土壤中蛔蟲卵檢測

1當(dāng)前第1頁\共有29頁\編于星期二\4點

2006～2010年的全國土源性線蟲病監(jiān)測數(shù)據(jù)顯示，土源性線蟲病監(jiān)測點土壤中人活蛔蟲卵檢出率分別為25.8%，17.3%，19.0%，19.7%和14.7%，統(tǒng)計分析表明土壤人蛔蟲卵檢出率與人群蛔蟲感染率呈正相關(guān)，因此土壤中蛔蟲卵的污染情況是評價環(huán)境衛(wèi)生狀況的一項重要指標(biāo)。2當(dāng)前第2頁\共有29頁\編于星期二\4點原理采樣方法注意事項鑒別（受精與未受精、死活）3當(dāng)前第3頁\共有29頁\編于星期二\4點先用堿性溶液與土壤樣品充分混合以分離蛔蟲卵與土壤顆粒，再加入比重較大的液體使得比重較輕的蛔蟲卵漂浮在溶液表面，收集后鏡檢計數(shù)。4當(dāng)前第4頁\共有29頁\編于星期二\4點1、分別從土表及5厘米深處采取土樣，因為蟲卵存活時間與土層深度有關(guān)；2、在用人糞施肥的農(nóng)場和菜地可分別在隴上和犁溝中取土樣，同時還應(yīng)取20厘米深處的土樣，以確定蟲卵附著在根塊植物上的可能；3、為了測定不同局部氣候條件下蟲卵存活率，要從有日光照射和蔭蔽區(qū)采取土樣；4、廁所、庭院、廚房取表層土；5、每份土樣約50~100g。5當(dāng)前第5頁\共有29頁\編于星期二\4點1、土樣處理：剔除菜葉、樹皮等大雜物，壓碎土樣中的大顆粒；然后用孔徑3mm的銅篩和孔徑為2mm的銅篩過篩，收集過篩后的土樣。2、分離：取50ml大離心管，放入過篩后的土樣10g，加5%氫氧化鈉溶液至40或45ml刻度線。用橡皮塞緊塞管口，在振蕩器上振蕩15分鐘，可反復(fù)3～4次，待充分混合后，以2000rpm,離心4min。3、漂?。簵壢ド喜康臍溲趸c，加入飽和硝酸鈉溶液充分?jǐn)嚢杌靹颍?000rpm離心4min，再加飽和硝酸鈉溶液滿至管口，覆上18mm×18mm蓋玻片。4、計數(shù)：靜置15min后，將蓋玻片迅速翻轉(zhuǎn)取下，置于載玻片上鏡檢，同時再覆上第二張蓋玻片，如此反復(fù)，共計數(shù)3～4張蓋玻片。6當(dāng)前第6頁\共有29頁\編于星期二\4點7當(dāng)前第7頁\共有29頁\編于星期二\4點1、漂浮液的比重：漂浮液的比重是影響蛔蟲卵檢出率的重要因素，用比重大的溶液作為漂浮液效果較為理想，與飽和硫酸鋅、硫酸鎂、氯化鈉等鹽溶液相比，飽和硝酸鈉的比重最高，用作漂浮液蛔蟲卵的檢出率最高。2、土壤性質(zhì)：土壤性質(zhì)決定了蟲卵與土壤顆粒粘合的程度，蛔蟲卵檢出率沙土最高，壤土次之，粘土最低。3、離心的時間與次數(shù)：延長離心時間、提高離心速度或增加離心次數(shù)均可以提高蛔蟲卵與土壤顆粒的分離效果進(jìn)而提高檢出率。8當(dāng)前第8頁\共有29頁\編于星期二\4點受精蛔蟲卵呈短橢圓形或圓形，卵殼厚，雙線層，外包一層乳頭狀突起的蛋白膜，呈棕黃色。未受精蛔蟲卵與受精卵相比顯得狹長，多為長橢圓形，卵內(nèi)充滿大小不等油滴狀卵黃顆粒。9當(dāng)前第9頁\共有29頁\編于星期二\4點1.含一個卵細(xì)胞活受精蛔蟲卵，外包有乳頭狀突起的蛋白膜。2.脫蛋白膜活受精蛔蟲卵10當(dāng)前第10頁\共有29頁\編于星期二\4點3.含2個卵細(xì)胞活受精蛔蟲卵4.含4個卵細(xì)胞活受精蛔蟲卵11當(dāng)前第11頁\共有29頁\編于星期二\4點5.含8個卵細(xì)胞活受精蛔蟲卵6.含16個卵細(xì)胞活受精蛔蟲卵12當(dāng)前第12頁\共有29頁\編于星期二\4點7.桑椹期脫蛋白膜活受精蛔蟲卵8.含幼蟲的活受精蛔蟲卵13當(dāng)前第13頁\共有29頁\編于星期二\4點9.未受精蛔蟲卵外包鋸齒狀突起的蛋白膜10.脫蛋白膜的未受精蛔蟲卵14當(dāng)前第14頁\共有29頁\編于星期二\4點活的受精蛔蟲卵：內(nèi)含一個球形的卵細(xì)胞，卵殼兩端和卵細(xì)胞之間，有半月形的空隙，卵內(nèi)的卵黃顆粒清晰而致密；若卵內(nèi)含幼蟲，蟲體的前后部沒有顆粒，中部顆粒清晰而有金屬光澤，有立體感，鏡檢時，注視或輕壓，可見有輕微蠕動，強壓后，有時可擠出幼蟲。死受精蛔蟲卵(變性卵)：卵細(xì)胞移向一端，或向不定部位呈球狀收縮，致使卵殼兩端呈現(xiàn)有大小不等的半月形空隙；卵內(nèi)脂肪變性，形成空泡；卵細(xì)胞顆粒減少或消失；細(xì)胞質(zhì)渾濁，呈黑色或棕黑色；卵殼的一側(cè)或兩側(cè)向內(nèi)凹陷或破裂；只有蛋白質(zhì)殼，而缺內(nèi)容物。若卵內(nèi)含幼蟲，蟲體內(nèi)幾乎充滿顆粒，且模糊不清，無金屬光澤，缺乏立體感，久久不見蠕動，稍稍加熱或輕壓，不會蠕動；強壓時，雖能擠出幼蟲，但也不改變其原來的卷曲狀態(tài)。15當(dāng)前第15頁\共有29頁\編于星期二\4點11.外包蛋白膜的死受精蛔蟲卵，卵細(xì)胞移向一端12.脫蛋白膜的死受精蛔蟲卵，卵細(xì)胞移向一端16當(dāng)前第16頁\共有29頁\編于星期二\4點13.桑椹期脫蛋白膜死蛔蟲卵14.死受精蛔蟲卵，在卵細(xì)胞上部可見透明細(xì)胞質(zhì)17當(dāng)前第17頁\共有29頁\編于星期二\4點15.外包蛋白膜死受精蛔蟲卵，卵內(nèi)脂肪變性，細(xì)胞質(zhì)形成空泡。16.脫蛋白膜死受精蛔蟲卵，在卵細(xì)胞上部形成空泡。18當(dāng)前第18頁\共有29頁\編于星期二\4點17.卵細(xì)胞皺縮死受精蛔蟲卵18.空泡化死受精蛔蟲卵19當(dāng)前第19頁\共有29頁\編于星期二\4點19.卵細(xì)胞崩解的死受精蛔蟲卵20.卵細(xì)胞崩解的死受精蛔蟲卵20當(dāng)前第20頁\共有29頁\編于星期二\4點21.卵細(xì)胞不規(guī)則裂開的死受精蛔蟲卵22.卵胚變形的死受精蛔蟲卵21當(dāng)前第21頁\共有29頁\編于星期二\4點23.內(nèi)含物變形死受精蛔蟲卵24.卵殼內(nèi)幼蟲變形的死受精蛔蟲卵22當(dāng)前第22頁\共有29頁\編于星期二\4點正常發(fā)育過程中蛔蟲卵-活受精蛔蟲1.單細(xì)胞期活受精蛔蟲卵2.二細(xì)胞期活受精蛔蟲卵3.四細(xì)胞期活受精蛔蟲卵4.多細(xì)胞期活受精蛔蟲卵5.桑椹期卵（卵胚一端透明有光澤）6.蝌蚪期卵（卵胚的一部分凹陷）7.仔蟲期卵（可見幼蟲呈8字狀運動）8.不均等發(fā)育，卵內(nèi)一部分發(fā)育為仔蟲期，一部分為蝌蚪期23當(dāng)前第23頁\共有29頁\編于星期二\4點死受精蛔蟲卵1.卵細(xì)胞顆粒化2.卵細(xì)胞萎縮3.卵細(xì)胞空泡化4.卵細(xì)胞質(zhì)的周邊部透明化24當(dāng)前第24頁\共有29頁\編于星期二\4點1、在直徑10～12cm的玻璃平皿底部平鋪一層厚約0.5cm的脫脂棉；2、在脫脂棉上鋪一張直徑與平皿等大的普通濾紙；3、在濾紙上，再放一張直徑2cm的小濾紙，將蟲卵滴在小濾紙片上；4、加入2%福爾馬林液，以濕透濾紙和脫脂棉；5、放入在28～30℃溫箱中培養(yǎng)1個月觀察蟲卵死活。6、培養(yǎng)一個月后自皿中取出小濾紙片，將蟲卵置于載玻片上，滴加50％甘油溶液，使其透明后，根據(jù)形態(tài)，鑒定卵的死活。凡含有幼蟲的，都認(rèn)為是活卵，其他階段的或單細(xì)胞的，都判為是死卵。25當(dāng)前第25頁\共有29頁\編于星期二\4點美藍(lán)、伊紅、硼砂染色法原理美藍(lán)、伊紅、硼砂染液（簡稱）溶于水呈堿性。活蟲卵可以還原堿性染料，降低著色力，不易被染色。死蟲卵不能還原堿性染料，容易著色?；紫x卵外層蛋白膜容易被著色，染色前需脫去蛋白膜。配制將0.2g美藍(lán)加入100ml蒸餾水中煮沸10分鐘，加入硼砂0.5g，再煮沸10分鐘，冷卻后加入伊紅0.1g，待完全溶解后過濾備用，pH值為10～11，在室溫中可放置1.5年。26當(dāng)前第26頁\共有29頁\編于星期二\4點步驟1、脫蛋白膜將收集的蛔蟲卵加入30%次氯酸鈉，作用數(shù)分鐘，并經(jīng)常振蕩，再用蒸餾水洗2次，即可脫掉蛋白膜。27當(dāng)前第27頁\共有29頁\編于星期二\4點2、染色鏡檢

吸取蟲卵沉淀物一滴置于載玻片上，加染色液一滴，上覆蓋玻片，靜置3～5分鐘后鏡檢?；蛘?，吸取蟲卵沉淀物1滴放入小試管內(nèi)，加入染色液染30分鐘，再用蒸