五芝液抗腫瘤作用的藥理研究

經(jīng)典word整理文檔，僅參考，轉(zhuǎn)Word此處可刪除頁(yè)眉頁(yè)腳。本資料屬于網(wǎng)絡(luò)整理，如有侵權(quán)，請(qǐng)聯(lián)系刪除，謝謝！一、五芝液體內(nèi)抗腫瘤作用與免疫調(diào)節(jié)作用20世紀(jì)70年代，日本學(xué)者最先發(fā)現(xiàn)靈芝提取物和靈芝多糖體內(nèi)給藥對(duì)動(dòng)物移植性腫瘤有顯著的抑制作用，并提出靈芝的抗腫瘤作用是“宿主中介性的”，可能是通過(guò)增強(qiáng)機(jī)體的免疫功能而實(shí)現(xiàn)的。經(jīng)一系列研究證明：靈芝提取物及其所含多糖肽灌胃可抑制小鼠移植性腫瘤S180、人肺癌（PG）、Lewis肺癌的生S180或人白血病細(xì)胞的培養(yǎng)液中，對(duì)腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)無(wú)抑制作用。提示靈芝制劑增強(qiáng)機(jī)體的抗腫瘤免疫力可能是其中重要的一環(huán)。隨后的研究證明，靈芝多糖肽可直接作用于單核巨噬細(xì)胞、樹(shù)突狀細(xì)胞和細(xì)胞毒T-細(xì)胞，增強(qiáng)其功能。促進(jìn)TNF-αmRNA和IFN-γmRNA表達(dá)，增加TNF-α和IFN-γ生成，也促進(jìn)IL-1和IL-6等細(xì)胞因子生成，增強(qiáng)細(xì)胞因子的活性，從而抑制腫瘤細(xì)胞增殖，誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡，最終殺死腫瘤細(xì)胞。加入靈芝多糖或12.8μg/ml）可明顯促進(jìn)DC表面DC11c及I-A/I-E增加IL-1240亞基mRNADC誘導(dǎo)的混合淋巴反應(yīng)（MLC），表明靈芝多糖能促進(jìn)DC的成P815腫瘤細(xì)胞裂解物沖擊致敏小鼠骨髓來(lái)源的DC誘導(dǎo)產(chǎn)生的特異性細(xì)胞毒T淋巴細(xì)CTL及細(xì)胞培養(yǎng)上清液，以釋放入CTL與P815腫瘤細(xì)胞共培養(yǎng)體系細(xì)胞培養(yǎng)上清CTL的特異性殺傷RT-PCR法檢測(cè)CTL中IFN-γ及顆粒酶B的mRNAELISA法檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)上清液中IFN-WesternBlot法檢測(cè)CTL表達(dá)的顆粒酶B的蛋白含量。結(jié)果顯示：當(dāng)DC經(jīng)P815腫瘤細(xì)胞凍融抗原沖擊致敏CTL對(duì)P815腫瘤細(xì)胞具有殺傷作用，靈芝多糖（Gl-PS）（0.8、3.2或12.8μg/ml）可增強(qiáng)此作用，使釋放入培養(yǎng)上清液中的LDH活性顯著增強(qiáng)。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，同上濃度的靈芝多糖可明顯增加DC誘導(dǎo)CTL的IFN-γ蛋白含量增加。上述濃度的靈芝多糖還可明顯增加DC誘導(dǎo)的CTL的顆粒酶BmRNADC成熟階段，增強(qiáng)DC對(duì)腫瘤抗原的捕獲、處理、遞呈能力，增強(qiáng)DC誘導(dǎo)的特異性CTL活化CTL的mRNAIFN-γ顆粒酶參與促進(jìn)CTL及NK酶家族中，以顆粒酶B功能最強(qiáng)。靈芝多糖促進(jìn)CTL的顆粒酶BmRNACTL的細(xì)胞毒活性有關(guān)。二、五芝液中靈芝多糖增強(qiáng)細(xì)胞因子誘導(dǎo)的殺傷細(xì)胞活性繼應(yīng)用淋巴因子活化的殺傷細(xì)胞（LAK細(xì)胞）于腫瘤的過(guò)繼免疫治療之后，將人外周血淋巴細(xì)胞在體外與多種細(xì)胞因子共培養(yǎng)后，獲得一群異質(zhì)細(xì)胞即細(xì)胞因且明顯優(yōu)于LAK細(xì)胞，比LAK細(xì)胞更適合于腫瘤的過(guò)繼免疫治療。是新一代抗腫瘤過(guò)繼細(xì)胞免疫治療的首CIK細(xì)胞[小鼠脾細(xì)胞培養(yǎng)中加入CD3單IL-1(100Ku/L)]，和400μg/ml）后，可明顯降低CIK細(xì)胞培養(yǎng)中的白介素-2（IL-2）和抗CD3單抗的用量（分別為未加靈芝多糖的對(duì)照組的75%和CIKCIK細(xì)胞在體外殺傷YAC-1和P815腫瘤細(xì)胞的殺傷率亦與常規(guī)對(duì)照組無(wú)明顯差異。同樣將此CIK細(xì)胞靜脈輸注給荷S180或荷H22肝肉瘤小鼠后，其體內(nèi)抗腫瘤療效與常規(guī)CIK細(xì)胞治療組比較亦無(wú)差異。研究者還發(fā)現(xiàn)，靈芝多糖在降低抗CD3單抗和IL-2用量75%的條件下，能促進(jìn)CIK細(xì)胞顆粒酶B以及穿孔素mRNA糖通過(guò)增加顆粒酶B和穿孔素的表達(dá)，從而增強(qiáng)CIK細(xì)胞殺傷腫瘤細(xì)胞的活性。研究者的試驗(yàn)還證明，淋巴細(xì)胞表面的補(bǔ)體3型（CR3）受體介導(dǎo)靈芝多糖對(duì)CIK細(xì)胞的作用。關(guān)于免疫細(xì)胞上靈芝多糖作用的受體還有一些研究。ChenTLRPTK/PLCγl/蛋白激酶C（PKC）/絲裂原激活的蛋白激酶1(MEK1)/胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶(ERK)，PTK(Sac)/Racl/PAK/p38和PIK/Racl/PAK/JNKIL-1產(chǎn)生。表達(dá)蛋白及其mRNA，抑制DC的內(nèi)吞活性；此外，經(jīng)PS-G作用后的DC細(xì)胞刺激T細(xì)胞的活性增強(qiáng)，促進(jìn)T細(xì)胞分泌IFN-γ、IL-10?？筎LR4TLR4抗體可抑制PS-G誘導(dǎo)的IL-12、IL-10的分泌，提示PS-G作用于DC的信號(hào)通路中，TLR4發(fā)揮了關(guān)鍵作用。一項(xiàng)研究表明，熒光胺標(biāo)記的黃芪多糖（fl-APS）以TLR4檢測(cè)顯示分子量為5.849X105競(jìng)爭(zhēng)性地抑制fl-APS示Gl-PS能夠結(jié)合巨噬細(xì)胞膜表面的TLR4步研究證明，GL-PS誘導(dǎo)Balb/c小鼠腹腔巨噬細(xì)胞產(chǎn)生C3H/HeJ小鼠腹腔巨噬細(xì)胞分泌IL-1β，而IFN-γ仍可刺激IL-1β的分泌；由于C3H/HeJ小鼠的TLR4基因有一個(gè)堿基突變導(dǎo)致TLR4受體胞漿區(qū)一個(gè)氨基酸由脯氨酸突變導(dǎo)致TLR4受體胞漿區(qū)一個(gè)氨基酸由脯氨酸突變成組氨酸，使TLR4喪失信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)功能。因此提示GL-PS可能通過(guò)TLR4激活巨噬細(xì)胞。另外，發(fā)現(xiàn)兔抗小鼠Ig抗體明顯抑制Gl-PS誘導(dǎo)的小鼠脾細(xì)胞增殖（Gl-PS可顯著促進(jìn)純化的小鼠B細(xì)胞而非T細(xì)胞增殖），而對(duì)照正常兔IgG則無(wú)此作用?？剐∈驣g抗體濃度即使達(dá)到30μg/ml，對(duì)ConA誘導(dǎo)的脾細(xì)胞增殖沒(méi)有顯著影響，結(jié)果說(shuō)明小鼠B細(xì)胞膜表面Ig分子參與Gl-PS對(duì)BB細(xì)胞表面Gl-PS受體分子之一。比較Balb/c和C3H/HeJ小鼠脾細(xì)胞對(duì)Gl-PS的反應(yīng)性，發(fā)現(xiàn)與LPS類似，Gl-PS可明顯刺激Balb/c小C3H/HeJ小鼠脾細(xì)胞無(wú)刺激作用，表明TLR4參與Gl-PS對(duì)小鼠BGl-PS促進(jìn)BTLR4是B細(xì)胞和巨噬細(xì)胞表面重要的Gl-PS受體分子。三、五芝液中靈芝成分抑制體外培養(yǎng)的腫瘤細(xì)胞增殖及其機(jī)制近十余年發(fā)現(xiàn)靈芝及其有效成分對(duì)體外培養(yǎng)的腫瘤細(xì)胞具有抑制作用。如發(fā)現(xiàn)靈芝（赤芝、紫芝、松杉靈芝）子實(shí)體提取物抑制體外培養(yǎng)的人乳腺癌細(xì)胞多糖）和GLE-2（主要含三萜類）抑制人結(jié)腸癌細(xì)胞SW480增殖，且后者的作用強(qiáng)于前者。從靈芝子實(shí)體中提取的三種羊毛甾烷型三萜lucialdehydeB和C對(duì)Lewis和Meth-A腫瘤細(xì)胞株具有細(xì)胞毒作用。lucialdehydeC對(duì)試驗(yàn)細(xì)胞株的細(xì)胞和Meth-A這4種腫瘤細(xì)胞的ED為10.7、4.7、7.1和3.8μg/ml。50一項(xiàng)研究是觀察富含三萜組分的靈芝提取物對(duì)26種人癌細(xì)胞株的抗增殖活性，結(jié)果發(fā)現(xiàn)6種造血細(xì)胞株ED50（63）、K562（50）、Blin-1（38）、Nalm-6（30）和停止在G期或M期，以HL-60細(xì)胞最為明顯。其中42種造血細(xì)胞株（HL-60、Blin-1、U937和RPMI8226）可見(jiàn)21%-92%的細(xì)胞凋亡。在靈芝提取物作用下，HL-60細(xì)胞變成多核細(xì)胞，且其DNA含量增加。結(jié)果多發(fā)性骨髓瘤有明顯抑制作用。靈芝孢子粉的乙醇提取物Ⅰ和Ⅲ顯著抑制Hela細(xì)胞生長(zhǎng)。提取物Ⅲ能阻斷細(xì)胞周期從G期S期的轉(zhuǎn)變，1并使細(xì)胞內(nèi)鈣水平顯著降低。提示提取物可能通過(guò)影響細(xì)胞周期和細(xì)胞內(nèi)鈣信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)而抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)。從靈芝菌絲中制備的富含三萜組分WEES-G6在體外可抑制人肉瘤Huh-7細(xì)胞生長(zhǎng)。用WEES-G6處理細(xì)胞可是細(xì)胞生長(zhǎng)調(diào)節(jié)蛋白PKCp38MAP激酶的活化，并因此延長(zhǎng)細(xì)胞周期的G期，抑制肝肉2瘤細(xì)胞生長(zhǎng)。靈芝乙醇提取物可劑量和時(shí)間依賴性地抑制MCF-7腫p21/Waf1和下調(diào)cyclinD有關(guān)。此外，它還可通過(guò)上調(diào)前凋亡蛋白Bax誘導(dǎo)1MCF-7細(xì)胞凋亡。從鹿角靈芝提取的一種四環(huán)三萜Ganoderiol可誘導(dǎo)高度增殖的腫瘤細(xì)胞株老化，使HepG2、Huh7和K562Hep3B和正常成纖維細(xì)胞MRC5Hep3BGolF處理體外培養(yǎng)的癌細(xì)胞，導(dǎo)致DNA合成迅速抑制，細(xì)胞周期停止進(jìn)行，24HepG2細(xì)胞生長(zhǎng)仍可恢復(fù)。用30μmol/LGolF連續(xù)處理HepG2細(xì)胞18天之后，可見(jiàn)超過(guò)50%的細(xì)胞變大、變平，老化細(xì)胞呈現(xiàn)β-半乳糖苷酶陽(yáng)性。GolF在體外可抑制拓?fù)洚悩?gòu)酶，這可能與其抑制細(xì)胞DNA合成GolF酶EKR活化以及上調(diào)周期素（cyclin）依賴的蛋白激酶抑制因子p16，推測(cè)這與引起細(xì)胞周期停滯以及觸發(fā)HepG2引起腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)停滯和老化提示它有潛在的抗腫瘤作用。鹿角靈芝的甲醇提取物抑制人肝肉瘤HuH-7細(xì)胞、結(jié)腸肉瘤HCT-116細(xì)胞、Burkitt’s淋巴瘤Raji細(xì)胞（IC）為82.2-135.3μg/ml。一些成分在體外還能50抑制拓?fù)洚悩?gòu)酶Ⅰ和Ⅱα的活性。其中最強(qiáng)的是羊毛甾烷三萜類的靈芝酸X（GAX；3α-hydroxy-15α-acetoxy-lanosta-7，9（11），24-trien-26-oicacid），GAX對(duì)HuH-7、HCT-116、Raji、HL-60細(xì)胞的IC分別為50和GAX處理人肝肉瘤HuH-7細(xì)胞立即引起DNAERK和JNK絲裂原-活化蛋GAX誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡的分子機(jī)制與其促使染色體DNA斷裂、降低Bcl-xL水平、使線粒體膜破裂、促使細(xì)胞質(zhì)中細(xì)胞色素C釋放和caspase-3活化有關(guān)。該認(rèn)為，GAX抑制拓?fù)洚悩?gòu)酶及使敏感細(xì)胞凋亡與其抗腫瘤作用有關(guān)。結(jié)腸癌細(xì)胞HT-29增殖，并抑制裸鼠移植性結(jié)腸腫瘤的這些作用與細(xì)胞周期的G/G期相阻滯01有關(guān)。研究者發(fā)現(xiàn)，GLT誘導(dǎo)結(jié)腸癌細(xì)胞中出現(xiàn)自吞噬空泡，并上調(diào)Beclin-1表達(dá)（增加1.3倍）以及LC-3蛋白表達(dá)（增加7.3倍），移植性結(jié)腸腫瘤模型裸鼠Beclin-1增加3.9倍，LC-3增加1.9倍。自吞噬是由p38抑制劑SB202190可引起癌細(xì)胞自吞噬，并使Beclin-1和LC-3表達(dá)分別增加1.2倍和7.4倍。GLT抑制結(jié)腸癌細(xì)胞P38MAPK磷酸化可達(dá)60%。通過(guò)用流式細(xì)胞儀測(cè)量細(xì)胞活力、細(xì)胞周期。用DNAWestern-blot法檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)凋亡蛋白和激酶的變化，研究靈芝子實(shí)體提取物和甲醇提取物經(jīng)柱層析半純化的組分誘導(dǎo)NB4人白血病細(xì)胞的毒性及凋亡作用。結(jié)果可見(jiàn)，靈芝子實(shí)體提取物稍微降低NB4細(xì)胞活力的誘導(dǎo)NB4細(xì)胞的DNA斷裂。甲醇提取物半純化組分在稀釋到15%或著降低NB4白血病細(xì)胞的活力并伴隨誘導(dǎo)DNA斷裂和細(xì)胞凋亡。其E3組分稀釋到15%的初始濃度引起與Bcl-2/Bax相關(guān)的p53基因水平降低，以及非磷酸化蛋白激酶ERK(ERK1、2)兩者水平降低。表明靈芝的活性組分可引起人白血病細(xì)胞凋亡并使信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)激酶（Akt和癌細(xì)胞AGS可見(jiàn)AGSEGL引起AGS細(xì)胞凋亡。EGL處理可引起死亡受體相關(guān)蛋5以及TNF相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體的表達(dá)，它們?cè)龠M(jìn)一步激活caspase-8活化