南醫(yī)大藥物分析藥物定量分析與分析方法驗證演示文稿

南醫(yī)大藥物分析藥物定量分析與分析方法驗證演示文稿當前第1頁\共有51頁\編于星期二\3點（優(yōu)選）南醫(yī)大藥物分析藥物定量分析與分析方法驗證當前第2頁\共有51頁\編于星期二\3點

第一節(jié)

定量分析方法的分類與特點ChP所收載的關于藥物含量、溶出或釋放測定的定量分析方法主要包括：1.容量分析法，2.光譜分析法，3.色譜分析法一、容量分析法是將已知濃度的滴定液（標準物質(zhì)溶液）由滴定管滴加到被測藥物的溶液中，直至滴定液與被測藥物反應完全（通過適當方法指示），然后根據(jù)滴定液的濃度和被消耗的體積，按化學計量關系計算出被測藥物的含量。當前第3頁\共有51頁\編于星期二\3點（一）

容量分析法的特點與適用范圍1.特點：（1）方法簡便易行（2）方法耐用性高（3）測定結(jié)果準確（4）方法專屬性差2.適用范圍：化學原料藥的含量測定當前第4頁\共有51頁\編于星期二\3點（二）

容量分析法的計算問題1．

滴定度指每1ml規(guī)定濃度的滴定液所相當?shù)谋粶y藥物的質(zhì)量，ChP用mg表示。當前第5頁\共有51頁\編于星期二\3點A:被測藥物，B：滴定劑2．

滴定度（T）的計算當前第6頁\共有51頁\編于星期二\3點滴定度T例：用碘量法測定VitC(176.13）m(I2)=0.05mol/laMAbWAmBVm滴定液的摩爾濃度（mol/l)當前第7頁\共有51頁\編于星期二\3點T:藥典規(guī)定的摩爾濃度的滴定度3.含量計算（1）直接法ChP收載的容量分析法，均給出滴定度。根據(jù)稱取量W、消耗體積V、滴定度T，可求。實際工作與藥典要求存在差異，需要校正。當前第8頁\共有51頁\編于星期二\3點（2）間接滴定法1）生成物滴定法該法的百分含量計算與直接滴定方法同，只是在計算滴定度時需考慮被測藥物與中間化合物以及中間化合物與滴定劑三者之間的化學計量關系。2）剩余滴定法

藥物+定量過量的滴定液A，用另一滴定液B回滴；考慮空白實驗當前第9頁\共有51頁\編于星期二\3點二、

光譜分析法（一）紫外-可見分光光度法1．特點紫外-可見分光光度法是根據(jù)物質(zhì)分子對波長為200nm～760nm這一范圍的單色光輻射的吸收特性所建立起來的光譜分析方法。主要特點如下：（1）靈敏度高，可達10-4g/ml～10-7g/ml，適于低濃度試樣分析。（2）準確度高，相對誤差為2%～5%，適于對測定結(jié)果的準確度有較高要求的試樣的分析。（3）儀器價格較低廉，操作簡單，易于普及。（4）專屬性較差：通常不受一般雜質(zhì)的干擾，但對結(jié)構相近的有關物質(zhì)缺乏選擇性。當前第10頁\共有51頁\編于星期二\3點2．郎伯-比耳定律單色光輻射穿過被測物質(zhì)溶液時，在一定濃度范圍內(nèi)該物質(zhì)吸收的量與該物質(zhì)濃度、液層厚度成正比。A=Ecl注意：藥物分析中，E通常采用百分吸收系數(shù)：其物理意義為：當待測溶液濃度為每100ml中含待測藥物1g，液層厚度1cm時的吸光度值當前第11頁\共有51頁\編于星期二\3點3．儀器校正和檢定（1）波長：允許誤差為紫外光區(qū)±1nm，500nm處±2nm.（2）吸光度的準確度（3）雜散光的檢查（4）對溶劑的要求：使用范圍不能小于截止使用波長（5）測定法：需做空白對照當前第12頁\共有51頁\編于星期二\3點4．測定方法1)對照品比較法Cx為供試品溶液的濃度;Ax為供試品溶液的吸光度；CR為對照品溶液的濃度；AR為對照品溶液的吸光度。D為稀釋倍數(shù)。當前第13頁\共有51頁\編于星期二\3點標示量（%）：制劑含量相當于標示量的百分數(shù)

單位制劑的平均裝量，如：g/片，g/粒，g/ml,ml/mlB:標示量:單位制劑的標示量（g/片，g/粒，g/ml,ml/ml）當前第14頁\共有51頁\編于星期二\3點2）吸收系數(shù)法通常要求吸光系數(shù)大于100，注意儀器的校正和檢定。當前第15頁\共有51頁\編于星期二\3點3）計算分光光度法4）比色法當前第16頁\共有51頁\編于星期二\3點（二）

熒光分析法

方法特點與適用范圍（1）高靈敏度：較紫外-可見分光光度法高，可達10-12~10-10g/ml。（2）熒光自熄滅：濃度太大，溶液會用“自熄滅”作用，要求在低濃度下進行。（3）易受干擾：因靈敏度高，干擾因素多，必須做空白試驗。當前第17頁\共有51頁\編于星期二\3點2.干擾排除（1）溶劑：測定前檢查空白溶劑的熒光強度。（2）溶液：ⅰ溶液中待測藥物濃度不宜過高；ⅱ溶液中的懸浮物對光有散射作用；ⅲ溶液中的溶解氧有降低熒光的作用；ⅳ控制溶液的pH值。（3）玻璃量器：要求玻璃量器及樣品池保持高度潔凈。（4）溫度：測定時要求控制溫度一致當前第18頁\共有51頁\編于星期二\3點3．測定法與含量計算Cx為供試品溶液的濃度;Rx為供試品溶液的熒光強度；CR為對照品溶液的濃度；RXb為供試品溶液試劑空白的熒光強度；Rr為對照品溶液的熒光強度；Rrb為對照品溶液試劑空白的熒光強度。要求在0.5~2之間當前第19頁\共有51頁\編于星期二\3點（二）

色譜分析法

色譜分析法是一種分離分析方法，系根據(jù)混合物中各組分的色譜行為差異，將各組分從混合物中分離后再（在線、離線）選擇性對待組分進行分析的方法。方法特點與適用范圍（1）高靈敏度：最低檢出濃度可達10-15~10-12g/ml。（2）高專屬性：有效分離樣品中與待測組分結(jié)構相近的有關物質(zhì)，檢測信號具有較高專屬性，實現(xiàn)選擇性檢測。（3）高效能與高速度：廣泛用于復方制劑含量測定當前第20頁\共有51頁\編于星期二\3點

（一）高效液相色譜法

1．對儀器的一般要求２．系統(tǒng)適用性實驗（1）色譜柱的理論塔板數(shù)（n）（2）分離度（3）重復性（4）色譜峰的拖尾因子當前第21頁\共有51頁\編于星期二\3點

３.

測定法包括內(nèi)標法和外標法（1）內(nèi)標法加校正因子測定供試品中主成分含量：內(nèi)標法精密量取藥物對照品和內(nèi)標物，分別配成溶液，精密量取適量，混合配成校正因子測定用的對照溶液。當前第22頁\共有51頁\編于星期二\3點式中，As為內(nèi)標物質(zhì)的峰面積（峰高）；AR為對照品的峰面積（峰高）；Cs為內(nèi)標物的濃度；CR為對照品的濃度。

式中，AX為供試品的峰面積（峰高）；CX為供試品的濃度；f為校正因子；A’S和C’s分別為內(nèi)標物質(zhì)的峰面積（峰高）和濃度。當前第23頁\共有51頁\編于星期二\3點

（2）外標法測定供試品中主成分含量：外標法可分為標準曲線法和外標一點法。

1）標準曲線法：

2）外標一點法：當前第24頁\共有51頁\編于星期二\3點(二)

氣相色譜法

1.

對儀器的一般要求

2.

系統(tǒng)適應性實驗

3.

測定法當前第25頁\共有51頁\編于星期二\3點第二節(jié)

定量分析樣品的前處理方法

一、概述分析含金屬或含鹵素、氮、硫、磷、硒等特殊元素藥物分析的前處理方法。含金屬或鹵素的藥物，如葡萄糖酸銻鈉，硬脂酸鎂、碘苯酯、磺溴酞鈉等，處理方法因金屬或鹵素在分子中結(jié)合的牢固程度而異，如：有機鹵素藥物，所含鹵素原子均直接與碳原子相連，但不同藥物中鹵素所處的位置不同，則與碳原子結(jié)合的牢固程度就有差異。如果鹵素和芳環(huán)相連接，則結(jié)合牢固，與脂肪鏈的碳原子相連接，則結(jié)合不牢固；當前第26頁\共有51頁\編于星期二\3點

而含金屬的有機藥物，有兩種情況：

一是金屬原子不直接與碳原子相連，通常為有機酸及酚的金屬鹽或配位化合物，稱為含金屬的有機化合物，其分子結(jié)構中的金屬原子結(jié)合不夠牢固，在水溶液中既可離解出金屬離子，可在溶液中直接進行其金屬的鑒別或含量定；

二是金屬原子直接與碳原子以共價鍵相連接，結(jié)合狀態(tài)比較牢，稱為有機金屬藥物.在溶液中其金屬一般不能解離成離子狀態(tài)，經(jīng)適當處理，將其金屬轉(zhuǎn)變?yōu)檫m于分析的狀態(tài)（多轉(zhuǎn)變?yōu)闊o機的金屬鹽或離子），方可進行其金屬的鑒別或含量測定。

當前第27頁\共有51頁\編于星期二\3點一、不經(jīng)有機破壞的分析方法（一）

直接測定法凡金屬原子不直接與碳原子相連的含金屬藥物或某些C-M（金屬原子直接與碳原子相連）鍵結(jié)合不牢固的有機金屬藥物，在水溶液中可以電離，因而不需有機破壞，可直接選用適當?shù)姆椒ㄟM行測定。（二）經(jīng)水解后測定法

1．直接回流后測定法

2．用硫酸水解后測定法（三）經(jīng)氧化還原后測定法

堿性還原后測定當前第28頁\共有51頁\編于星期二\3點二、經(jīng)有機破壞的分析方法（一）濕法破壞

1．

硝酸-高氯酸法

2．

硝酸-硫酸法

3．

硫酸-硫酸鹽法

4．

其它濕法（二）干法破壞當前第29頁\共有51頁\編于星期二\3點

（三）氧瓶燃燒法氧瓶燃燒法（oxygenflaskcombustionmethod）系將有機藥物放入充滿氧氣的密閉的燃燒瓶中進行燃燒，并將燃燒所產(chǎn)生的欲測物質(zhì)吸收于適當?shù)奈找褐?，然后根?jù)欲測物質(zhì)的性質(zhì)，采用適宜的分析方法進行鑒別、檢查或測定含鹵素有機藥物或含硫、氮、硒等其它元素的有機藥物。

當前第30頁\共有51頁\編于星期二\3點

本法是快速分解有機物的簡單方法，它不需要復雜設備，就能使有機化合物中的待測元素定量分解成離子型。該方法被各國藥典所收載。

1．

儀器裝置燃燒瓶為500ml、1000ml、或2000ml磨口、硬質(zhì)玻璃錐形瓶，瓶塞應嚴密、空心、底部熔封鉑絲一根（直徑為1mm），鉑絲下端做成網(wǎng)狀或螺旋狀，長度約為瓶身長度的2∕3，如圖當前第31頁\共有51頁\編于星期二\3點2．

稱樣3．

燃燒分解操作法4．

吸收液的選擇當前第32頁\共有51頁\編于星期二\3點

（2）儀器與材料

①儀器裝置燃燒瓶為250、500、1000或2000ml無色、磨口、厚壁、硬質(zhì)玻璃錐型瓶；瓶塞空心，底部熔封鉑絲一根，下端呈螺旋狀或網(wǎng)狀當前第33頁\共有51頁\編于星期二\3點②稱樣用材料及稱樣

A.固體樣品無灰濾紙

B.液體樣品紙袋

C.軟膏類樣品：將適量樣品置不含被測成分的蠟油紙中包裹嚴密，外層再用無灰濾紙包裹當前第34頁\共有51頁\編于星期二\3點③樣品的燃燒點燃包有供試品的濾紙尾部，迅速放入燃燒瓶中，按緊瓶塞，加水少量封閉瓶口，燃燒完畢（應無黑色碎片），充分振搖，使生成的煙霧完全吸入吸收液中，放置15min，用水少量沖洗瓶塞及鉑絲，合并洗液及吸收液，同法另做空白試驗。然后按各藥品項下規(guī)定的方法進行鑒別、檢查或含量測定。當前第35頁\共有51頁\編于星期二\3點當前第36頁\共有51頁\編于星期二\3點④吸收液

A.作用：吸收液的作用是將樣品經(jīng)燃燒分解所產(chǎn)生的各種價態(tài)的鹵素、硫、氮、硒等，定量地吸收并轉(zhuǎn)變?yōu)橐欢ǖ谋阌跍y定的價態(tài)。③氧氣當前第37頁\共有51頁\編于星期二\3點B.吸收液的選擇氟水（HF）氯NaOH溶液（HCl)溴H2O2-NaOH(NaOH飽和溶液-SO2(Br2,HBr)碘NaOH飽和溶液-SO2(I2,HI)硫濃H2O2溶液硒硝酸溶液當前第38頁\共有51頁\編于星期二\3點（3）操作方法①燃燒瓶燃燒前的準備用洗液洗凈后，按各藥品項下的規(guī)定加入吸收液，將瓶口用水濕潤，小心急速地通入氧氣1min，立即用表面皿覆蓋瓶口。②樣品的準備取樣品適量，精密稱定后按規(guī)定方法包裹，固定于鉑絲下端的網(wǎng)內(nèi)或螺旋處。當前第39頁\共有51頁\編于星期二\3點（5）應用例磺溴酞鈉的含量測定ChP(2000)當前第40頁\共有51頁\編于星期二\3點燃燒分解O2HBr+S2-+SO4+…

HBr+S2-NaBr+Na2SO4

+H2O

NaOH,H2O2當前第41頁\共有51頁\編于星期二\3點溴

取本品約0.2g，照氧瓶燃燒法（附錄ⅦC）進行有機破壞，選用1000ml燃燒瓶，以0.4%氫氧化鈉溶液10ml，濃過氧化氫溶液0.5ml與水10ml作為吸收液，生成的煙霧完全吸入吸收液后，用水稀釋至100ml，煮沸5分鐘，放冷，加稀硝酸使成酸性，精密加硝酸銀滴定液（0.1mol/l）20ml，搖勻，再加硫酸鐵胺指示液2mL，用硫氰酸胺滴定液(0.1mol/L)滴定，并將滴定的結(jié)果用空白試驗校正。每1mL硝酸銀滴定液(0.1mol/L)相當于7.990mg的溴(Br)。當前第42頁\共有51頁\編于星期二\3點例碘苯酯的含量測定ChP（2010）原理碘苯酯系有機碘化物，用氧瓶燃燒分解，轉(zhuǎn)變?yōu)榈饣?，繼而氧化為游離的碘，并被定量地吸收于吸收液中，和氫氧化鈉反應，生成碘化物與碘酸鹽，加入溴-醋酸溶液，使全部轉(zhuǎn)變?yōu)榈馑猁}，過量的溴以甲酸及通空氣去除。加入碘化鉀，使與碘酸鹽反應析出游離碘，用硫代硫酸鈉液滴定，碘與淀粉結(jié)合所顯的藍色消失即為終點

當前第43頁\共有51頁\編于星期二\3點

取本品約20mg，精密稱定，照氧瓶燃燒法進行有機破壞，用氫氧化鈉試液2ml與水l0ml為吸收液，待吸收完全后，加溴醋酸溶液(取醋酸鉀10g，加冰醋酸適量使溶解，加溴0.4ml，再加冰醋酸使成1000m1)l0ml，密塞，振搖，放置數(shù)分鐘，加甲酸約lml，用水洗滌瓶口，并通入空氣流約3～5min以除去剩余的溴蒸氣，加碘化鉀2g，密塞，搖勻，用硫代硫酸鈉滴定液(0.02Mol/L)滴定，至近終點時，加淀粉指示液，繼續(xù)滴定至藍色消失，并將滴定的結(jié)果用空白試驗校正。每lml的硫代硫酸鈉滴定液(0.02mol/L)相當于1.388mg的C19H29IO2。當前第44頁\共有51頁\編于星期二\3點滴定度的計算放大反應2mol碘苯酯→1molI21molI2→1molNaIO+1molNaI1molNaIO→1/3molNaIO3+2/3molNaImolNaI+Br2→molNaIO3即2mol碘苯酯→2molNaIO3當前第45頁\共有51頁\