浮援生長巨細(xì)胞略傳代集.創(chuàng)離心詳法傳涌代：奏離心度（菜10槽00退轉(zhuǎn)/賢分凡）去源上清杏，沉旬淀物水加新押培養(yǎng)輩液后鼻再混右勻傳劍代。均直接昂傳代表法：逗懸浮洞細(xì)胞券沉淀釀在瓶查壁時混，將叼上清歸培養(yǎng)仆液去垮除l臣／2梁～2紹／3進(jìn)，然武后用漁吸管鑼直接統(tǒng)吹打肥形成褲細(xì)胞恐懸液平再傳副代。姑2童.半映懸浮步生長挖細(xì)胞歪傳代筑（H省el愧a細(xì)珠胞）罷此類脂細(xì)胞顛部分決呈現(xiàn)刻貼壁我生長枕現(xiàn)象狗，但疑貼壁叼不牢桌，可家用直干接吹獨打結(jié)法使還細(xì)胞昏從瓶毀壁脫贊落下引來，蜘進(jìn)行裳傳代抓。3須.貼框壁生揀長細(xì)鏟胞傳央代貴采用億酶消共化法午傳代雅。常情用的撕消化超液有娃0.夸25趨％的恨胰蛋掙白酶塔液。剛27行．組偽織細(xì)提胞取煤材及搭培養(yǎng)壤的基桌本要正求蘋1、輛取材杜的組蠶織最梅好盡仔快培紋養(yǎng)。裕2、聰取材譜時應(yīng)墻嚴(yán)格虎無菌餡操作耽。3擁、防枯止細(xì)摘胞機(jī)精械損紅傷：蕉取材決和原秒代細(xì)金胞制驕作時紙．耍淘用鋒幸利的寒器械徹，4雨、避腦免組難織干撐燥：堪要仔岸細(xì)去謀除所每取材勢料上蛙的血玻液(粱血塊貨)、案脂肪挽、壞蓬死組票織及塑結(jié)締香組織下，切少碎組步織時郊應(yīng)避屑免組冠織干焰燥，萍可在枯含少卸量培腰養(yǎng)液竿的器炸皿中走進(jìn)行孝。秤5、庭原代插培養(yǎng)丹，特翁別是丙正常招細(xì)胞看的培朱養(yǎng)，茄應(yīng)采跳用營秋養(yǎng)豐亡富的汗培養(yǎng)憤液。欠6、羽一般盯來講搬．胚斗胎組哪織較題成熟帆個體拼的組嚷織容變易培駝申養(yǎng)．婆分化貴低的百較分紐化高底的組脅織容緞易生怕長、碧腫瘤濫組織夾較正斬常組巴織容跡易培迅養(yǎng)。誤取材刑時應(yīng)宮盡量卻選用芒易培渾養(yǎng)的麗組織牧進(jìn)行脂培養(yǎng)遍。7乘、為鉆了便威于以豪后鑒堵別原槽代組塔織的該來源膚和觀乞察細(xì)斬胞體錯外培瓣養(yǎng)內(nèi)與原還組織驢的差側(cè)異性沙．原趕代取督材時副要同襪時留仔好組宗織學(xué)號標(biāo)本芒和電增鏡標(biāo)任本，鼓并詳殘細(xì)記逮錄。風(fēng)28楊.逆簡述居原代飼細(xì)胞基培養(yǎng)搭方法轎及注日意事森項細(xì)?喝常用泥的有樓兩種杏:醉細(xì)胞迅培養(yǎng)傘法迅和層組織脹塊法閥細(xì)胞棗培養(yǎng)獨法他(1邀)非按組由織的積消化瀉分離煤法收逗獲細(xì)搶胞。僑(2企）在斯消化筆過程蜜中．遷可隨胸時吸胡取少季量消猶化液召在鏡夜下觀械察。五(3晃)葉已過億濾的餅消化薯液，剖80主0豪一高10歐00律rp業(yè)m克，低工速離比心誦5m肝in練后，喬去除曾上清藍(lán)，加典含血烤清培董養(yǎng)液婆，輕犧輕吹膝打形莫成細(xì)澤胞懸優(yōu)液。據(jù)如果弓用膠眾原酶麥或虜ED發(fā)TA價應(yīng)先捧用緩擇沖液漸洗。襖組織跨塊法濟(jì)（棉1膽）取趕材、版修剪芒、組班織剪鄰或切致成蠟1m認(rèn)m揪3健左右踏的小粱塊。衡(2敘)奏將剪澤切好荷的組痛織小申塊．宮用眼波科鑷麥送入粥培養(yǎng)累瓶內(nèi)獎。忍25贈ml腰培養(yǎng)慚瓶煮(稠底面暈積約倉為吹17躁.5廟cm寧2石）以火20鍵一盈30殘小塊起為宜微?？?3平）放使置壺2—慶4h嚼待組抹織小績塊貼死附后渣．將蛋培養(yǎng)盞瓶慢堤慢翻材轉(zhuǎn)平疲放、擁靜止蟻培養(yǎng)雖?；宏注意借事項買]奸組織塘塊接誕種后響l～飄3天誤，由疼于游旦出細(xì)摧胞數(shù)患很少喜．組笛織塊收的粘筒貼不墳牢固驅(qū)．在遠(yuǎn)觀察燒相移繡動過沸程中巷要注濟(jì)意動洽作輕片巧．揮盡量笨不要盒引起俘液體朱的振前蕩而胞產(chǎn)生劑對組炭織塊強(qiáng)的沖我擊力積使其昏漂起尼。在源原代映培養(yǎng)育的爭1型一勸2d拿內(nèi)要碑持別誠注意危觀察姐，是類否有領(lǐng)細(xì)菌蓄、霉職菌的市污染氏．一故旦發(fā)臨現(xiàn)，智要及逐時清肆除，開以防氣給培我養(yǎng)箱軟內(nèi)的煮其它劑細(xì)胞桂帶來透污染蹈。煩對原滑代培端養(yǎng)要勉及時制觀察貿(mào)．發(fā)侮現(xiàn)細(xì)糠胞游丈出后騙要照仆像記頑錄。液原代恰培養(yǎng)沿3—跪5d冷需換晴液一扒次．要去除呈漂浮傭的組聲織塊今和殘泡留的窗血細(xì)誓胞，娛因為姑已漂巧浮的胃組織疊塊及擦很多酷細(xì)胞毅碎片端含有哭有毒畢物質(zhì)哈，影合響原勉代細(xì)梳胞的餡生長少，要疼及時伯清除槐。櫻注意膀事項惹:慌1盟組織矩塊接曉種后殿l～笑3天揭，由恒于游煙出細(xì)編胞數(shù)描很少川．組接織塊鹿的粘辭貼不堵牢固痛．在氧觀察矩相移述動過海程中母要注調(diào)意動柔作輕以巧．因盡量路不要攀引起株液體孔的振菌蕩而烈產(chǎn)生推對組皮織塊喂的沖鳴擊力速使其等漂起總。查2條在原秀代培估養(yǎng)的則1一領(lǐng)2d載內(nèi)要謠持別鐵注意區(qū)觀察志，是抽否有姻細(xì)菌語、霉秧菌的腹污染疲．一更旦發(fā)且現(xiàn)，治要及紹時清石除，僅以防暑給培疊養(yǎng)箱虧內(nèi)的淚其它耽細(xì)胞剃帶來廁污染截。慎3因原代自培養(yǎng)岡3橡—扁5d屠需換慎液一座次．眨去除真漂浮蔬的組牛織塊往和殘毅留的萍血細(xì)于胞，住因為閱已漂蟲浮的角組織牲塊及黎很多萍細(xì)胞秒碎片卻含有喂有毒尸物質(zhì)憶，影幟響原仍代細(xì)降胞的壘生長打，要蚊及時泛清除男。繡29倍．判膛斷細(xì)綿胞健冰康的蒸標(biāo)準(zhǔn)布是什笑么？踐1形拿態(tài)學(xué)超2細(xì)烤胞染挎色體備分析叮3同溜工酶吩檢查喇4辮DN悉A指滾紋技類術(shù)檢核測5視抗原雀標(biāo)記挪6細(xì)鼻胞生例長實防驗華30療.志培養(yǎng)航過程柴中支膨原體鄙和病勉毒污砍染的運特點掘是什串么？惑支原繁體是漿介于掩細(xì)菌扔與病遣毒之謙間能搬獨立蓮生活贊的最演小微抖生物欣，最單小直掠徑0販.2論um著，一惜般過臥濾除標(biāo)菌無跳法去拴除它枝，光均鏡下謙難以架看清甩它的芽形態(tài)準(zhǔn)結(jié)構(gòu)妹。開淋始不假易發(fā)撒現(xiàn)，菜能在恐偏堿批條件閑下生貧存，予對青降霉素壇有抗偶藥性賄。多秘吸附擋于細(xì)省胞表網(wǎng)面或布散在鳥于細(xì)曲胞之腹間。醉培養(yǎng)瀉細(xì)胞那受支虹原體珠污染登后，艘部分茫敏感演細(xì)胞龜可見正細(xì)胞靈生長桂增殖姥變慢諸，部登分細(xì)嬌胞變婚圓，砍從瓶杰壁脫獲落。虛但多惕數(shù)細(xì)遞胞污具染后個無明羊顯變關(guān)化，詞或略竿有變釣化，窮若不端及時久處理診，還腫會產(chǎn)晴生交足叉污析染叛31擋.簡華述流培式細(xì)棵胞術(shù)使的基撓本概突念。敵流式際細(xì)胞寸術(shù)是血二十邁世紀(jì)跳七十勇年代壁發(fā)展臨起來叨的高吐科學(xué)握技術(shù)完,員流式餃細(xì)胞御儀集教計算雖機(jī)技昏術(shù)、組激光狂技術(shù)話、流需體力藝學(xué)、譽細(xì)胞考化學(xué)周、細(xì)壇胞免兵疫學(xué)咬于一薄體,慨競同時蔥具有拳分析王和分迎選細(xì)暮胞功波能。及它不慢僅可愿測量棒細(xì)胞販大小葬、內(nèi)趙部顆用粒的慕性狀海,該還可眾檢測逮細(xì)胞壞表面史和細(xì)頂胞漿兵抗原勢、細(xì)床胞內(nèi)目DN陡A鼠、貸RN慎A吧含量繭等,嗽可對赤群體肺細(xì)胞自在單殺細(xì)胞堅水平擺上進(jìn)兩行分暈析,餅顧在短預(yù)時間園內(nèi)檢阿測分避析大弱量細(xì)凍胞,躍并傷收集康、儲刷存和騎處理墓數(shù)據(jù)向,剩進(jìn)行守多參將數(shù)定揭量分兼析;租南能夠蝕分類柳收集氧(分申選)陜某一趨亞群論細(xì)胞岸,分晉選純?nèi)龋敬?5醒%。翠與傳鐘統(tǒng)熒扔光鏡怨檢查晴相比緩，具陰有速俗度快飄、精襯度高患、準(zhǔn)勸確性寸好等部優(yōu)點先，昌成為炮當(dāng)代番最先隱進(jìn)的宗細(xì)胞哲定量查分析叮技術(shù)混。隨犯在血渣液學(xué)鑒、免散疫學(xué)家、腫恭瘤學(xué)挑、藥罰物學(xué)替、分鬼子生坦物學(xué)舟等學(xué)悠科廣構(gòu)泛應(yīng)總用玉。湯流式境細(xì)胞斃儀的紅工作垂原理齊：待何測樣疲品制潮成單夫個細(xì)任胞的輪懸液讀，經(jīng)望特異指性熒鎖光染更料對杜細(xì)胞壓（或欣表面低抗原探等）酬染色門后放摔入上始樣管閉中，濱在清賞潔氣拉體的孩壓力懶下將禮待測甲樣品奉壓入粱流動催室，辯與此糟同時勞，不壇含細(xì)百胞的砍磷酸送鹽緩套沖液昂（鞘聚液）撐在高炎壓下奶從鞘適液管肚噴出拖，鞘席液管當(dāng)入口信方向箏與待咬測樣并品流暢成一沿定角豎度，裁這樣駐，鞘誦液就窯能夠晚包繞恭著樣掠品高緞速流酷動，臉組成侵一個茫圓形義的流法束，興待測域細(xì)胞貸在鞘冊液的惠包被唇下單使行排班列，隱依次包通過盜檢測筒區(qū)域?qū)?。流蠢式?xì)慣胞儀銷通常距以激選光作排為發(fā)把光源惱。經(jīng)消過聚弄焦整代形后藥的光盛束，津垂直散照在繡樣品嗚流上委，被心熒光巷染色賠的細(xì)儉胞在匪激光懷束的腹照射登下，儀產(chǎn)生梅散射紋光和另激發(fā)禍熒光裙。享32回.闡遭述流勞式細(xì)獵胞儀敢的工戰(zhàn)作原吵理。警待測張樣品伯制成均單個益細(xì)胞轉(zhuǎn)的懸趨液，倍經(jīng)特麗異性謀熒光蓋染料寸對細(xì)烏胞（紀(jì)或表奔面抗災(zāi)原等靈）染航色后革放入摔上樣誘管中津，在廉清潔建氣體吃的壓訓(xùn)力下降將待泳測樣報品壓康入流漁動室見，與晉此同撫時，領(lǐng)不含跌細(xì)胞津的磷朋酸鹽姐緩沖各液（哥鞘液鋒）在炕高壓政下從它鞘液蹤管噴務(wù)出，艇鞘液驕管入光口方艘向與昨待測敞樣品欠流成柱一定偷角度主，這踐樣，賄鞘液軋就能施夠包昆繞著駕樣品唐高速導(dǎo)流動強(qiáng)，組稿成一剛個圓廳形的謹(jǐn)流束珍，待身測細(xì)市胞在吳鞘液僵的包小被下兵單行顫排列拋，依謀次通羊過檢增測區(qū)堪域。浴流式僑細(xì)胞察儀通鍵常以憲激光岸作為寄發(fā)光匙源。嘴經(jīng)過澇聚焦炮整形宜后的陡光束筒，垂賓直照珍在樣拉品流崇上，閑被熒揭光染幸色的踐細(xì)胞或在激房光束能的照原射下循，產(chǎn)眨生散黑射光裁和激估發(fā)熒峰光。演流障式細(xì)縣胞儀張的工狼作原肌理是弱將待經(jīng)測細(xì)晶胞放桿入樣求品管喚中，庭在氣酷體的怒壓力蠻下進(jìn)貓入充遺滿鞘覆液的么流動雁室。傻在鞘弱液的煌約束絹下細(xì)捆胞排火成單抄列由喇流動退室的竭噴嘴遠(yuǎn)噴出我，形月成細(xì)枝胞柱寫。通站過對備流動豆液體攏中排斜列成左單列悟的細(xì)蠢胞進(jìn)梳行逐女個檢糠測，豬得到鍋該細(xì)值胞的開光散率射和燃熒光怨指標(biāo)海，分島析出門其體簽積、夢內(nèi)部碌結(jié)構(gòu)鉤、底DN逃A胡、克RN饅A倍、蛋胖白質(zhì)烤、抗帖原等挑物理寇及化恢學(xué)特醒征。櫻33底.細(xì)斗胞經(jīng)斷過熒趨光染肝色，刃在流豬式細(xì)慶胞儀辟的激您光束成照射深下，膜會產(chǎn)惹生哪匹三大園信號豪？這撒三大烈信號樹分別稻代表華什么跡？螞1效前向亡角散綁射，糾即塘FS贏C喜，與渣細(xì)胞僑直徑皺成正茶相關(guān)琴，所形以我落們平獨時上造機(jī)的喂時候綠，有曲時用宴FS估C看做閾世值，倆排除異碎片這及其看它顆繞粒，遍避免蝴干擾桃。緞2儲側(cè)向聰角散誘射，辜即脂SS潔C蜜，是文指與金激光廟束正辰交魔90卵度方劫向的姜散射隸信號敘，它春對細(xì)視胞膜襖、胞夕質(zhì)、松核膜始的折湯射率掌更敏興感，烘可以踐提供仇細(xì)胞剛內(nèi)結(jié)蘆構(gòu)及積顆粒狼性質(zhì)領(lǐng)的信燥息麻.羽這兩衛(wèi)種信兇號同投時被紗前向休光電籍二極控管和繡90槐°掏方向謠的光且電倍澆增管嶄接收可。前鹽向光赤散射逝信號智在前捷向小悼角度景進(jìn)行通檢測驚，這吹種信扶號基彼本上由反映暮了細(xì)獻(xiàn)胞體墨積的本大小啊。瞞3折熒光盆信號糠的接繩受方根向與曲激光民束垂漆直，破經(jīng)過樓一系放列雙月色性別反射潔鏡和紡帶通逆濾光秋片的掏分離允，形槍成多傳個不李同波娃長的運熒光可信號漸。早這些踐熒光笑信號南的強(qiáng)退度代縣表了芝所測棍細(xì)胞呈膜表乳面抗鳥原的唯強(qiáng)度伯或其雹核內(nèi)叉物質(zhì)障的濃屯度，蘆經(jīng)光稿電倍頂增管題接收差后可錫轉(zhuǎn)換洪為電規(guī)信號勝，再玩通過館模／率數(shù)轉(zhuǎn)柿換器腥，將付連續(xù)眨的電絮信號已轉(zhuǎn)換再為可謙被計躬算機(jī)瓜識別鳴的數(shù)委字信弄號。憶計算訪機(jī)把隊所測剩量到訪的各憑種信甘號進(jìn)糧行計萍算機(jī)挑處理即，將冠分析原結(jié)果任顯示貌在計要算機(jī)帥屏幕剖上，啊也可保以打翼印出診來，壺還可優(yōu)以數(shù)親據(jù)文胡件的呆形式禾存儲喉在硬鴿盤上陪以備伯日后礙的查誤詢或教進(jìn)一鵝步分覆析。政34兵.在坐流式衡細(xì)胞護(hù)儀檢宗測中簡，鞘渾液有高哪些律作用補(bǔ)？栽鞘液賺的作荷用有瞇二：煌一是坦約束遭樣品結(jié)使之赴在噴伸嘴中滅心以義提高宗測量肚精度蠟；二騎是防斤止樣劣品靠靠近噴橡孔壁毛以避惱免堵露塞噴阿孔。件在這眨種約柜束作湊用下道，細(xì)渡胞排椒成單塵列一宗個跟注隨一織個地砌在鞘晴液包扮裹下球由流仁動室膨下面紐的噴劑嘴中菌心噴漁出，襯形成粘細(xì)胞玩液柱瞞。液郵柱與假入射拐的高董度聚需焦的瞇激光虧束相肥交，憑此時蜻，細(xì)恐胞上忠的熒煎光染鄙料被慨激發(fā)槽而產(chǎn)御生特細(xì)異性喬熒光橋。在跟與入川射激堪光和砌液柱望都垂睡直的添方向覺設(shè)置股有熒繼光測由量系欠統(tǒng)，梢包括翁透鏡睜、光娘闌、廊濾片僵、檢隙測器泰等，也將細(xì)事胞的帽熒光避信號尖變成葡電信騙號輸戶出到漂計算且機(jī)，屈用專信用軟雄件進(jìn)億行分桂析。泡35早.在秒流式亡細(xì)胞撈儀樣蘭品制改備中河，評采價一誘個樣剃品制帖備的殲優(yōu)劣騰，有燦哪三株個評撈價指皺標(biāo)？敢①因細(xì)胞窮的密盛度，態(tài)不能休低于賄1抱×挖10添6/燕ml軋船②藥非特都異熒衛(wèi)光，策不超免過飼1差％功.券③警細(xì)胞份碎片宣和聚切集體各，不濟(jì)能出葉現(xiàn)肉廳眼可迎見的勤團(tuán)塊菌。尺36而.列相舉流枯式細(xì)濃胞儀憲在生蓄物醫(yī)蝕學(xué)中駝的應(yīng)咬用。紡1宿HL桶A-橡B(yǎng)2蔑7分霉析南2蘋細(xì)胞宏周期她分析扇3烈凋亡逮分析奔4撓淋巴耗細(xì)胞菊亞群壯分析鍬5技白血葛病分顆型瞧6毯細(xì)胞瞎因子紹分析瓶7屢血小霧板分竄析探8子干細(xì)膜胞分謎析蓮9澆流式鼠細(xì)胞筍儀在做其它喉方面菠的應(yīng)稿用和37毯.簡效述流槐式細(xì)兔胞儀呀檢測妄HL桂A-搭B2蓮7炕軟件染的工劈作原腸理。襯HL璃A-及B2故7命基因眼表達(dá)賠在所尸有含寬核的偷細(xì)胞嚼上，與尤其吃是淋臣巴細(xì)集胞的勢表面蹤含量抹豐富侍。芽HL污A-妥B2筆7判軟件均首先專在舊FS奔C-腎FL焰2歸的點省圖上回確定煩CD氧3男強(qiáng)陽疑性細(xì)掌胞群君體的它位置夠，設(shè)賀定一帥個亂CD吊3+氧T岔淋巴但細(xì)胞僚門，式然后潑再根咱據(jù)小FS扣C酸設(shè)定太光散休射門蜜，去男除捧FS稍C洞過大捎或過望小的器細(xì)胞吐，確透保門房內(nèi)至周少有混50挺%刮的遺CD質(zhì)3+轉(zhuǎn)T它淋巴社細(xì)胞擱，這劫樣通殃過二匙者的躲結(jié)合路，將賺隨后起進(jìn)行火的分笑析嚴(yán)堪格地打定位霸在蹦T偵淋巴仰細(xì)胞外上?？仍跈z占測之窄前，偵儀器歷已經(jīng)侄Ca北li醒BR因IT黑E僅be激ad洋s健和鼠HL鞠A-不B2回7現(xiàn)ca泥l(xiāng)i葛br啟at氧io李n奶be下ad庭s菌調(diào)試兔成功津，并既通過貼試劑齒批號柜的后露綴確更定了們de擁ci蠅si宮on跟m嘩ar羊ke鈔r休的位掉置。站38例.簡覺述流構(gòu)式細(xì)朵胞儀典檢測哄HL蟲A-皇B2思7艱的實錢驗步滋驟。糕（見廊表三侵）追39參.流百式細(xì)暑胞儀憲分析忌的主狐軟件土名稱磁？鑰校準(zhǔn)防儀器掃的軟筋件名驅(qū)稱？分流式累細(xì)胞停儀數(shù)蝦據(jù)顯羅示通河常有帽哪幾庸種方叨式？搭主軟盤件C證EL爺LQ淚ue燦st味.伐儀器茄自動左校檢訂軟件安FA腹CS嚇Co冠mp辮.診存的劃數(shù)據(jù)諷文件權(quán)雖然慰易于雷加工攪、處練理、曲分析截，但報由于零數(shù)據(jù)吊大，旱又缺卷乏直殲觀性萍，不拍利于庫觀察枕各參潔數(shù)及眠其相潔互的盡關(guān)系氏。因柳此，扒將數(shù)煌據(jù)用噸圖形故顯墨示更竭直觀翅，然般后再唉進(jìn)行短統(tǒng)計仇分析姓，這油是介FC雙M猾結(jié)果博分析漫中最雖常用炎的分倚析方鬧法。劈FC改M閱數(shù)據(jù)緣顯示目通常而有一秘維直溜方圖增、二更維點怠圖、質(zhì)二維摔密度游圖、禿二維蔑等高緣圖、眼假三刪維圖替等。春40懇.F頁AC撞SC連al錦ib謙ur春流式臘細(xì)胞狹儀（瘦安裝毫48周8和變63辭5n閃m激勻光）達(dá)能同鏡時檢律測到慢的六饒大參穗數(shù)分嫁別是苦什么并？標(biāo)41北.俱簡述村流式浸細(xì)胞留儀的魄特點慣和檢碰測范子圍忘。薯1分比析速乖度快悟2積多參叛數(shù)3唉當(dāng)代句最先布進(jìn)的繼細(xì)胞苗定量突分析博技術(shù)弄4精矩度高采細(xì)胞古結(jié)構(gòu)間1牙細(xì)胞果大小丸2腰細(xì)胞士粒度褲3嶺細(xì)胞迫表面爹面積槽4證核漿殼比例為5遼DN機(jī)A含負(fù)量與排細(xì)胞械周期通6秤RN可A含端量踩7您蛋白促質(zhì)含昂量諒.璃細(xì)胞撲功能手1暖細(xì)胞給表面費/胞改漿/袍核的筍特異馬性抗虹原浸2喜細(xì)胞價活性芹3點細(xì)胞老內(nèi)細(xì)念胞因訊子鑰4涌酶活帥性規(guī)5擱激素爸結(jié)合騾位點候6格細(xì)胞救受體興42綁.卻在使沖用流艙式細(xì)紀(jì)胞儀債進(jìn)行戲分析痛時，怪為什鉤么要相進(jìn)行號光譜腥重疊他的校山正？某當(dāng)細(xì)虹胞攜支帶兩銅種熒父光素臥如P里E和噸FI住TC撒,銳受激填光激厚發(fā)而志發(fā)射陵出兩犧種不帆同波篇長的述熒光羅時，射理論曉上，冰可選喝擇濾慘片使姐每種康熒光宮僅被急相應(yīng)規(guī)的檢且測器餡檢測背到，抹而不達(dá)會檢癥測到笨另一拘種熒練光。迷但由嗽于目嫂前所散使用喉的各口種熒物光染胳料都絞是寬踏發(fā)射工譜性握質(zhì)，傷雖然臭它們驕之間抱各自校發(fā)射圣峰值斷各不內(nèi)相同趴，但碰發(fā)射行譜范用圍有長一定梁的重答疊，坑FI瓜TC惠探測胸器會租探測蜘到少圾量的黎PE蜘光譜播，而州PE窮探測突器則廈檢測塞到較哨多的躍FI鐵TC國光譜裝?？俗娣@著種誤泥差的蜻最有希效方撥法是男使用姻熒光鐘補(bǔ)償強(qiáng)電路噴，利箭用標(biāo)用準(zhǔn)已退知樣喬品或活熒光向小珠諸，可特合理臣設(shè)置穗熒光殺信號吩的補(bǔ)庸償值胞。釘43向.去簡述畫磷脂騰酰絲急氨酸彩外翻例分析走(A文nn掃ex命in東V景法研)猴聯(lián)合垂PI勻法檢乞測細(xì)蹤胞凋扶亡的綁原理房。眨磷脂秧酰絲守氨酸怎（迫Ph獲os依ph義at椒id外yl響se嬸ri陪ne扭,桌PS戶）正符常位掉于細(xì)器胞膜撈的內(nèi)狂側(cè)，醉但在鞋細(xì)胞旱凋亡萌的早娘期，紡PS梢可從迷細(xì)胞哄膜的偏內(nèi)側(cè)半翻轉(zhuǎn)義到細(xì)慨胞膜牢的表熔面，撤暴露克在細(xì)沿胞外轉(zhuǎn)環(huán)境椅中。垃An業(yè)ne蘋xi規(guī)n-鉤V死是一成種分書子量壺為嘩35球~3奉6K捉D秀的替Ca費2+死依賴停性磷惠脂結(jié)貌合蛋伐白，述能與蒙PS駕高親跑和力困特異稀性結(jié)呢合。悅將戀An陰ne岸xi沈n-至V總進(jìn)行做熒光俘素（征FI潑TC咸、旱PE鼓）或酬bi莖ot豈in濱標(biāo)記你，以濤標(biāo)記海了的柴An真ne姓xi喜n-準(zhǔn)V蜘作為搏熒光最探針曾，利梅用流濫式細(xì)緊胞儀往或熒榴光顯挺微鏡箏可檢普測細(xì)貢胞凋灣亡的嫌發(fā)生視。碘吃化丙偷啶帆(p架ro珠pi史di論ne浪i伶od重id吸e,瀉P粗I)換是一占種核義酸染許料，律它不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