細(xì)菌性疫苗的生產(chǎn)工藝

細(xì)菌性疫苗的生產(chǎn)工藝第一頁(yè)，共十八頁(yè)，編輯于2023年，星期三細(xì)菌性疫苗對(duì)某一特定傳染病產(chǎn)生或增加人工免疫力的制劑,包括死亡的微生物(死毒)、活的但減弱其毒性的(弱毒)以及活的毒性充分的(強(qiáng)毒)三種。一般分為活菌苗及死菌苗兩類(lèi)。第二頁(yè)，共十八頁(yè)，編輯于2023年，星期三分類(lèi)活菌苗：常用者有預(yù)防結(jié)核病的卡介（BCG）、鼠疫活菌苗等。制備活菌苗的關(guān)鍵在于獲得減毒或無(wú)毒菌株，但該菌株應(yīng)保持免疫原性?；罹缃臃N后，在體內(nèi)有一定的生長(zhǎng)繁殖能力，類(lèi)似經(jīng)型或隱性感染。一般只需接種一次，且需量較小，但引起的免疫效果好，且能維持較長(zhǎng)時(shí)間。死菌苗：用化學(xué)或物理方法將病原菌殺死后仍保持免疫原性可制備死菌苗。常用的死菌苗有霍亂、傷寒、副傷寒甲、乙混合菌苗、百日咳菌苗等。死菌苗大多需要多次接種才能獲得較好的免疫效果。為減少死菌苗的接種次數(shù)，現(xiàn)常將不同種類(lèi)的死菌苗作合理混合，制成聯(lián)合菌苗，如傷寒菌、甲、乙型副傷寒菌混合的三聯(lián)菌苗。第三頁(yè)，共十八頁(yè)，編輯于2023年，星期三第四頁(yè)，共十八頁(yè)，編輯于2023年，星期三第五頁(yè)，共十八頁(yè)，編輯于2023年，星期三類(lèi)毒素又稱(chēng)減力毒素，變性毒素。一些經(jīng)變性或經(jīng)化學(xué)修飾而失去原有毒性而仍保留其免疫原性的毒素。醫(yī)學(xué)微生物學(xué)中將類(lèi)毒素定義為：將細(xì)菌外毒素用0.3%~0.4%甲醛處理脫去其毒性，保存其免疫原性即為類(lèi)毒素第六頁(yè)，共十八頁(yè)，編輯于2023年，星期三第七頁(yè)，共十八頁(yè)，編輯于2023年，星期三菌種的選擇菌種必須具有特定的抗原性，能使機(jī)體誘發(fā)特定的免疫反應(yīng)；菌種應(yīng)具有典型的形態(tài)、培養(yǎng)特性和生化特性，并在傳代的過(guò)程中，能長(zhǎng)期保持這些特性；菌種應(yīng)易于在人工培養(yǎng)基上培養(yǎng)；制備滅活菌苗，菌種在培養(yǎng)過(guò)程中應(yīng)產(chǎn)生較小的毒性；制備活菌苗，菌種在培養(yǎng)過(guò)程中應(yīng)無(wú)恢復(fù)原毒性的現(xiàn)象；制備毒素，菌種在培養(yǎng)過(guò)程中應(yīng)能產(chǎn)生大量的典型毒素。制備菌苗和類(lèi)毒素的菌種，應(yīng)該是生物學(xué)特性穩(wěn)定，能獲得安全性好、效力高的生物制品的菌種。第八頁(yè)，共十八頁(yè)，編輯于2023年，星期三培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)要求除碳源、氮源和各種無(wú)機(jī)鹽類(lèi)等培養(yǎng)微生物所需要的一般營(yíng)養(yǎng)要素外，由于某些微生物生理上的特殊性，往往需要某些特殊營(yíng)養(yǎng)物才能生長(zhǎng)。例如結(jié)核桿菌需以甘油作為碳源；有些分解糖類(lèi)能力較差的梭狀芽孢桿菌需以氨基酸作為能量及碳與氮的來(lái)源。培養(yǎng)致病菌時(shí)，在培養(yǎng)基中除應(yīng)含有一般碳源、氮源和無(wú)機(jī)鹽成分外，往往還需添加某種生長(zhǎng)因子。第九頁(yè)，共十八頁(yè)，編輯于2023年，星期三菌種制備菌種使用前應(yīng)進(jìn)行培養(yǎng)特性、血清學(xué)特性、毒力試驗(yàn)、毒性試驗(yàn)、抗原性試驗(yàn)、免疫力性試驗(yàn)的檢定。

一代種子：凍干菌種接種于適宜的培養(yǎng)基上，于37℃±1℃培養(yǎng)一定的時(shí)間。二代種子：一代種子接種于適宜的培養(yǎng)基上，于37℃±1℃進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)。菌種開(kāi)啟后用于生產(chǎn)時(shí)不能超過(guò)規(guī)定的傳代數(shù)。第十頁(yè)，共十八頁(yè)，編輯于2023年，星期三培養(yǎng)根據(jù)不同的菌種和要求選擇適合的培養(yǎng)基，常用的培養(yǎng)方法有固體培養(yǎng)法和液體深層培養(yǎng)法。大規(guī)模生產(chǎn)多采用液體深層通氣培養(yǎng)法。細(xì)菌培養(yǎng)時(shí)應(yīng)注意下述4種因素的控制。⒈氣體各種細(xì)菌在生長(zhǎng)時(shí)對(duì)癢的要求不同。在培養(yǎng)特定的細(xì)菌時(shí)，必須嚴(yán)格控制培養(yǎng)基環(huán)境的氧分壓。⒉溫度致病菌的最適培養(yǎng)溫度大都接近人體的正常溫度（35~37℃）。在制備菌苗時(shí)，必須先找出菌種的最適培養(yǎng)溫度，在生產(chǎn)工藝中加以嚴(yán)格控制，以獲得最大的產(chǎn)量和保持細(xì)菌的生物學(xué)特性和抗原性。第十一頁(yè)，共十八頁(yè)，編輯于2023年，星期三⒊PH值同一細(xì)菌能在不同的PH值下生長(zhǎng)。培養(yǎng)的PH值不同，細(xì)菌的代謝產(chǎn)物有可能不同。因此，在培養(yǎng)細(xì)菌時(shí)，應(yīng)嚴(yán)格控制培養(yǎng)基的PH值，以使它們按預(yù)定的要求生長(zhǎng)、繁殖和產(chǎn)生代謝產(chǎn)物。⒋光線(xiàn)制備生物制品的細(xì)菌，一般都不是光合細(xì)菌，不需要光線(xiàn)的照射。故培養(yǎng)不應(yīng)在陽(yáng)光或X射線(xiàn)下進(jìn)行，以防止核糖核酸分子的變異，從而改變細(xì)菌的生物學(xué)特性。第十二頁(yè)，共十八頁(yè)，編輯于2023年，星期三收菌固體培養(yǎng)法培養(yǎng)的細(xì)菌，在采集時(shí)應(yīng)逐瓶檢驗(yàn)，污染雜菌的廢棄，未污染的將軍苔刮入含PBS的大瓶中。液體培養(yǎng)時(shí)，將培養(yǎng)液直接收集到大瓶或其他容器中，逐瓶進(jìn)行無(wú)菌試驗(yàn)，污染雜菌的廢棄。PBS:全稱(chēng)PhosphateBufferedSaline.在醫(yī)學(xué)詞匯中表示磷酸鹽緩沖液，用于分子克隆及細(xì)胞培養(yǎng)，pH=7.4,與人體血液等滲，主要成分為磷酸二氫鉀、磷酸氫二鈉、氯化鈉及氯化鉀。°°第十三頁(yè)，共十八頁(yè)，編輯于2023年，星期三殺菌滅活疫苗制劑在制成原液后需要用物理或化學(xué)方法殺菌，各種菌苗所用的殺菌方法不相同，但殺菌的總目標(biāo)是徹底殺死細(xì)菌而又不影響菌苗的防病效力。以傷寒菌苗為例，可用加熱殺菌、甲醛溶液殺菌、丙酮?dú)⒕确椒⑺纻畻U菌。我國(guó)多采用甲醛作為殺菌劑，甲醛的終濃度不超過(guò)1％（體積分?jǐn)?shù)，ml/ml），置37℃一定時(shí)間或2~8℃一定時(shí)間殺菌。殺菌后的原液還要進(jìn)行無(wú)菌檢查，方法是：取樣接種于不含瓊脂的硫乙醇酸鹽培、養(yǎng)基瓊脂斜面及堿性置各1支，置37℃培養(yǎng)5天，應(yīng)無(wú)本菌生長(zhǎng)。第十四頁(yè)，共十八頁(yè)，編輯于2023年，星期三原液檢定與保存1、濃度測(cè)定應(yīng)按《中國(guó)細(xì)菌濁度標(biāo)準(zhǔn)》測(cè)定濃度2、鏡檢涂片染色鏡檢，至少觀察10個(gè)視野，應(yīng)該菌形典型且無(wú)雜菌。3、凝集試驗(yàn)用相應(yīng)血清做定性凝集試驗(yàn)，呈陽(yáng)性反應(yīng)。4、無(wú)菌試驗(yàn)需氧菌、厭氧菌及真菌試驗(yàn)呈陽(yáng)性。5、免疫力試驗(yàn)以一定菌數(shù)的劑量免疫小鼠，再用致病菌攻擊小鼠，觀察并記錄小鼠死亡數(shù)，計(jì)算ED50或LD50結(jié)果，達(dá)到要求即合格。6、原液保存2~8℃保存。自采集之日起有效期一般為3～4年第十五頁(yè)，共十八頁(yè)，編輯于2023年，星期三稀釋、分裝和凍干經(jīng)殺菌的溶液，一般用含防腐劑的緩沖生理鹽水稀釋至所需濃度，然后在無(wú)菌條件下分裝于適當(dāng)?shù)娜萜?，封口后?～10℃保存，直至使用。有些菌苗，特別是活菌苗，亦可于分裝后冷凍干燥，以延長(zhǎng)它們的有效期。第十六頁(yè)，共十八頁(yè)，編輯于2023年，星期三ED50（半數(shù)有效量）：指在量反應(yīng)中能引起百分之五十最大反應(yīng)強(qiáng)度