石蠟切片技術(shù)操作

石蠟切片技術(shù)操作第一頁(yè)，共十三頁(yè)，編輯于2023年，星期三實(shí)驗(yàn)?zāi)康恼莆談?dòng)植物材料石蠟切片的方法及要求。實(shí)驗(yàn)原理見石蠟切片理論部分實(shí)驗(yàn)材料小白鼠各種器官組織第二頁(yè)，共十三頁(yè)，編輯于2023年，星期三實(shí)驗(yàn)方法石蠟切片技術(shù)（一）取材與固定石蠟切片技術(shù)（二）滲透與包埋石蠟切片技術(shù)（三）切片石蠟切片技術(shù)（四）染色石蠟切片技術(shù)（五）觀察總結(jié)第三頁(yè)，共十三頁(yè)，編輯于2023年，星期三1準(zhǔn)備工作：工具、藥品、計(jì)劃等2動(dòng)物的麻醉：氯仿麻醉3解剖取材4材料分割：保持樣品的完整性與代表性，考慮切片方向，實(shí)心組織大小5*5*2mm,空心細(xì)長(zhǎng)組織10mm長(zhǎng)。5固定：布溫氏固定液固定24h。6漂洗：70%乙醇換洗3次，每次20~60min。7保存：70%乙醇0~4℃。一、取材與固定第四頁(yè)，共十三頁(yè)，編輯于2023年，星期三二、脫水、滲透與包埋1脫水：85%乙醇→95%乙醇→100%乙醇→100%乙醇，每步30min~60min2透明：1/2乙醇＋1/2二甲苯→二甲苯→二甲苯，每步30min~60min3滲透：1/2二甲苯＋?石蠟→石蠟→石蠟，每步20min~60min，溫度62℃4包埋：將材料放入盛有石蠟的紙盒中，擺好位置（要考慮下一步的修快與切片方向），在水中冷卻5～10min.第五頁(yè)，共十三頁(yè)，編輯于2023年，星期三三、切片1修塊用單面刀片在玻璃板上修快使達(dá)到以下要求：（1）一個(gè)蠟塊含一個(gè)材料，蠟塊呈正方形或長(zhǎng)方形，材料位于蠟塊正中央。（2）材料邊緣與蠟塊邊緣平行，各面要平直，材料邊緣與蠟塊邊緣的距離約3mm。2固著將修好塊的蠟塊用燒熱的解剖刀固著在樣品臺(tái)上。第六頁(yè)，共十三頁(yè)，編輯于2023年，星期三3切片按以下順序進(jìn)行（1）將樣品臺(tái)固定在切片機(jī)樣品臂上，使切面豎直；（2）調(diào)切片厚度5～10um；（3）將切片刀用紗布蘸少許二甲苯擦凈后裝到切片機(jī)上，調(diào)刀角15～20，將刀固定好；（4）調(diào)刀距使樣品與刀口盡可能靠近；

(5)切片順時(shí)針搖動(dòng)切片機(jī)速度40-60r/min；

(6)將切好的蠟帶光面向下用毛筆放到臺(tái)紙上。第七頁(yè)，共十三頁(yè)，編輯于2023年，星期三第八頁(yè)，共十三頁(yè)，編輯于2023年，星期三4貼片

(1)清洗載波片；

(2)加粘片劑，要求薄、勻；

(3)放切片，光面向下；

(4)加水于切片下面；

(5)展片將載波片放于50℃的溫臺(tái)上至切片完全展平；

(6)烤干吸掉多余水，繼續(xù)放于溫臺(tái)上至水完全干燥；5貼標(biāo)簽臨時(shí)標(biāo)簽，用鉛筆寫明組號(hào)、姓名。第九頁(yè)，共十三頁(yè)，編輯于2023年，星期三四、染色1脫蠟二甲苯(2)→二甲苯(1)，每步5-10min；2復(fù)水1/2乙醇+1/2二甲苯→100%乙醇(2)→100%乙醇(1)→85%乙醇→70%乙醇→50%乙醇→30%乙醇→蒸餾水,每步2min；3初染代氏蘇木精染色15min；4分化0.1%HCl脫色至變紅→0.1%NaOH至變藍(lán)；5脫水蒸餾水（3－5s）→30%乙醇→50%乙醇→70%乙醇→85%乙醇,每步2min；6復(fù)染0.5%伊紅（溶于95%乙醇）染色10~15min；7脫水透明95%乙醇(10-20s)→100%乙醇(1)→100%乙醇(2)→1/2乙醇+1/2二甲苯→二甲苯(1)→二甲苯(2)(≥3min),每步2~3min；第十頁(yè)，共十三頁(yè)，編輯于2023年，星期三8封片將材料周圍擦干凈（注意在擦的過(guò)程中材料上的二甲苯必須保證不能干，可隨時(shí)補(bǔ)加），加1～2滴中性樹膠，加蓋玻片（需提前洗凈擦干備用）；9貼標(biāo)簽注明樣品名稱、染色方法、組號(hào)、姓名和日期；10鏡檢檢查樣品取材、切片及染色情況，熟悉樣品為下次樣品觀察做好準(zhǔn)備；11干燥平放于展片盤中，于37℃溫箱中或自然干燥；12預(yù)習(xí)下次實(shí)驗(yàn)：樣品的觀察，需提前做好預(yù)習(xí)，并準(zhǔn)備紙、鉛筆。第十一頁(yè)，共十三頁(yè)，編輯于2023年，星期三五、觀察1樣品觀察小白鼠腦；小白鼠心??；小白鼠肝臟；小白鼠腎臟；小白鼠肺；小白鼠小腸；小白鼠肌肉；