2、細(xì)菌分離培養(yǎng)、接種技術(shù)及生化

第三章臨床細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)

第二節(jié)細(xì)菌分離培養(yǎng)與鑒定P35

細(xì)菌在適宜的條件下方可生長(zhǎng)繁殖，臨床細(xì)菌標(biāo)本只有經(jīng)過細(xì)菌的分離培養(yǎng)鑒定和藥敏試驗(yàn)，才能對(duì)感染性疾病作出病原學(xué)診斷和指導(dǎo)臨床用藥。故細(xì)菌的分離培養(yǎng)對(duì)疾病的預(yù)防與診治有重要作用。2021/5/91一、培養(yǎng)基的種類和選擇

(一)基本條件1.合格的細(xì)菌實(shí)驗(yàn)室2.合格的無(wú)菌實(shí)驗(yàn)室3.基本設(shè)備和器具2021/5/92(二)培養(yǎng)基培養(yǎng)基(culturemedium)是由人工方法配制而成的，專供微生物生長(zhǎng)繁殖使用的混合營(yíng)養(yǎng)物制品。用途：①可用于細(xì)菌的分離純化、傳代和菌種保存②可用于研究細(xì)菌的生理生化特性③是對(duì)病原菌分離鑒定的主要環(huán)節(jié)和必不可少的手段2021/5/931.培養(yǎng)基的組成成分：⑴營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)：水、蛋白胨、肉浸液、牛肉膏、糖醇類、血液、無(wú)機(jī)鹽、雞蛋和動(dòng)物血清、生長(zhǎng)因子（Vit、aa、嘌呤、嘧啶等）。2021/5/94⑵凝固物質(zhì)：最常用的為瓊脂(agar)，它是從石花菜中提出來的一種半乳糖膠，100℃溶解，40℃凝固，可利用瓊脂來改變培養(yǎng)基的物理性狀(固體或半固體)，它是理想的固體培養(yǎng)基的賦形劑，其本身不被細(xì)菌分解利用，也無(wú)營(yíng)養(yǎng)作用。2021/5/95⑶抑菌劑和指示劑：不是細(xì)菌生長(zhǎng)繁殖的必需物質(zhì)，是制備細(xì)菌的選擇、鑒別培養(yǎng)基和判斷結(jié)果的需要。

常用的抑菌劑有：膽鹽、煌綠、亞硫酸鈉、亞硒酸鈉及一些染料和某些抗生素等。

常用的指示劑有：酚紅、中性紅、甲基紅、溴甲酚紫、溴麝香草酚藍(lán)、中國(guó)蘭等酸堿指示劑，美蘭為常用的氧化還原指示劑。2021/5/962.培養(yǎng)基的分類液體培養(yǎng)基：牛肉湯(牛肉浸液+1%蛋白胨+0.5%NaClpH7.4)半固體培養(yǎng)基：加0.2~0.5%agar固體培養(yǎng)基：營(yíng)養(yǎng)物+2%agar

按物理性狀2021/5/97基礎(chǔ)培養(yǎng)基：是其他培養(yǎng)基的基礎(chǔ)，如普通肉湯、普通瓊脂平板、斜面、高層營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基：BAP、羅-琴培養(yǎng)基、呂氏血清斜面選擇培養(yǎng)基：SS平板、BS平板、Mac平板等鑒別培養(yǎng)基：糖發(fā)酵管、MIU、KIA、TSI等特殊培養(yǎng)基：厭氧培養(yǎng)基、高滲培養(yǎng)基等按用途2021/5/983.常用培養(yǎng)基的制備⑴肉膏湯的制備：

0.3%牛肉浸膏+1%蛋白胨+0.5%NaCl加熱溶解，調(diào)pH7.4~7.6，分裝，121℃，20分鐘高壓滅菌冷后待用?？捎糜跇?biāo)本和細(xì)菌的增菌。⑵普通瓊脂平板、斜面、高層：

肉膏湯+2%agar，加熱溶解，121℃，20分鐘高壓滅菌冷至50℃平皿→普通瓊脂平板：分離純培養(yǎng)和藥敏傾倒試管(斜放)→普通瓊脂斜面：增菌、保存細(xì)菌試管(直立)→普通瓊脂高層：備用

2021/5/99⑶血瓊脂平板：普通瓊脂平板營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)滅菌冷至50℃+5%~10%脫纖維SRbc或RRbc，搖勻，傾倒無(wú)菌平皿，冷凝后即成血平板。常用于營(yíng)養(yǎng)要求較高的細(xì)菌的分離純培養(yǎng)和藥敏。⑷半固體肉湯：牛肉湯(牛肉浸膏湯)+0.2%~0.5%agar→加熱溶化→分裝→高壓滅菌→冷卻即成。常用于保存菌種和觀察細(xì)菌的動(dòng)力。2021/5/9104.選擇適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基：根據(jù)臨床標(biāo)本中細(xì)菌的需要，選擇適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基。2021/5/911二、分離培養(yǎng)（一）細(xì)菌的分離1.平板劃線分離法——分離純培養(yǎng)①分區(qū)劃線②連續(xù)劃線2.斜面接種法連續(xù)蜿蜒劃線，從斜面底部至斜面頂端3.液體接種法在試管內(nèi)壁與液面交接處管壁上研磨，使細(xì)菌混于液體中。4.半固體接種法穿刺接種法2021/5/912傾注平板法

取一定量的稀釋標(biāo)本加入無(wú)菌平皿，再加入冷至45℃左右的定量培養(yǎng)基，混勻，待凝后倒置培養(yǎng)。6.涂布法

把稀釋定量被檢菌液均勻涂布于瓊脂平板表面。7.定量接種環(huán)法

把定量接種環(huán)沾取菌液均勻涂布于瓊脂平板表面。2021/5/913(二)細(xì)菌的培養(yǎng)方法

根據(jù)臨床初步診斷及待檢細(xì)菌的種類，可選用不同環(huán)境條件進(jìn)行培養(yǎng)，常用培養(yǎng)方法有：1.需氧培養(yǎng)：適用于需氧菌和兼性厭氧菌，在有氧環(huán)境下35℃孵育18~24h。2.CO2培養(yǎng)：適用5%~10%CO2環(huán)境才生長(zhǎng)良好的細(xì)菌，如腦膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌、布魯菌的首次分離培養(yǎng)。供給CO2的方法有：CO2培養(yǎng)箱、燭缸法、化學(xué)法(每升容積0.4gNaHCO3+0.35ml濃HCl)。3.厭氧培養(yǎng)法：適用于厭氧菌的分離培養(yǎng)，常用的方法有厭氧罐法、氣袋法和厭氧手套箱法等。2021/5/9142021/5/915(三)細(xì)菌的生長(zhǎng)情況在平板上——呈菌落(colony)生長(zhǎng)，常用于細(xì)菌分離純培養(yǎng)在斜面上——呈菌苔或菌落生長(zhǎng)，可用于增菌或保存菌種。半固體中——呈遷徙生長(zhǎng)(有動(dòng)力)。可用于觀察動(dòng)力和保種。在液體中——呈表面生長(zhǎng)，均勻混濁生長(zhǎng)和沉淀生長(zhǎng)。可用于增菌和鑒別細(xì)菌。2021/5/916思考題細(xì)菌有哪些分離培養(yǎng)與接種技術(shù)？簡(jiǎn)述細(xì)菌在不同培養(yǎng)基中的生長(zhǎng)情況及實(shí)際意義？2021/5/917三、生化反應(yīng)

由于不同種類細(xì)菌的酶系統(tǒng)不同，故其新陳代謝過程中的合成代謝產(chǎn)物（毒素）與分解代謝產(chǎn)物（生化反應(yīng)）也不一樣，借此可鑒別細(xì)菌。生化反應(yīng)：不同菌體內(nèi)具有不同的獨(dú)特酶系統(tǒng)，故對(duì)各底物(糖、蛋白等)的分解產(chǎn)物也不一樣，用此方法來鑒別細(xì)菌叫生化反應(yīng)。2021/5/918（一）碳水化合物的代謝試驗(yàn)1.糖(醇、苷)類發(fā)酵試驗(yàn)

產(chǎn)酸(+)：丙酮酸、乳酸、甲酸等原理：細(xì)菌糖類產(chǎn)酸產(chǎn)氣⊕：CO2、H2不分解：(-)

由于不同細(xì)菌菌體內(nèi)的酶系統(tǒng)不同，可分解單糖（葡萄糖）,雙糖（乳糖），多糖（淀粉）和醇類（甘露醇），糖苷（水楊苷），代謝產(chǎn)物也不一樣，可借此來鑒別細(xì)菌。酶2021/5/919培養(yǎng)基：肉膏湯+1%待試糖+指示劑→溶化調(diào)pH7.4±→分裝→高壓滅菌冷后待用。有液體、半固體、固體或微量生化管幾種類型。方法：把分純的細(xì)菌→1%糖(醇、苷)類培養(yǎng)基，35℃18~24h→觀察結(jié)果。產(chǎn)酸產(chǎn)氣：如大腸埃希菌→GS→結(jié)果+產(chǎn)酸不產(chǎn)氣：如傷寒b、痢疾b→GS→+-培養(yǎng)基不變色：如卡他莫拉菌應(yīng)用：是鑒別細(xì)菌最主要和最基本的試驗(yàn)，特別是腸桿菌科鑒定的主要試驗(yàn)。⊕⊕2021/5/9202.氧化-發(fā)酵試驗(yàn)(O/F試驗(yàn))原理：

分解GS—氧化型細(xì)菌，如微球菌、綠膿b

細(xì)菌

分解GS—發(fā)酵型細(xì)菌，如葡萄c、腸桿菌科不分解GS—產(chǎn)堿型細(xì)菌，如莫拉莫拉菌培養(yǎng)基：HL培養(yǎng)基(蛋白胨2g、NaCl5g、GS10g、agar2.5g、K2HPO4·12H2O0.3g、0.2%溴麝香草酚蘭12ml、加蒸餾水至1000ml，調(diào)pH7.2）堿性時(shí)為綠色，酸性時(shí)為黃色。方法：將待測(cè)菌同時(shí)穿刺接種兩支HL培養(yǎng)基，其中一支滴加無(wú)菌液體石蠟(高度不少于1cm)，35℃培養(yǎng)48h。有O2有O2或無(wú)O22021/5/921結(jié)果：應(yīng)用：檢測(cè)細(xì)菌的代謝類型，進(jìn)而鑒別細(xì)菌。如腸桿菌科細(xì)菌為發(fā)酵型，而非發(fā)酵菌為氧化型或產(chǎn)堿型。也可用于葡萄球菌(發(fā)酵型)和微球菌(氧化型)的區(qū)別。注意事項(xiàng)：①對(duì)營(yíng)養(yǎng)要求高的細(xì)菌應(yīng)在HL培養(yǎng)基中加入2%血清或0.1%的酵母浸膏。②陰性者要延長(zhǎng)培養(yǎng)時(shí)間3~4天再觀察結(jié)果。③指示劑不能用酒精溶解。液體石蠟2021/5/9223.β-半乳糖苷酶(ONPG)試驗(yàn)原理：ONPG鄰-硝基酚+β-D-半乳糖試劑：0.75MONPG溶液，為無(wú)色，若出現(xiàn)黃色，則不應(yīng)再用。方法：從KIA斜面上刮取菌苔，加入0.25ml無(wú)菌NS制成菌懸液，加入1滴甲苯充分振搖，使β-半乳糖苷酶釋放，置37℃水浴5分鐘，加入0.25mlONPG試劑，水浴(35~37℃)20min~3h，觀察結(jié)果。結(jié)果：菌懸液呈現(xiàn)黃色為陽(yáng)性。β-半乳糖苷酶水解2021/5/923應(yīng)用：

本試驗(yàn)主要用于遲緩發(fā)酵乳糖菌株的快速鑒定。

遲緩分解乳糖的細(xì)菌(宋內(nèi)志賀菌等)只有β-半乳糖苷酶(胞內(nèi)酶)，缺乏半乳糖苷滲透酶(胞外酶)或活性很低，故需幾天才能將乳糖分解，若采用ONPG試驗(yàn)則可迅速(20~30min)得出結(jié)果。因?yàn)镺NPG與乳糖十分相似，且分子較小，它不需半乳糖苷滲透酶則可進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，而被細(xì)胞內(nèi)的β-半乳糖苷酶分解為半乳糖和黃色的鄰-硝基酚。

ONPG試驗(yàn)結(jié)果不一定與分解乳糖相一致，這主要取決于細(xì)菌產(chǎn)生的酶及其活性。若無(wú)ONPG，可采用5%的乳糖代替，同時(shí)減少蛋白胨的含量。2021/5/9244.七葉苷水解試驗(yàn)原理：七葉苷(esculin)+H2O七葉素+GS

七葉素+Fe2+(培養(yǎng)基中)黑色化合物培養(yǎng)基：

七葉苷培養(yǎng)基、膽汁七葉苷培養(yǎng)基。方法：

把待測(cè)菌接種于七葉苷培養(yǎng)基，35~37℃，18~24h。結(jié)果：

培養(yǎng)基變黑為陽(yáng)性，不變色為陰性。應(yīng)用：

主要用于腸球菌(+)與其它鏈球菌(-)的鑒別。也可用于革蘭陰性桿菌(-)和厭氧菌(+)的鑒別。細(xì)菌2021/5/9255.甲基紅試驗(yàn)(methylredtest)原理：GS丙酮酸→乳酸、甲酸、乙酸，pH↓本試驗(yàn)以甲基紅為指示劑，因此：當(dāng)pH﹥5.4時(shí)呈黃色，為陰性當(dāng)pH﹤4.5時(shí)呈紅色，為陽(yáng)性當(dāng)pH在4.5~5.4時(shí)呈桔紅色，為弱陽(yáng)性培養(yǎng)基：葡萄糖蛋白胨水方法：將待測(cè)菌接種于上述培養(yǎng)基中，35℃2~4天，加入甲基紅指示劑，立即觀察結(jié)果。應(yīng)用：用于鑒別大腸埃希菌(+)和產(chǎn)氣腸桿菌(-)，其他腸桿菌科中沙門菌屬、志賀菌屬、枸櫞酸桿菌屬、變形桿菌屬均為陽(yáng)性，而腸桿菌屬和哈夫尼亞屬均為陰性。產(chǎn)氣桿菌2021/5/9266.V-P試驗(yàn)(Voges-Proskauertest)原理：細(xì)菌→GS→丙酮酸乙酰甲基甲醇+CO2

乙酰甲基甲醇丁二酮(二乙酰)

丁二酮+胍基(培養(yǎng)基中精氨酸中含有胍基)→紅色化合物培養(yǎng)基：葡萄糖蛋白胨水方法：將待測(cè)菌接種于上述培養(yǎng)基中，35℃48h后，加入甲液(6%α-萘酚酒精溶液)和乙液(40%KOH)，振搖。結(jié)果：在數(shù)分鐘內(nèi)出現(xiàn)紅色者為陽(yáng)性，若無(wú)紅色出現(xiàn)且置于35℃4h后仍如故者為陰性。應(yīng)用：本試驗(yàn)與甲基紅試驗(yàn)往往同時(shí)使用，一般前者為陽(yáng)性，后者為陰性。脫羧-2HKOH2021/5/927(二)

蛋白質(zhì)和氨基酸的代謝試驗(yàn)1.明膠液化試驗(yàn)：原理：某些細(xì)菌半固體明膠氨基酸變成流動(dòng)的液體。方法：待測(cè)菌穿刺接種于明膠培養(yǎng)基，22℃7天，觀察結(jié)果。35℃中明膠自動(dòng)液化，若在35℃培養(yǎng)，觀察前先置于4℃中30分鐘后，再看結(jié)果。結(jié)果：培養(yǎng)基呈液化狀態(tài)為陽(yáng)性。應(yīng)用：腸桿菌科細(xì)菌的鑒別。Eg：沙雷菌，普通變形桿菌，奇異變形桿菌，陰溝桿菌；某些厭氧菌如產(chǎn)氣莢膜梭菌、脆弱類桿菌；多數(shù)假單胞菌也能液化明膠。明膠酶(胞外酶)分解2021/5/9282.吲哚試驗(yàn)(IndoleTest)原理：

色氨酸吲哚+丙酮酸

吲哚+吲哚試劑(對(duì)二甲氨基苯甲醛)→玫瑰吲哚培養(yǎng)基：蛋白胨水方法：將待測(cè)菌接種于上述培養(yǎng)基中，

35℃24~48h，加入吲哚試劑，觀察結(jié)果結(jié)果：于兩者液面交界處出現(xiàn)紅色為陽(yáng)性，不變色為陰性。應(yīng)用：主要用于腸桿菌科細(xì)菌的鑒別，如大腸埃希菌為(+)，產(chǎn)氣腸桿菌(-)。色氨酸酶某些細(xì)菌2021/5/9293.硫化氫試驗(yàn)原理：某些細(xì)菌能分解培養(yǎng)基中的含硫氨基酸產(chǎn)生H2S，當(dāng)它與培養(yǎng)基中的Fe2+或鉛離子相遇時(shí)，則形成黑褐色的FeS或PbS沉淀。此試驗(yàn)可間接用于檢測(cè)是否產(chǎn)生H2S。培養(yǎng)基：醋酸鐵(鉛)培養(yǎng)基。方法：將待測(cè)菌接種于醋酸鐵(鉛)培養(yǎng)基中，

35℃培養(yǎng)1~2天，觀察結(jié)果。結(jié)果：培養(yǎng)基變黑為陽(yáng)性，不變色為陰性。應(yīng)用：主要用于腸桿菌科中細(xì)菌屬和種的鑒別。沙門菌屬、愛德華菌屬、亞利桑那菌屬、枸櫞酸桿菌屬，絕大多數(shù)為陽(yáng)性，其他菌屬為陰性。2021/5/9304.尿素分解試驗(yàn)原理：某些細(xì)菌具有尿素酶，使尿素分解產(chǎn)生大量氨，使培養(yǎng)基呈堿性(酚紅為指示劑)，培養(yǎng)基變紅。培養(yǎng)基：尿素培養(yǎng)基方法：

將待測(cè)菌接種于上述培養(yǎng)基中，35℃培養(yǎng)18~24h，觀察結(jié)果。結(jié)果：培養(yǎng)基變紅為陽(yáng)性，不變色為陰性。應(yīng)用：主要用于變形桿菌屬的鑒定，另外雷氏普羅威登菌和莫根菌也為陽(yáng)性。2021/5/9315.苯丙氨酸脫氨酶試驗(yàn)原理：某些細(xì)菌可產(chǎn)生苯丙氨酸脫氨酶，使苯丙氨酸脫去氨基，形成苯丙酮酸，加入FeCl3試劑后呈綠色反應(yīng)。培養(yǎng)基：苯丙氨酸瓊脂培養(yǎng)基方法：將待測(cè)菌接種于上述斜面培養(yǎng)基中，35℃培養(yǎng)18~24h，滴加3滴FeCl3試劑，自上流下，立即觀察結(jié)果。若延長(zhǎng)時(shí)間觀察會(huì)引起褪色。結(jié)果：出現(xiàn)綠色為陽(yáng)性。應(yīng)用：主要用于腸桿菌科細(xì)菌的鑒定。變形桿菌、摩根摩根菌為陽(yáng)性。2021/5/9326.氨基酸脫羧酶試驗(yàn)原理：氨基酸胺+CO2，胺使培養(yǎng)基變堿，指示劑則變色。培養(yǎng)基：氨基酸脫羧酶和氨基酸對(duì)照培養(yǎng)基。方法：將待測(cè)菌接種于上述培養(yǎng)基中，35℃1~4天，觀察結(jié)果。結(jié)果：對(duì)照管呈黃色，測(cè)定管呈紫色(溴甲酚紫為指示劑)為陽(yáng)性，若測(cè)定管也為黃色則為陰性。若對(duì)照管呈紫色則試驗(yàn)毫無(wú)價(jià)值。應(yīng)用：主要用于腸桿菌科細(xì)菌的鑒定。沙門菌屬中除傷寒和雞沙門菌外，均陽(yáng)性。志賀菌中除宋內(nèi)和鮑氏外，均陰性特異脫羧酶2021/5/933賴氨酸→尸胺鳥氨酸→腐胺精氨酸→精胺2021/5/934(三)碳源和氮源利用試驗(yàn)1.枸櫞酸鹽利用試驗(yàn)(citratetest)原理：某些細(xì)菌能分解枸櫞酸鹽(獲得碳源)，使培養(yǎng)基變堿(原pH6.8→pH↑)，培養(yǎng)基(溴麝香草酚蘭為指示劑)由淡綠變?yōu)樯钏{(lán)色。培養(yǎng)基：枸櫞酸鹽斜面培養(yǎng)基方法：將待測(cè)菌接種于上述培養(yǎng)基中，35℃1~4天，觀察結(jié)果。結(jié)果：由淡綠變?yōu)樯钏{(lán)色為陽(yáng)性，不變色為陰性。應(yīng)用：用于腸桿菌科中菌與屬的鑒定。如沙門菌屬、克雷伯菌屬一般為陽(yáng)性，其他菌屬一般為陰性。2021/5/9352.丙二酸鹽利用試驗(yàn)原理：某些細(xì)菌能將丙二酸鹽分解成碳酸鈉，使培養(yǎng)基變堿(原pH6.8→pH↑)，培養(yǎng)基(溴麝香草酚蘭為指示劑)由淡綠變?yōu)樯钏{(lán)色。培養(yǎng)基：丙二酸鹽培養(yǎng)基方法：將待測(cè)菌接種于上述培養(yǎng)基中，35℃1~2天，觀察結(jié)果。結(jié)果：培養(yǎng)基由淡綠變?yōu)樯钏{(lán)色為陽(yáng)性(指示劑同上)，不變色為陰性。應(yīng)用：用于腸桿菌科中菌屬間的鑒定?？死撞鷮伲瑏喞Ｄ蔷鸀殛?yáng)性。2021/5/936IMViC試驗(yàn)*：是鑒別細(xì)菌常用的一組生化試驗(yàn)。

IMVC如：大腸埃希菌++--

產(chǎn)氣腸桿菌--++2021/5/937（四）各種酶類試驗(yàn)1.氧化酶試驗(yàn)(kovactest)原理：還原型細(xì)胞色素C氧化型細(xì)胞色素C四甲基對(duì)苯二胺有色的醌類化合物方法：①濾紙法：取潔凈濾紙一小塊，沾菌少許，滴加試劑。②試劑紙片法：將濾紙片浸泡于試劑中制成試劑紙片，取菌涂于試劑紙片上。 ③菌落法：直接滴加試劑于被檢菌落上。結(jié)果：10秒鐘內(nèi)呈深紫色為陽(yáng)性。同時(shí)應(yīng)以銅綠假單胞菌(+)與大腸埃希菌(-)做對(duì)照。應(yīng)用：主要用于腸桿菌科細(xì)菌與假單胞菌的鑒別（發(fā)酵菌與非發(fā)酵菌鑒別），另外奈瑟菌屬和莫拉菌屬也呈陽(yáng)性反應(yīng)。細(xì)菌氧化酶氧化型細(xì)胞色素C2021/5/9382.觸酶試驗(yàn)(H2O2酶試驗(yàn))原理：具有觸酶的細(xì)菌，能催化H2O2生成水和新生態(tài)氧，繼而形成分子氧出現(xiàn)氣泡。即：

H2O2H20+O2↑(出現(xiàn)氣泡)試劑：3%過氧化氫溶液方法：玻片法和試管法結(jié)果：產(chǎn)生氣泡為陽(yáng)性，不產(chǎn)生氣泡為陰性應(yīng)用：常用于G+C的初步鑒定，如葡萄球菌(+)，而鏈球菌為(-)。觸酶2021/5/9393.硝酸鹽還原試驗(yàn)(nitratereductivetest)原理：硝酸鹽亞硝酸鹽+氨亞硝酸鹽+試劑→顏色反應(yīng)(紅色)培養(yǎng)基：硝酸鹽培養(yǎng)基試劑：甲液(對(duì)氨基苯磺酸溶液)；乙液(α萘胺醋酸溶液)方法：將待測(cè)菌接種于硝酸鹽培養(yǎng)基中，35℃1~4天，加入0.1ml甲、乙等量混合液，搖勻，立即觀察結(jié)果。結(jié)果：呈紅色為陽(yáng)性，若加入試劑后無(wú)顏色反應(yīng)可能為：①硝酸鹽沒有被還原，試驗(yàn)為陰性。②若再加入少許鋅粉，呈紅色者則表明試驗(yàn)確為陰性，若仍不產(chǎn)生紅色者為假陰性(鋅＋亞硝酸＝紅色芳基肼)應(yīng)用：如腸桿菌科細(xì)菌均為陽(yáng)性;銅