色譜分析法引論

色譜分析法引論第一頁(yè)，共二十三頁(yè)，編輯于2023年，星期三色譜的來(lái)源和發(fā)展1色譜法的分類2色譜法的基本原理3第二頁(yè)，共二十三頁(yè)，編輯于2023年，星期三色譜法的來(lái)源和發(fā)展色譜法也叫層析法，它是一種高效能的物理分離技術(shù)，將它用于分析化學(xué)并配合適當(dāng)?shù)臋z測(cè)手段，就成為色譜分析法。1903年，俄國(guó)植物學(xué)家MikhailTswett最先發(fā)明。他采用填充有固體CaCO3細(xì)粒子的玻璃柱，將植物色素的混合物加于柱頂端，然后以溶劑淋洗，被分離的組份在柱中顯示了不同的色帶，他稱之為色譜。第三頁(yè)，共二十三頁(yè)，編輯于2023年，星期三(1）粗葉綠素+石油醚（2）石油醚流動(dòng)相相對(duì)運(yùn)動(dòng)固定相（吸附劑）CaCO3胡蘿卜素利用不同物質(zhì)葉黃素在流動(dòng)相與固定相葉綠素作用時(shí)的行為差異得到分離(吸附)

（3）小刀割開，用醇溶出

第四頁(yè)，共二十三頁(yè)，編輯于2023年，星期三1944年紙色譜20世紀(jì)50年代薄層色譜1952年氣相色譜20世紀(jì)60年代末高效液相色譜1975年離子色譜20世紀(jì)70年代末~80年代初毛細(xì)管電泳

第五頁(yè)，共二十三頁(yè)，編輯于2023年，星期三Agilent6280第六頁(yè)，共二十三頁(yè)，編輯于2023年，星期三

Tiselius,A.W.K.Martin,A.J.P.Synge,R.L.M.

1948年Nobel化學(xué)獎(jiǎng)1952年Nobel化學(xué)獎(jiǎng)吸附色譜與電泳分配色譜第七頁(yè)，共二十三頁(yè)，編輯于2023年，星期三色譜法的分類色譜分析法有很多種類，從不同的角度出發(fā)可以有不同的分類方法。

從兩相的狀態(tài)分類：色譜法中，流動(dòng)相可以是氣體，也可以是液體，由此可分為氣相色譜法（GC）、液相色譜法（LC）和超臨界體色譜（SFC）。固定相既可以是固體，也可以是涂在固體上的液體，由此又可將氣相色譜法和液相色譜法分為氣-液色譜、氣-固色譜、液-固色譜、液-液色譜。按固定相的形式分類：

柱色譜：固定相裝在色譜柱中；

紙色譜：利用濾紙作載體，吸附在紙上的水作固定相；

薄層色譜：將固體吸附劑在玻璃板或塑料板上制成薄層作固定相。第八頁(yè)，共二十三頁(yè)，編輯于2023年，星期三第九頁(yè)，共二十三頁(yè)，編輯于2023年，星期三3.按分離原理分類：

吸附色譜法：利用吸附劑（固定相一般是固體）表面對(duì)不同組分吸附能力的差別進(jìn)行分離的方法。

分配色譜法：利用不同組分在兩相間的分配系數(shù)的差別進(jìn)行分離的方法。

離子交換色譜：利用溶液中不同離子與離子交換劑間的交換能力的不同而進(jìn)行分離的方法。

空間排阻色譜法：利用多孔性物質(zhì)對(duì)不同大小的分子的排阻作用進(jìn)行分離的方法。第十頁(yè)，共二十三頁(yè)，編輯于2023年，星期三第十一頁(yè)，共二十三頁(yè)，編輯于2023年，星期三色譜法的基本原理利用物質(zhì)在流動(dòng)相與固定相兩相中的分配（吸附）系數(shù)差異而被分離，樣品中的組分在兩相中多次分配（吸附），分配（吸附）系數(shù)小的遷移速度快，先流出柱，分配（吸附）系數(shù)大的遷移速度慢，后流出柱，從而達(dá)到分離。用來(lái)描述分離過(guò)程樣品分子在兩相間的分配（吸附）的參數(shù)稱為分配系數(shù)（吸附平衡常數(shù)）。它是指在一定溫度和壓力下，組分在固定相和流動(dòng)相之間分配達(dá)平衡時(shí)的濃度之比值。

第十二頁(yè)，共二十三頁(yè)，編輯于2023年，星期三

1.薄層色譜

0.25mm厚纖維素，硅膠

玻板

2.紙色譜

濾紙液-液萃取為原理組份在兩相中反復(fù)分配因毛細(xì)作用而上升溶劑

溶質(zhì)在水相中各種存在形式總濃度分配比k=

c水/c有

溶質(zhì)在有機(jī)相中各種存在形式總濃度平面色譜第十三頁(yè)，共二十三頁(yè)，編輯于2023年，星期三常用吸附劑：硅膠、氧化鋁、聚酰胺、纖維素等。常用展開劑：極性弱強(qiáng)石油醚、環(huán)己烷、二硫化碳、四氯化碳、苯、甲苯、二氯甲烷、氯仿、乙醚、乙酸乙酯、丙酮、乙醇、甲醇、水、醋酸等。第十四頁(yè)，共二十三頁(yè)，編輯于2023年，星期三流動(dòng)相上升前沿

比移值

Rf1=Zx1/ZZx2

Rf2=Zx2/ZZx2

圖中kx2小→快→Rf2大

x1

kx1大→慢→Rf1小分開

Zx1

斑點(diǎn)位置Rf值定性斑點(diǎn)用熒光、光度積分值定量展開劑（有機(jī)溶劑）流動(dòng)相第十五頁(yè)，共二十三頁(yè)，編輯于2023年，星期三

比移值與組分，溫度，薄層板和展開劑等因素都有關(guān)系。Rf=0表示斑點(diǎn)在原點(diǎn)不動(dòng)，組分被吸附的太強(qiáng)。Rf=1表示斑點(diǎn)隨著展開劑遷移到前沿，組分不被吸附。Rf=0.2-0.8為可用，Rf=0.3-0.5為最佳，相鄰兩組份應(yīng)差0.05以上。第十六頁(yè)，共二十三頁(yè)，編輯于2023年，星期三柱色譜A組分被吸附弱，移動(dòng)快，先被洗脫出B組分被吸附強(qiáng)，移動(dòng)慢，后被洗脫出第十七頁(yè)，共二十三頁(yè)，編輯于2023年，星期三

樣品固定相檢測(cè)器流動(dòng)相柱tRAtRB濃度時(shí)間第十八頁(yè)，共二十三頁(yè)，編輯于2023年，星期三色譜圖隨時(shí)間t記錄色譜流出曲線，即色譜圖?；€：沒(méi)有被測(cè)組分通過(guò)檢測(cè)器時(shí)所得到的信號(hào)-時(shí)間曲線稱為基線。

死時(shí)間t0

：不與固定相作用的物質(zhì)從進(jìn)樣到出現(xiàn)峰極大值時(shí)的時(shí)間，保留時(shí)間tR

：試樣從進(jìn)樣到出現(xiàn)峰極大值時(shí)的時(shí)間。它包括組份隨流動(dòng)相通過(guò)柱子的時(shí)間t0和組份在固定相中滯留時(shí)間。調(diào)整保留時(shí)間tR′：某組份的保留時(shí)間扣除死時(shí)間后的保留時(shí)間，它是組份在固定相中的滯留時(shí)間。第十九頁(yè)，共二十三頁(yè)，編輯于2023年，星期三基線：無(wú)試樣通過(guò)檢測(cè)器時(shí)，檢測(cè)的信號(hào)即為基線。死時(shí)間

t0

柱出口處流動(dòng)相的體積流速死體積V0=t0·F0

保留時(shí)間

tR

（即柱溫和大氣壓的載氣流速）保留體積

VR=tR·F0

校正保留體積

VR0=tR·FC調(diào)整保留時(shí)間tR′=

tR

–

t0柱內(nèi)平均體積流速調(diào)整保留體積VR′=

VR

–V0

=tR′·F0凈保留體積VR0′

=tR′

·FC

第二十頁(yè)，共二十三頁(yè)，編輯于2023年，星期三峰高h(yuǎn)：組分在柱后出現(xiàn)濃度極大時(shí)的檢測(cè)信號(hào)，即色譜峰頂至基線的距離。區(qū)域?qū)挾龋河糜诤饬恐Ъ胺从成V操作條件下的動(dòng)力學(xué)因素。通常有三種表示方法。

標(biāo)準(zhǔn)偏差：0.607倍峰寬處的一半。

半峰寬W1/2：峰高一半處的峰寬。

峰底寬W：色譜峰兩側(cè)拐點(diǎn)上切線與基線的交點(diǎn)間的距離。W=4第二十一頁(yè)，共二十